微生物 真菌課程

微生物真菌課程第1頁/共87頁2

概念真菌(fungus)是一類具有典型細(xì)胞核，有核膜和核仁，胞漿內(nèi)有完整的細(xì)胞器，無根、莖、葉，不含葉綠素，無光合色素，細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和纖維素的單細(xì)胞或多細(xì)胞異養(yǎng)真核細(xì)胞型微生物。第2頁/共87頁真菌概念真菌(fungus)：真核細(xì)胞型微生物具有典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）無根、莖、葉，不含葉綠素細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和（或）纖維素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進(jìn)行有性生殖和（或）無性繁殖生長緩慢第3頁/共87頁4

概念真菌分布廣泛，種類繁多，大多數(shù)無害，甚至有利。有些真菌也是造成動(dòng)植物病害的病原，與醫(yī)學(xué)有關(guān)的約數(shù)百種，少數(shù)真菌可以引起人類感染性、中毒性及變態(tài)反應(yīng)性疾病。近年來，由于抗菌藥物的廣泛應(yīng)用和或應(yīng)用激素、抗癌藥物導(dǎo)致機(jī)體免疫功能降低等原因，機(jī)會(huì)致病真菌感染也明顯增多。第4頁/共87頁原核細(xì)胞型微生物與真核細(xì)胞型微生物比較原核細(xì)胞型微生物真核細(xì)胞型微生物細(xì)胞核結(jié)構(gòu)核膜無有核仁無有分裂方式主要以二分裂有絲分裂，減數(shù)分裂細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)細(xì)胞膜常缺乏固醇常有固醇細(xì)胞壁含肽聚糖含幾丁質(zhì)和（或）纖維素細(xì)胞器較簡單，有中介體復(fù)雜，有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體核糖體70S80S呼吸系統(tǒng)質(zhì)膜或中介體線粒體第5頁/共87頁

第一節(jié)分

類真菌分類的主要依據(jù)為：有性生殖的各種器官

無性菌絲和孢子及菌落的形態(tài)等特征

大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為真菌應(yīng)作為一個(gè)獨(dú)立界——真菌界，并曾將真菌分為兩個(gè)門，即黏菌門和真菌門,真菌門又根據(jù)其生物學(xué)性狀等傳統(tǒng)地分為五個(gè)亞門。最新的真菌分類是把真菌界分為四個(gè)門。第6頁/共87頁分類真菌門：5個(gè)亞門（傳統(tǒng)）鞭毛菌亞門接合菌亞門子囊菌亞門擔(dān)子菌亞門半知菌亞門（醫(yī)學(xué)相關(guān)：后4個(gè)亞門）最新分類：真菌界：4個(gè)門：接合菌門擔(dān)子菌門子囊菌門壺菌門第7頁/共87頁第二節(jié)

基本特性一、形態(tài)特性真菌比細(xì)菌大，用普通光學(xué)顯微鏡的低倍或高倍鏡就可見。真菌菌體外有一層堅(jiān)硬的細(xì)胞壁；其細(xì)胞膜含固醇而細(xì)菌無。按形態(tài)可將真菌分為單細(xì)胞和多細(xì)胞兩類。第8頁/共87頁第二節(jié)

基本特性

一、形態(tài)特性單細(xì)胞真菌：圓形或卵圓形，常見于酵母菌或類酵母菌多細(xì)胞真菌：菌絲+孢子交織成團(tuán)—菌絲體（霉菌）二相性真菌：

37℃呈酵母型，25℃呈絲狀型的真菌第9頁/共87頁單細(xì)胞真菌

形態(tài)：圓形或橢圓形，如酵母型和類酵母型真菌。（1）酵母型真菌：有孢子，無菌絲菌絲：無繁殖方式：從母細(xì)胞芽生菌落形態(tài)：與細(xì)菌相似

第10頁/共87頁芽生孢子第11頁/共87頁酵母菌在培養(yǎng)基上菌落形態(tài)第12頁/共87頁單細(xì)胞真菌（2）類酵母型真菌：芽生孢子與假菌絲菌絲：假菌絲

假菌絲：長的芽體可伸進(jìn)培養(yǎng)基內(nèi)

