儀器分析第4講高效液相色譜法

3-1高效液相色譜法的特點(diǎn)1.高效液相色譜法概述1960年代，由于氣相色譜對高沸點(diǎn)有機(jī)物分析的局限性，為了分離蛋白質(zhì)、核酸等不易汽化的大分子物質(zhì)，氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上第一臺高效液相色譜儀，開啟了高效液相色譜的時代。

1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實(shí)踐》一書，標(biāo)志著高效液相色譜法（HPLC）正式建立。現(xiàn)在是1頁\一共有82頁\編輯于星期二它是在經(jīng)典液相色譜基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用了高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測器，因而具備速度快、效率高、靈敏度高、操作自動化的特點(diǎn)．為了更好地了解高效液相色譜法優(yōu)越性，現(xiàn)從兩方面進(jìn)行比較：一、概述現(xiàn)在是2頁\一共有82頁\編輯于星期二

1．高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法

高效液相色譜法的最大優(yōu)點(diǎn)在于高速、高效、高靈敏度、高自動化．液體的流動相高速通過時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對流動相施加高壓15~35Mpa，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一?，F(xiàn)在是3頁\一共有82頁\編輯于星期二高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法的比較

經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法粒徑(μm)75-6003-50（常用5-10）柱前壓力(atm)0.01-1.020-300分析時間(h)1-200.05-1.0色譜柱長度(cm)50-2002-30柱效(塊/m)2-50104-105樣品用量(g)1-1010-6-10-2現(xiàn)在是4頁\一共有82頁\編輯于星期二2．高效液相色譜法與氣相色譜法（l）氣相色譜法分析對象只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化合物，它們僅占有機(jī)物總數(shù)的20％．對于占有機(jī)物總數(shù)近80％的那些高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)，目前主要采用高效液相色譜法進(jìn)行分離和分析．

現(xiàn)在是5頁\一共有82頁\編輯于星期二

(2)高效GC1000塔板/m(填充柱）HPLC3W塔板/m現(xiàn)在是6頁\一共有82頁\編輯于星期二(3)氣相色譜一般都在較高溫度下進(jìn)行的，而高效液相色譜法則經(jīng)?？稍谑覝貤l件下工作．總之，高效液相色譜法是吸取了氣相色譜與經(jīng)典液相色譜優(yōu)點(diǎn)，并用現(xiàn)代化手段加以改進(jìn)，因此得到迅猛的發(fā)展．現(xiàn)在是7頁\一共有82頁\編輯于星期二高效液相色譜與氣相色譜的比較

GCHPLC應(yīng)用范圍熱穩(wěn)定、低沸點(diǎn)的物質(zhì)熱不穩(wěn)定、高沸點(diǎn)、離子型的物質(zhì)熱力學(xué)理論較成熟正在發(fā)展中分析成本低高分離能力與柱的類型有關(guān)較高現(xiàn)在是8頁\一共有82頁\編輯于星期二液相色譜儀器

highperformanceliquidchromatograph現(xiàn)在是9頁\一共有82頁\編輯于星期二3.高效液相色譜法的應(yīng)用

1.藥物分析

約80%的藥物都能用高效液相色譜進(jìn)行分離和純化。特別是手性藥物的分離分析。2.食品分析①食品本身組成,特別是營養(yǎng)成分，如糖、有機(jī)酸、維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪的分析；②食品添加劑，如防腐劑、抗氧化劑、合成色素、甜味劑和保鮮化學(xué)物質(zhì)的分析；③食品污染物，如農(nóng)藥殘余和黃曲霉素等的分析。

