促細(xì)胞增殖檢查新生牛血清支持檢測(cè)試驗(yàn)操作程序

分發(fā)研發(fā)部[]市場(chǎng)銷售部部[]]生產(chǎn)管理部]財(cái)務(wù)部[]目規(guī)定新生牛支持細(xì)胞增殖檢測(cè)試驗(yàn)操作程序指導(dǎo)操作者按本程序進(jìn)行新生牛支持細(xì)胞增殖檢測(cè)試驗(yàn)的操作適用范職總經(jīng)理負(fù)責(zé)本規(guī)程的定 標(biāo)《中民藥典》三部現(xiàn)行材料及設(shè) 供試品及參考品/供試，記錄批儀器/超凈臺(tái)。參見《超凈工作臺(tái)使用與程序》校驗(yàn)效期內(nèi)的37℃CO2孵箱1臺(tái)（記錄型號(hào)，編號(hào)）。使用參見《CO2孵箱 1臺(tái)（記錄型號(hào)，編號(hào)1臺(tái)（記錄型號(hào)，編號(hào)玻璃器皿及輔助用具/10ml、1ml試管，2支/已滅菌的操作衣及細(xì)胞瓶5個(gè)/批待檢使用無菌帽、無菌和橡膠檢查手套。記錄批號(hào)75%棉1111196孔細(xì)胞培養(yǎng)板，2個(gè)/無操作程檢定用具的準(zhǔn)備參見《物品準(zhǔn)備程序》燈、75%棉、細(xì)胞計(jì)數(shù)器、六孔稀釋板、96孔細(xì)胞板及燒杯放入超凈塑料桶、袋放入操作間每次操作前開啟超凈臺(tái)，打開紫外燈和風(fēng)機(jī)，60分鐘30用10ml吸管往生長(zhǎng)液中加供試，使終濃度為10%。每批供試配150ml培養(yǎng)液。從37℃CO2孵箱中拿出細(xì)胞瓶，放入超凈75%棉擦拭瓶頸待細(xì)胞沉下后，打開瓶塞，倒掉培養(yǎng)液，再加入加有供試的細(xì)胞培養(yǎng)10ml蓋好瓶塞，把細(xì)胞瓶重放回37℃CO2孵箱孵育2-3天填寫細(xì)胞培養(yǎng)記錄。填寫記錄如此反復(fù)操作，使細(xì)胞在加有10%供試的細(xì)胞培養(yǎng)液中適應(yīng)傳代三次，從37℃CO2孵箱中拿出細(xì)胞培養(yǎng)液，放入超凈臺(tái)75%棉擦拭瓶頸10ml10ml10ml1ml10倍梯度稀釋，用細(xì)胞計(jì)算器1x104/ml。1ml960.2ml737CO2孵箱中培養(yǎng)37℃CO21ml吸管加一滴到細(xì)10ml100.1ml用1ml吸管接種到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，每孔0.1ml，每批樣品接種置37℃CO2孵箱中培養(yǎng)一周，填寫記錄一周后把96孔板從37℃CO2孵箱中取出細(xì)胞倍增時(shí)間測(cè)定：取細(xì)胞峰值前一天記得的數(shù)（Y），接種細(xì)胞（X）及生長(zhǎng)時(shí)間（T）計(jì)算。A=log2Y/X，倍增時(shí)間 (小時(shí)克隆率=細(xì)胞生長(zhǎng)陽性孔數(shù)/接種細(xì)胞總孔數(shù)x100%細(xì)胞最大增殖濃度應(yīng)≥1x106/ml倍增時(shí)間應(yīng)≤20克隆率應(yīng)＞70%填寫支持細(xì)胞增殖檢測(cè)記錄。復(fù)核人復(fù)核并簽字注意事出現(xiàn)結(jié)果，應(yīng)在試驗(yàn)記錄中如實(shí)記附錄及派生記細(xì)胞增殖檢測(cè)記錄F-SOP-ZL009-相關(guān)文440ml《75%棉配制