繁殖方式：從母細(xì)胞芽生

菌落形態(tài)：與酵母型相似，由假菌絲聯(lián)結(jié)成假菌絲體，稱為類酵母型菌落第13頁/共87頁假菌絲假菌絲：類酵母菌進(jìn)行出芽生殖時(shí)，子母細(xì)胞不立即分離而以狹小的面積相連，這種藕節(jié)狀的細(xì)胞串為假菌絲。假菌絲與真菌絲明顯不同處在于其兩細(xì)胞間有一細(xì)腰，而不象真正菌絲橫隔處兩細(xì)胞寬度一致。第14頁/共87頁第15頁/共87頁第16頁/共87頁多細(xì)胞真菌由菌絲和孢子兩大部分組成

1.菌絲(hypha)2.孢子

(spore)第17頁/共87頁18（一）菌絲（hypha)真菌在適宜環(huán)境中，由孢子出芽長出芽管，逐漸延長呈絲狀，稱為菌絲（hypha）。菌絲繼續(xù)分支，交織成團(tuán)，稱菌絲體（mycelium）。菌絲分為營養(yǎng)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲中能形成孢子的叫做生殖菌絲。有些真菌的菌絲具有隔膜，叫有隔菌絲；有些真菌的菌絲無隔膜，叫無隔菌絲。第18頁/共87頁不同形態(tài)的菌絲具有鑒別意義(1)單純菌絲細(xì)長的管狀組織，有粗有細(xì)分枝或不分枝，有隔或無隔，有色或無色。(2)球拍狀菌絲菌絲在隔膜部位一端膨大球拍狀，排列規(guī)整。(3)破梳狀菌絲菌絲一側(cè)有不規(guī)則的梳齒狀凸起，梳齒參差不齊如破梳狀。(4)螺旋狀菌絲菌絲呈彈簧狀，有規(guī)律性旋轉(zhuǎn)狀生長。(5)結(jié)節(jié)狀菌絲稍膨大的側(cè)枝細(xì)胞、菌絲端細(xì)胞或中間性細(xì)胞彎曲成團(tuán)，互纏成結(jié)。(6)鹿角狀菌絲菌絲頂端呈不規(guī)則分枝，狀如鹿角。第19頁/共87頁第20頁/共87頁第21頁/共87頁22（二）孢子(spore)孢子（spore）是真菌的繁殖結(jié)構(gòu)。孢子分有性與無性兩類。孢子與細(xì)菌芽胞不同。

真菌孢子

細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60～70℃短時(shí)間即死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽胞作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形狀形狀多種多樣圓形或橢圓形真菌孢子與細(xì)菌芽胞的區(qū)別第22頁/共87頁二相真菌：一些真菌可因寄生環(huán)境及培養(yǎng)條件（營養(yǎng)、溫度、氧氣等）的不同而交替形成兩種形態(tài)，即在室溫中呈霉菌型，在37攝氏度或體內(nèi)呈單細(xì)胞的酵母型，這類真菌有雙向性，所以稱之為雙態(tài)真菌或二相真菌。如球孢子菌、組織胞漿菌及芽生菌。二相真菌第23頁/共87頁二相真菌機(jī)體內(nèi)寄生37℃單細(xì)胞型：多細(xì)胞型：含動(dòng)物蛋白培養(yǎng)基酵母菌沙保氏培養(yǎng)基25℃ 普通培養(yǎng)基25℃絲狀菌第24頁/共87頁孢子(spore)孢子是生殖結(jié)構(gòu)，由生殖菌絲產(chǎn)生。是鑒定和分類的依據(jù)。

(1)無性孢子

不經(jīng)過兩性細(xì)胞的配合而產(chǎn)生，菌絲上的細(xì)胞分化或出芽生成，病原性真菌大多形成無性孢子。(2)有性孢子同一菌體或不同菌體上的2個(gè)細(xì)胞融合經(jīng)減數(shù)分裂形成。絕大多數(shù)為非致病性真菌所具有。第25頁/共87頁26無性孢子分為：分生孢子：①大分生孢子②小分生孢子葉狀孢子：①芽生孢子②關(guān)節(jié)孢子③厚膜孢子孢子囊孢子有性孢子分為：卵孢子、接合孢子、子囊孢子及擔(dān)孢子（二）孢子(spore)第26頁/共87頁無性孢子1)葉狀孢子由菌絲細(xì)胞直接形成①芽生孢子