3.制備分離應(yīng)用

要制備或提取一些高純化合物，如新合成化合物的結(jié)構(gòu)鑒定，藥物的生物和毒理試驗(yàn)?，F(xiàn)在是10頁\一共有82頁\編輯于星期二4.高效液相色譜法的特點(diǎn)高壓（150×105~350×105Pa）高速（in1hr）高效（3w/m)高靈敏度(UV-ng;FL-10pg;μTAS)現(xiàn)在是11頁\一共有82頁\編輯于星期二人參、西洋參與三七的鑒別R1Rg1ReRb1RdABCRg1Rg1ReReRfRb1RcRb2RdRc三種藥材的HPLC指紋圖譜現(xiàn)在是12頁\一共有82頁\編輯于星期二3-2影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素H=A+B/μ+Cμ高效液相色譜中的速率方程現(xiàn)在是13頁\一共有82頁\編輯于星期二高效液相色譜中的速率方程渦流擴(kuò)散項(xiàng)縱向擴(kuò)散流動相傳質(zhì)滯留區(qū)傳質(zhì)固定相內(nèi)傳質(zhì)現(xiàn)在是14頁\一共有82頁\編輯于星期二2.對速率方程的討論選用細(xì)顆粒填料可獲高柱效（5μm）流動相流速低，有利于達(dá)到高柱效選用黏度小的流動相有利于提高柱效溫度的影響(適當(dāng)提高柱溫以降低流動相黏度）液膜厚度的影響現(xiàn)在是15頁\一共有82頁\編輯于星期二3.柱外效應(yīng)由于色譜柱之外的因素引起的色譜峰的展寬，例如進(jìn)樣系統(tǒng)、連接管路及檢測器的死體積等。現(xiàn)在是16頁\一共有82頁\編輯于星期二3-3高效液相色譜的類型及其分離原理

液—液分配色譜及化學(xué)鍵合相色譜液—固吸附色譜離子交換色譜離子色譜空間排阻色譜

現(xiàn)在是17頁\一共有82頁\編輯于星期二流動相和固定相都是液體分離原理：利用組分在兩相中溶解度的差異固定相：載體+固定液早期物理或機(jī)械法涂漬固定液，由于易流失已較少采用；現(xiàn)在應(yīng)用最廣的是化學(xué)鍵合固定相：將各種不同基團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到擔(dān)體（硅膠）表面的游離羥基上。

liquid-liquidpartitionchromatography1、液-液分配色譜現(xiàn)在是18頁\一共有82頁\編輯于星期二液—液分配色譜固定液類型：β,β’—氧二丙腈、聚乙二醇、角鯊?fù)榈?。液—液色譜流動相應(yīng)盡可能不與固定液互溶，兩者的極性差別應(yīng)很大。固定液為極性、流動相為非極性的液—液色譜稱為正相色譜，反之，則稱為反相色譜?，F(xiàn)在是19頁\一共有82頁\編輯于星期二

正相色譜——固定液極性>流動相極性（NLLC）

極性小的組分先出柱，極性大的組分后出柱適于分離極性組分

反相色譜——固定液極性<流動相極性（RLLC）

極性大的組分先出柱，極性小的組分后出柱適于分離非極性組分液液分配色譜法現(xiàn)在是20頁\一共有82頁\編輯于星期二液—液分配色譜應(yīng)用：液—液色譜能分離多種類型化合物，如烷烴、烯烴、芳烴、染料、甾族化合物等。

現(xiàn)在是21頁\一共有82頁\編輯于星期二利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面1．分離原理：分配+吸附（以LLC為基礎(chǔ)）2．特點(diǎn)：不易流失熱穩(wěn)定性好化學(xué)性能好載樣量大適于梯度洗脫化學(xué)鍵合固定相（chemicallybondedphasechromatography）現(xiàn)在是22頁\一共有82頁\編輯于星期二分離原理：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異

分離前提：K不等或k不等流動相為液體，固定相為固體吸附劑2、液-固吸附色譜

liquid-solidadsorptionchromatography現(xiàn)在是23頁\一共有82頁\編輯于星期二液—固吸附色譜固體吸附劑主要類型：極性的硅膠（應(yīng)用最廣）氧化鋁分子篩非極性的活性炭現(xiàn)在是24頁\一共有82頁\編輯于星期二液—固吸附色譜應(yīng)用：分離極性不同的試樣分離含極性基團(tuán)相同但數(shù)目不同的試樣分離異構(gòu)體現(xiàn)在是25頁\一共有82頁\編輯于星期二3、離子交換色譜

ion-exchangechromatography

固定相：陰離子或陽離子交換樹脂；

流動相：陰離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液；

基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時間長；陽離子交換：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+

