DB32T 3925-2020白斑綜合征病 (WSSV)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)技術(shù)規(guī)范_第1頁
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ICS9g.Lg0DB32江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)DBtZTtZg—Z0Z0Technicalspecificationofdetectingwhite-spotsyndromevirus(WSSV)bydiatedisothermalamplificationLAMP江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前言州大學(xué)提出并歸口。LAMP方法。LAMP、蟹白斑綜合征病毒的鑒定及其檢疫。范性引用文件GBT682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法SCT8水生動(dòng)物產(chǎn)地檢疫采樣技術(shù)規(guī)范定義文件。增Loop-mediatedisothermalamplification(LAMP)4試劑和材料4.1水4.2模板制備緩沖液4.3BstDNV聚合酶UpL能在反復(fù)凍融或經(jīng)歷溫度劇烈變化情況后使用。4.4dNTPs混合物。4.5染色劑0×SYBRGreenI，-20℃避光保存。4.6引物AT4.7陽性對(duì)照4.8陰性對(duì)照主要儀器和設(shè)備移液器。成像儀或紫外燈。鍋。6.1取樣2制樣體積(μL)10×反應(yīng)緩沖液510μMdNTPs110μMFIP210μMBIP210μMF310μMB3滅菌雙蒸水6.4配制完全反應(yīng)預(yù)混液RL無酶反應(yīng)預(yù)混液加1μLBstDNA聚合酶混勻，配制完全反應(yīng)預(yù)混液。6.5加樣按每管24μL完全反應(yīng)預(yù)混液，分別在對(duì)應(yīng)管中加入待檢樣品模板1μL、陽性對(duì)照pET-28a(+)-234質(zhì)粒1μL、陰性對(duì)照pET-28a(+)空載質(zhì)粒1μL，混勻。6.6孵育將上述PCR管置于高精度恒溫儀中，于63.0℃±0.2℃反應(yīng)55min。6.7染色LAMP擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，取反應(yīng)液1μL，加入到含有38μL無菌雙蒸水、1μL100倍稀釋的10000×SYBRGreenI的200μLPCR管中，混勻后室溫放置3min，置于紫外燈或凝膠成像儀下觀或器械污染。常。A.1模板制備緩沖液A.2SYBRGreenIA.3TE緩沖液(p

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