通過發(fā)芽方式形成圓形或卵形的細(xì)胞②關(guān)節(jié)孢子

由菌絲分化成長方形的幾個(gè)節(jié)段，胞壁稍厚③厚膜孢子

是一種休眠細(xì)胞，條件適宜可再發(fā)芽

第27頁/共87頁第28頁/共87頁2)分生孢子

常見的一種無性孢子形狀、大小、結(jié)構(gòu)、顏色等：分類、鑒定①大分生孢子

體積較大，多細(xì)胞性。孢子呈紡錘形，棍棒狀等。②小分生孢子體積小，單細(xì)胞性，外壁薄，球形、卵形、梨形以及棍棒狀等。無性孢子第29頁/共87頁第30頁/共87頁生殖菌絲末端細(xì)胞分裂或收縮形成；也可從菌絲側(cè)面出芽形成大分生孢子的形態(tài)第31頁/共87頁3)

孢(子)囊孢子由絲末端形成一種囊狀結(jié)構(gòu)（孢子囊），內(nèi)有許多孢囊孢子。無性孢子第32頁/共87頁多細(xì)胞真菌形態(tài)

第33頁/共87頁第34頁/共87頁真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別

真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-70短時(shí)間殺死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個(gè)孢子一個(gè)細(xì)菌體只形成一個(gè)芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細(xì)胞內(nèi)外形成只在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形第35頁/共87頁繁殖與培養(yǎng)真菌的繁殖方式依靠孢子及菌絲進(jìn)行繁殖:有性繁殖無性繁殖無性繁殖

1.芽生:酵母菌及酵母樣真菌

2.裂殖:以二分裂法進(jìn)行繁殖

3.萌管:萌發(fā)芽管，芽管伸延后形成菌絲

4.隔殖:在分生孢子梗某一段落形成一隔膜，隨之原生質(zhì)濃縮而形成一個(gè)新的孢子。孢子可再獨(dú)立繁殖。第36頁/共87頁真菌的培養(yǎng)特性

真菌的營養(yǎng)要求不高常用沙保培養(yǎng)基：蛋白胨、葡萄糖、氯化鈉和瓊脂。溫度：22～28℃，但某些深部感染的真菌為37℃。

pH：4.0～6.0

生長速度:較慢“三低兩高”第37頁/共87頁常用的培養(yǎng)基沙氏瓊脂培養(yǎng)基Sabouraud'sAgar蛋白胨10.g

葡萄糖

40.0g

瓊脂

20.0gpH值5.6

±

0.2

蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

第38頁/共87頁馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基(分離真菌用)配方

KH2PO41g

MgSO47H2O0.5g

蛋白胨5g

葡萄糖10g

瓊脂15-20g

水1000mL

pH自然

此培養(yǎng)液1000mL加1%孟加拉紅1%水溶液3.3mL.臨用時(shí)每100mL培養(yǎng)基中加入1%鏈霉素液0.3mL.第39頁/共87頁基本原理葡萄糖主要作為碳源,蛋白胨主要作為氮源,KH2PO4和MgSO47H2O作為無機(jī)鹽,為微生物提供鉀,磷,鎂離子.而孟加拉紅和鏈霉素主要是細(xì)菌和放線菌的抑制劑,對(duì)真菌無抑制作用,因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以達(dá)到優(yōu)勢(shì)生長,從而達(dá)到分離真菌的目的.第40頁/共87頁察氏瓊脂

CzapekDoxAgar硝酸鈉

磷酸氫二鉀

硫酸鎂

氯化鉀

硫酸亞鐵

蔗糖

瓊脂3.0

1.0

0.5

0.5

0.01

30.0

15.0原理：

硝酸鈉提供氮源；磷酸氫二鉀是緩沖劑；硫酸鎂、氯化鉀、硫酸亞鐵提供必須的離子；蔗糖提供碳源；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑。