陰離子交換：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH-

應(yīng)用：離子及可離解的化合物，包括氨基酸、核酸等?，F(xiàn)在是26頁\一共有82頁\編輯于星期二離子色譜法是由離子交換色譜法派生出來的一種分離方法。由于離子交換色譜法在無機(jī)離子的分析和應(yīng)用受到限制。例如，對于那些不能采用紫外檢測器的被測離子，如采用電導(dǎo)檢測器，由于被測離子的電導(dǎo)信號被強(qiáng)電解質(zhì)流動相的高背景電導(dǎo)信號掩沒而無法檢測。為了解決這一問題，1975年Small等人提出一種能同時測定多種無機(jī)和有機(jī)離子的新技術(shù)。4、離子色譜

ionchromatography現(xiàn)在是27頁\一共有82頁\編輯于星期二離子色譜應(yīng)用：待測陰離子隨流動相通過離子交換樹脂時發(fā)生離子交換反應(yīng)。至今離子色譜是分離分析常見無機(jī)混合陰離子的最佳分析方法。現(xiàn)在是28頁\一共有82頁\編輯于星期二現(xiàn)在是29頁\一共有82頁\編輯于星期二5、空間排阻色譜（凝膠色譜）

size-exclusionchromatography固定相：凝膠gel具有一定大小孔隙分布。

原理：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子非常小，故在最后出峰。整個試樣都在tM(死時間）之前出峰。現(xiàn)在是30頁\一共有82頁\編輯于星期二空間排阻色譜法特點(diǎn)：峰擴(kuò)展比較小流動相和固定相的選擇比較簡單不能分離異構(gòu)體（>10%）可對相對分子質(zhì)量在100-8*105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離現(xiàn)在是31頁\一共有82頁\編輯于星期二液相色譜分離類型的選擇（1）根據(jù)相對分子質(zhì)量選擇相對分子質(zhì)量十分低的樣品，其揮發(fā)性好，適用于氣相色譜．標(biāo)準(zhǔn)液相色譜類型（液--固、液--液、及離子交換色譜）最適合的相對分子質(zhì)量范圍是200～2000．對于相對分子質(zhì)量大于2000的樣品，則用尺寸排阻法為最佳．現(xiàn)在是32頁\一共有82頁\編輯于星期二（2）根據(jù)溶解度選擇如：樣品可溶于水并屬于能離解物質(zhì)，以采用離子交換色譜為佳；如：樣品可溶于烴類（如苯或異辛烷），則可采用液--固吸附色譜

現(xiàn)在是33頁\一共有82頁\編輯于星期二（3）根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇例如，酸、堿化合物宜用離子交換色譜；脂肪族或芳香族宜用液--液分配色譜或液--固吸附色譜；異構(gòu)體用液--固吸附色譜；同系物用液--液分配色譜．等等。現(xiàn)在是34頁\一共有82頁\編輯于星期二分離類型選擇總結(jié)，P93現(xiàn)在是35頁\一共有82頁\編輯于星期二3-4液相色譜法固定相

高效液相色譜柱是HPLC的心臟。左右心房分別是：固定相和其填裝技術(shù)（－）固定相高效液相色譜固定相以承受高壓能力來分類，可分為剛性固體和硬膠兩大類．

剛性固體以二氧化硅為基質(zhì)，可承受7.O×108～1.O×109Pa的高壓，可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒．現(xiàn)在是36頁\一共有82頁\編輯于星期二

（2）全多孔型

由氧化硅、氧化鋁、硅藻土等制成的多孔球體；早期采用100μm的大顆粒，表面涂漬固定液，性能不佳已不多見；現(xiàn)采用5~10μm的小顆粒，比表面積和柱容量都很大。