用途：用于青霉,曲霉鑒定及保存菌種用(GB標(biāo)準(zhǔn))第41頁/共87頁孟加拉紅培養(yǎng)基（虎紅培養(yǎng)基）

RoseBengalMedium蛋白胨

葡萄糖

磷酸二氫鉀

硫酸鎂(無水)

瓊脂

孟加拉紅

氯霉素5.0

10.0

1.0

0.5

20.0

0.033

0.1第42頁/共87頁原理：蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氫鉀為緩沖劑；硫酸鎂提供必須的微量元素；瓊脂是培養(yǎng)基的凝固劑；氯霉素可抑制細(xì)菌的生長；孟加拉紅作為選擇性抑菌劑可抑制細(xì)菌的生長，并可減緩某些霉菌因生長過快而導(dǎo)致菌落漫延生長。第43頁/共87頁在沙保培養(yǎng)基上，3種類型的菌落：

1.酵母型菌落

：菌落柔軟、光滑、濕潤。鏡下可見單細(xì)胞性的芽生孢子，無菌絲。隱球菌菌落

2.類酵母型菌落（酵母樣菌落）：和酵母型菌落相似，鏡下可見假菌絲。白色念珠菌菌落3.絲狀型菌落

：由多細(xì)胞菌絲體組成的絮狀菌落（一部分向空中生長，并形成孢子）。絲狀真菌或霉菌菌落。(菌落較大)真菌的培養(yǎng)特性第44頁/共87頁第45頁/共87頁赭曲霉第46頁/共87頁鐮刀菌及其大分生孢子第47頁/共87頁黃曲霉菌落形態(tài)第48頁/共87頁黃曲霉鏡下特征第49頁/共87頁青霉菌菌落形態(tài)第50頁/共87頁青霉菌鏡下形態(tài)第51頁/共87頁鐮刀菌菌落形態(tài)第52頁/共87頁鐮刀菌鏡下特征第53頁/共87頁變異與抵抗力變異性

多次傳代或孵育過久，容易變異（形態(tài)、結(jié)構(gòu)、菌落性狀、色素以及生理性狀(毒力)的改變。

抵抗力熱：不強(qiáng)。孢子一般60℃經(jīng)1h即被殺滅（不同于芽胞）。干燥、日光、紫外線及多種化學(xué)藥物：耐受性較強(qiáng)。

1%～3%石碳酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及10甲醛液：較敏感。

第54頁/共87頁55三、致病性致病物質(zhì)：細(xì)胞壁糖蛋白（有內(nèi)毒素樣活性）、毒素、莢膜等。致病方式：病原性真菌感染（主要是外源性真菌感染）條件致病性真菌感染（主要是內(nèi)源性真菌）真菌變態(tài)反應(yīng)性疾?。ㄆぱ住⑾龋┱婢灾卸荆ǘ舅匾穑?/p>

真菌毒素與腫瘤的關(guān)系（黃曲霉毒素等）第55頁/共87頁真菌性感染

真菌病

(mycoses)：

由真菌引起感染并表現(xiàn)臨床癥狀者

真菌的致病力比細(xì)菌弱

致病性真菌、條件致病性真菌原發(fā)性感染：球孢子菌(Coccidiodes)、皮炎芽生菌

(Blastomyoesdermatitidis)、組織胞漿菌(Histoplasma)等繼發(fā)性感染：

機(jī)體防御機(jī)能顯著低下時(shí)。

致病機(jī)理：真菌的粘附能力，對(duì)免疫系統(tǒng)功能的抑制，胞壁中的酶類第56頁/共87頁真菌性超敏反應(yīng)

按性質(zhì)分：①感染性超敏反應(yīng)：感染后,Ⅳ型②接觸性超敏反應(yīng)：

吸入或食入,Ⅰ～Ⅳ型按部位分:

①皮膚超敏反應(yīng):皮炎、濕疹、蕁麻疹、瘙癢癥等②呼吸道超敏反應(yīng):支氣管哮喘以及過敏性鼻炎③消化道超敏反應(yīng)第57頁/共87頁真菌毒素中毒

農(nóng)作物、食物或飼料上

表現(xiàn):1.肝、腎、神經(jīng)、造血系統(tǒng)損傷

2.致癌性:黃曲霉毒素,等

（原發(fā)性肝癌）第58頁/共87頁

免疫力不強(qiáng)，不能形成穩(wěn)固的病后免疫

1.抗體的作用

2.細(xì)胞免疫及超敏反應(yīng)