（1）表面多孔型

基體是30~40μm實(shí)心玻璃微球，表面附著一層厚度為1~2μm的多孔活性材料，如硅膠、氧化鋁等。表面積小，柱容量低。固定相按照空隙深度分類：現(xiàn)在是37頁\一共有82頁\編輯于星期二1、液液色譜法、鍵合相色譜法及離子對色譜法固定相1）全多孔型單體（porousmicrobeadssupport）2）表層多孔型擔(dān)體（pellicularmicrobeadssupport）現(xiàn)在是38頁\一共有82頁\編輯于星期二化學(xué)鍵合固定相（1960后）在硅膠表面利用硅烷化反應(yīng)制得Si-O-Si-C型的反應(yīng)該化學(xué)鍵穩(wěn)定，是廣泛使用的固定相（C-18）?，F(xiàn)在是39頁\一共有82頁\編輯于星期二類型分離方式應(yīng)用特點(diǎn)C-18反相、離子對普適性好，保留值大。溶于水的高極性化合物、中等極性化合物C-8反相、離子對與C-18類似，保留值略小C-3,C-4反相保留值小，適合肽類和蛋白質(zhì)苯基反相保留適中，選擇性不同。非極性、中等極性化合物-CN反相、正相選擇性與硅膠類似，保留小，用途廣-NH2反相、正相分離糖類、核苷酸、固醇等二醇基正相分離有機(jī)酸、排阻分蛋白質(zhì)等醚基反相、正相分離酚類、芳硝基化合物，保留比C-18強(qiáng)聚苯乙烯基反相pH使用范圍廣，對部分分離峰形好，壽命長常用固定相表3-2現(xiàn)在是40頁\一共有82頁\編輯于星期二化學(xué)鍵合固定相特點(diǎn)表面沒有液坑，傳質(zhì)快無固定液流失可以改變選擇性（通過鍵合不同官能團(tuán)）有利于梯度洗提，及配用靈敏的檢測器現(xiàn)在是41頁\一共有82頁\編輯于星期二2．液固吸附色譜法固定相（2）高分子多孔小球：YSG

原理：吸附+分配蒹小孔凝膠作用特點(diǎn)：柱選擇性好，峰形好，柱效低適用：分離弱極性化合物（1）硅膠

表孔硅膠（薄殼硅膠）全多孔硅膠無定形YWG5~6μm5×104球形YQG3~4μm8×108

堆積硅珠YQG3~4μm8×108理想

原理：吸附特點(diǎn)：峰易拖尾適用：分離極性化合物現(xiàn)在是42頁\一共有82頁\編輯于星期二在氣相色譜中，載氣是惰性的，常用的只有三四種，他們的性質(zhì)差異也不大，所以要提高柱子的選擇性，只要選擇合適的固定相即可。但在液相色譜中，當(dāng)固定相選定后，流動相的種類、配比能顯著的影響分離效果，因此，流動相的選擇也非常重要。液相色譜的流動相又稱為：淋洗液，洗脫劑。3-5液相色譜法流動相

現(xiàn)在是43頁\一共有82頁\編輯于星期二

流動相的選擇原則流動相純度要高（色譜純）且價格便宜應(yīng)避免使用會引起柱效損失或保留特性變化的溶劑對試樣要有適宜的溶解度溶劑的粘度要小些為好應(yīng)與檢測器相匹配現(xiàn)在是44頁\一共有82頁\編輯于星期二常用溶劑的極性順序：

水(最大)>甲酰胺>乙腈>甲醇>乙醇>丙醇>丙酮>二氧六環(huán)>四氫呋喃>甲乙酮>正丁醇>乙酸乙酯>乙醚>異丙醚>二氯甲烷>氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>環(huán)己烷>己烷>煤油(最小)

在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。例如，采用正相液-液分配分離時：首先選擇中等極性溶劑，若組分的保留時間太短，降低溶劑極性，反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時間縮短。在選擇溶劑時，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)現(xiàn)在是45頁\一共有82頁\編輯于星期二高效液相色譜儀3-6高效液相色譜儀現(xiàn)在是46頁\一共有82頁\編輯于星期二高效液相色譜儀：貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器和色譜工作站等。主要工作部件現(xiàn)在是47頁\一共有82頁\編輯于星期二1.高壓泵色譜柱很細(xì)1-6mm，填充劑粒度小5-10μm，阻力很大

要求：流量穩(wěn)定，壓力平穩(wěn)無脈動（1）往復(fù)式柱塞泵（2）氣動放大泵恒流泵和恒壓泵兩類現(xiàn)在是48頁\一共有82頁\編輯于星期二2.梯度洗提梯度洗提即程序控制流動相的組成，使在整個分離過程中，溶劑強(qiáng)度按照特定的變化規(guī)律增加。