免疫性第59頁/共87頁微生物學(xué)檢查法

取材：淺部：鱗屑、病發(fā)或甲屑

深部：分泌物、排泄物、體液、痰液及血液直接鏡檢：粘稠或含角質(zhì)的標(biāo)本:先加10%KOH，加溫后鏡檢液體標(biāo)本：離心后鏡檢培養(yǎng)：含抗生素的沙保弱培養(yǎng)基

25℃(絲狀真菌)37℃(酵母型真菌)第60頁/共87頁3.菌種鑒定

(1)絲狀真菌：根據(jù)菌落形成所需要的時(shí)間，在不同條件下生長的情況，菌落表面及背面的形態(tài)、色素，培養(yǎng)基中有無色素，培養(yǎng)物用乳酚棉藍(lán)染色后鏡檢找特征性標(biāo)志結(jié)構(gòu)。主要是形態(tài)學(xué)的鑒定，如直接涂片觀察，小培養(yǎng)顯微鏡鑒定，第61頁/共87頁毛霉

根霉

梨頭霉

第62頁/共87頁第63頁/共87頁第64頁/共87頁第65頁/共87頁第66頁/共87頁曲霉結(jié)構(gòu)圖第67頁/共87頁煙曲霉菌落煙曲霉,光鏡X400第68頁/共87頁黃曲霉菌落黃曲霉,光鏡X200

第69頁/共87頁黃曲霉鏡下特征第70頁/共87頁黑曲霉菌落黑曲霉,光鏡X200第71頁/共87頁土曲霉菌落

土曲霉，光鏡X200

第72頁/共87頁構(gòu)巢曲霉菌落

構(gòu)巢曲霉,光鏡X400第73頁/共87頁雜色曲霉菌落雜色曲霉,光鏡X400第74頁/共87頁青霉菌菌落形態(tài)第75頁/共87頁青霉菌鏡下形態(tài)第76頁/共87頁鐮刀菌菌落形態(tài)第77頁/共87頁鐮刀菌鏡下特征第78頁/共87頁2)酵母菌鑒定：形態(tài)學(xué)鑒定主要觀察有無假菌絲產(chǎn)生，如有則為念珠菌屬，如無則為念珠菌以外的酵母菌;玉米吐溫誘導(dǎo)下特征菌絲及特征孢子的檢驗(yàn)，血清芽管形成在形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)上還必須進(jìn)行生化鑒定：有標(biāo)準(zhǔn)鑒定，自動(dòng)儀器鑒定，顯色鑒定，其中，自動(dòng)儀器鑒定(如API20C，ID32C等)，顯色鑒定對(duì)于酵母樣真菌的鑒定，特點(diǎn)是快速簡便;第79頁/共87頁標(biāo)準(zhǔn)鑒定是按傳統(tǒng)雙歧表流程鑒定(包括糖同化試驗(yàn)，糖發(fā)酵試驗(yàn)，CAFC酚氧化酶試驗(yàn)，尿酶試驗(yàn)，KNO3同化試驗(yàn)，脂肪酸需求試驗(yàn))，是真菌鑒定的金標(biāo)準(zhǔn)，系統(tǒng)準(zhǔn)確，缺點(diǎn)是程序繁瑣，耗時(shí)長，與臨床治療不太適應(yīng)。血清學(xué)玻片凝集試驗(yàn)，動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)，第80頁/共87頁血清學(xué)方法檢測真菌抗原成分

念珠菌感染和曲霉感染的血清學(xué)檢測可分為抗體檢測和抗原檢測兩大類；由于發(fā)生侵襲性真菌病的免疫受損宿主往往缺乏可檢測到的抗體，或者抗體的產(chǎn)生變化較大，因此檢測抗體對(duì)于系統(tǒng)性真菌感染的診斷意義不大，而目前用于臨床的血清學(xué)檢查主要屬于后者，即檢測血液循環(huán)中的抗原；常用的有下述幾種：

第81頁/共87頁（1）β-D-1,3葡聚糖（BDG）