優(yōu)點(diǎn)：分離復(fù)雜混合物，使所有組分都處在最佳的k值范圍內(nèi)。

缺點(diǎn)：檢測器的使用受到限制，分析結(jié)果的重復(fù)性取決于流速的穩(wěn)定性。柱子需進(jìn)行再生處理?，F(xiàn)在是49頁\一共有82頁\編輯于星期二應(yīng)用舉例現(xiàn)在是50頁\一共有82頁\編輯于星期二3.進(jìn)樣裝置注射器進(jìn)樣裝置高壓定量進(jìn)樣閥現(xiàn)在是51頁\一共有82頁\編輯于星期二旋轉(zhuǎn)式六通閥

六通進(jìn)樣閥結(jié)構(gòu)示意圖現(xiàn)在是52頁\一共有82頁\編輯于星期二

高效液相色譜柱比氣相色譜柱短得多（約5～30cm），所以柱外展寬（又稱柱外效應(yīng)）較突出。進(jìn)樣系統(tǒng)是引起往前展寬的主要因素，因此高效液相色譜法中對進(jìn)樣技術(shù)要求較嚴(yán)。

進(jìn)樣閥現(xiàn)在是53頁\一共有82頁\編輯于星期二色譜柱是液相色譜儀的心臟部件，它包括柱管與固定相兩部分．柱管材料有玻璃、不銹鋼、鋁、銅及內(nèi)襯光滑的聚合材料的其他金屬．玻璃管耐壓有限，故金屬管用得較多，目前標(biāo)準(zhǔn)色譜柱長15～30cm，內(nèi)徑為4.6mm或3.9mm，直型不銹鋼柱4.分離系統(tǒng)——色譜柱現(xiàn)在是54頁\一共有82頁\編輯于星期二

柱子裝填得好壞對柱效影響很大。對于細(xì)粒度的填料（＜20μm）一般采用勻漿填充法裝柱，先將填料調(diào)成勻漿，然后在高壓泵作用下，快速將其壓入裝有洗脫液的色譜柱內(nèi)，經(jīng)沖洗后，即可備用。現(xiàn)在是55頁\一共有82頁\編輯于星期二液相色譜柱發(fā)展趨勢減小填料顆粒度（3~5μm），提高柱效；可以使用更短的柱（數(shù)cm），加快分析速度;減小柱徑（內(nèi)徑<1mm),降低溶劑用量又提高檢測濃度現(xiàn)在是56頁\一共有82頁\編輯于星期二5．檢測器

紫外檢測器熒光檢測器示差折光檢測器電導(dǎo)檢測器現(xiàn)在是57頁\一共有82頁\編輯于星期二5．檢測系統(tǒng)

在液相色譜中，有兩種基本類型的檢測器．一類是溶質(zhì)性檢測器，它僅對被分離組分的物理或化學(xué)特性有響應(yīng)，屬于這類檢測器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測器等．另一類是總體檢測器，它對試樣和洗脫液總的物理或化學(xué)性質(zhì)有響應(yīng)，屬于這類檢測器的有示差折光，電導(dǎo)檢測器等．現(xiàn)在是58頁\一共有82頁\編輯于星期二理想的檢測器特性靈敏度高重現(xiàn)性好響應(yīng)快線性范圍寬適用范圍廣對流動相流量和溫度波動不敏感死體積小現(xiàn)在是59頁\一共有82頁\編輯于星期二(1)

紫外－可見檢測器

應(yīng)用最廣，適用于對紫外可見光有吸收的樣品的檢測。對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。其結(jié)構(gòu)同紫外－可見分光光度計。

現(xiàn)將常用的檢測器介紹如下:現(xiàn)在是60頁\一共有82頁\編輯于星期二紫外檢測器

應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)?，F(xiàn)在是61頁\一共有82頁\編輯于星期二響應(yīng)特性選擇性檢測器，如芳烴類化合物的檢測靈敏度高，可檢測10-9g/mL的物質(zhì)線性范圍寬，104-105對溫度及流動相的改變不敏感適合梯度洗提HPLC常規(guī)檢測器現(xiàn)在是62頁\一共有82頁\編輯于星期二示差折光檢測器示差折光檢測器是依據(jù)不同性質(zhì)的溶液對光具有不同的折射率，通過連續(xù)測量溶液折射率的變化，便可測知各組分的含量。

現(xiàn)在是63頁\一共有82頁\編輯于星期二示差折光檢測器

（differentialrefractiveindexdetector）

除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器；可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；

通用型檢測器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）；靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種現(xiàn)在是64頁\一共有82頁\編輯于星期二響應(yīng)特性通用型的濃度檢測器低靈敏度（10-7g/mL)基線易受溫度的影響（溫度精密度±10-3℃）不適合梯度洗提現(xiàn)在是65頁\一共有82頁\編輯于星期二熒光檢測器（fluorescencedetector）根據(jù)某些物質(zhì)受激后能產(chǎn)生一定強(qiáng)度熒光的性質(zhì)，可制成靈敏度極高的熒光檢測器。

現(xiàn)在是66頁\一共有82頁\編輯于星期二響應(yīng)特性選擇性檢測器。對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)。高靈敏度，比紫外高約1000倍適合梯度洗提現(xiàn)在是67頁\一共有82頁\編輯于星期二熒光檢測器結(jié)構(gòu)現(xiàn)在是68頁\一共有82頁\編輯于星期二應(yīng)用舉例現(xiàn)在是69頁\一共有82頁\編輯于星期二電導(dǎo)檢測器結(jié)構(gòu)離子色譜法中使用最廣的檢測器原理：根據(jù)物質(zhì)在某些介質(zhì)中解離后所產(chǎn)生的電導(dǎo)變化來進(jìn)行測定現(xiàn)在是70頁\一共有82頁\編輯于星期二響應(yīng)特性選擇性檢測器，對離子型化合物有響應(yīng)靈敏度高受溫度的影響不能梯度洗提現(xiàn)在是71頁\一共有82頁\編輯于星期二3-7HPLC分離類型的選擇選擇合適的液相色譜分離類型

了解分析對象要分析的組分的大致濃度干擾物質(zhì)試樣的性質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)分子量極性、酸堿性溶解度參數(shù)現(xiàn)在是72頁\一共有82頁\編輯于星期二色譜分離方式的選擇

根據(jù)相對分子質(zhì)量選擇根據(jù)溶解性選擇根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇

現(xiàn)在是73頁\一共有82頁\編輯于星期二根據(jù)相對分子質(zhì)量選擇相對分子質(zhì)量低的試樣(≤400)因其揮發(fā)性強(qiáng)，宜采用氣相色譜分離；相對分子質(zhì)量大于2000的化合物可采用液相色譜分離；相對分子質(zhì)量介于400—2000范圍內(nèi)的分子，應(yīng)視試樣性質(zhì)選用液—固吸附色譜、液—液分配色譜或離子交換色譜分離?，F(xiàn)在是74頁\一共有82頁\編輯于星期二根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇

液—固吸附色譜適用于異構(gòu)體分離；液—液分配色譜可用于同系物分離；含有離子基團(tuán)和能電離基團(tuán)的組分，可采用離子交換色譜分離；生物大分子或高分子聚合物可用空間排阻（凝膠）色譜分離?，F(xiàn)在是75頁\一共有82頁\編輯于星期二根據(jù)溶解性選擇水溶性離子化合物與共價化合物可分別采用離子交換色譜或液—液分配色譜分離。對于非水溶性化合物，若易溶于烴類溶劑，可采用液—固吸附色譜分離；若溶于二氯甲烷或氯仿，可采用液—固吸附色譜或正相液—液分配色譜分離；若溶于甲醇，則用反相液—液分配色譜分離?，F(xiàn)在是76頁\一共有82頁\編輯于星期二溶于水——排阻色譜，水為流動相相對分子質(zhì)量＞2000不溶于水——排阻色譜，非水流動相同系物——鍵合相色譜不溶于水異構(gòu)體——液固色譜樣品分子大小差異——排阻色譜