《皮革生產(chǎn)過(guò)程控制分析》講稿

皮革生產(chǎn)過(guò)程控制分析緒論一、皮革分析檢驗(yàn)的任務(wù)和作用將分析化學(xué)理論和基本的分析方法應(yīng)用于皮革生產(chǎn)中，就成了我們的皮革分析檢驗(yàn)，它著重研究皮革生產(chǎn)工藝中化學(xué)分析方法和物理檢驗(yàn)技術(shù)。在工業(yè)生產(chǎn)中，要貫徹執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)化，提高產(chǎn)品質(zhì)量，降低成本，合理使用原材料，在生產(chǎn)過(guò)程中，要控制工藝條件，保證生產(chǎn)順利進(jìn)行，這些任務(wù)很大程度上都需要通過(guò)“分析檢驗(yàn)”工作提供數(shù)據(jù)來(lái)完成，那么皮革分析檢驗(yàn)則是為皮革生產(chǎn)提供可靠數(shù)據(jù)，以正確控制皮革生產(chǎn)工藝條件，保證生產(chǎn)順利進(jìn)行。而且還要提高皮革質(zhì)量，合理使用原材料，降低成本。在皮革生產(chǎn)過(guò)程中要用到許多我們稱之為原材料的東西，諸如制衣需要布料、造紙需要麥草、制陶需要陶土一樣，我們制革也要用到很多原材料，如，酸、堿、鹽、酶等，所用這些原材料往往由于存放時(shí)間較長(zhǎng)，其含量發(fā)生了變化，如酶軟化所用的酶制劑，往往由于出廠后經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期存放和長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)仍蚨姑杠浶Ч档停栽谑褂们氨仨氝M(jìn)行原材料的分析檢驗(yàn)；配好的鉻鞣液、甲醛鞣液必須測(cè)定Cr2O3、甲醛含量，然后才能確定鞣制時(shí)鞣液的用量（操作液的分析檢驗(yàn)）；成品革是否符合質(zhì)量要求則要對(duì)它的物理化學(xué)指標(biāo)進(jìn)行分析檢驗(yàn)（成品分析檢驗(yàn)）；一個(gè)新工藝、新方案的可行與否。可通過(guò)半成品及成品的分析檢驗(yàn)。如測(cè)皮質(zhì)含量，太低表示在制作過(guò)程中損失過(guò)多，若含量太高，則皮革板硬，說(shuō)明該方案仍需改進(jìn)（確定新工藝方案）。皮革廠家流出的污水，需通過(guò)化學(xué)分析檢驗(yàn)掌握流出情況，以便進(jìn)行污水處理，消除污染（污水分析）?？傊じ锓治鰴z驗(yàn)工作貫穿于整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程的始終，它在控制生產(chǎn)正常進(jìn)行和保證產(chǎn)品質(zhì)量方面有著“眼睛”和“哨兵”的作用，為科學(xué)研究、技術(shù)創(chuàng)新和新產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供依據(jù)，不敢說(shuō)它有心臟一樣的重要地位，但最其馬可以稱作是左膀右臂，試想一個(gè)人如果沒(méi)有眼睛或失去了左膀右臂是多么困難，那么制革行業(yè)如果沒(méi)有分析檢驗(yàn)這個(gè)“眼睛”和“哨兵”，也就象人沒(méi)眼睛一樣糟糕。對(duì)于我們大家來(lái)講他更是一種工具，新材料、新方案的采用、創(chuàng)新教育都離不開(kāi)分析檢驗(yàn)這個(gè)工具。對(duì)于一個(gè)專業(yè)的每門課程，都有他各自的重要性，作用有大、有小，但只能相互補(bǔ)充、相互協(xié)調(diào)，而不能相互取代，就象一個(gè)生物體的各個(gè)器官一樣，缺一不可。二、內(nèi)容按排基本按工藝流程進(jìn)行：原材料分析：酸、堿、鹽、酶等操作液分析：鉻鞣液、灰液等污水分析檢驗(yàn)：鉻、硫、COD等半成品、成品革理化分析。學(xué)會(huì)以上內(nèi)容的方法，操作技術(shù)、了解各檢驗(yàn)方法的測(cè)定意義、目的、原理，以便在參加工作中能夠正確適用這些方法，解決生產(chǎn)中的技術(shù)問(wèn)題和進(jìn)行科研工作。三、皮革分析檢驗(yàn)的特點(diǎn)1．準(zhǔn)確度取決于生產(chǎn)的要求，根據(jù)被測(cè)物質(zhì)的含量決定誤差范圍，皮革分析檢驗(yàn)屬于工業(yè)分析的范疇。百分之幾到千分之幾工業(yè)分析的公差范圍被測(cè)組分含量(﹪)公差(用相對(duì)誤差來(lái)表示)80~90(99)0.4~0.3(0.1)40~800.6~0.420~401.0~0.610~201.2~1.05~101.6~1.21~55.0~1.60.1~12.0~5.00.01~0.150~20大值—小值相對(duì)誤差=——————×100﹪平均數(shù)例如：皮質(zhì)分析，誤差小于0.7﹪。（在含量小于40﹪時(shí)）。2．由分析對(duì)象決定取樣方法3．保證準(zhǔn)確度的情況下在短時(shí)間內(nèi)完成。四、皮革分析的學(xué)習(xí)方法和基本要求實(shí)踐性很強(qiáng)的科目，實(shí)驗(yàn)時(shí)數(shù)約占總學(xué)時(shí)的2/3，所講內(nèi)容只有通過(guò)實(shí)驗(yàn)才能融匯貫通，得以消化掌握，所以學(xué)習(xí)本課程的大部分時(shí)間，要在實(shí)驗(yàn)室度過(guò)，所以特別注意理論聯(lián)系實(shí)際，并在此基礎(chǔ)上加強(qiáng)基本操作的訓(xùn)練。知識(shí)在于積累對(duì)于這門課顯得更為重要，就是注意平時(shí)的學(xué)習(xí)。對(duì)于每一個(gè)項(xiàng)目的測(cè)試，每一個(gè)實(shí)驗(yàn)、每一個(gè)方法都要掌握它的基本理論、測(cè)試條件及有關(guān)計(jì)算。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)做好予習(xí)工作，明確每個(gè)實(shí)驗(yàn)的目的。要求仔細(xì)閱讀操作規(guī)程，明了每一步驟的意義和相關(guān)關(guān)系，訂好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃，做到心中有數(shù)。在實(shí)驗(yàn)中注意觀現(xiàn)象，認(rèn)真思考，做詳細(xì)記錄。實(shí)驗(yàn)后及時(shí)小結(jié)，寫(xiě)出報(bào)告心得體會(huì)，不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)、教訓(xùn)，提高實(shí)驗(yàn)技巧，最后應(yīng)達(dá)到對(duì)結(jié)定資料自行閱讀后，能理解基本原理，抓住關(guān)鍵問(wèn)題。具有獨(dú)立進(jìn)行分析的能力，同時(shí)通過(guò)對(duì)本課程的學(xué)習(xí)，可以使同學(xué)們掌握一些基本的分析方法，將理論和實(shí)踐緊密地聯(lián)系起來(lái)，獲得分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力的訓(xùn)練。培養(yǎng)嚴(yán)肅認(rèn)真，實(shí)事求是的科學(xué)態(tài)度和精密細(xì)致地進(jìn)行科研的技巧技能，為將來(lái)從事各項(xiàng)專業(yè)工作和科研工作打下良好的基礎(chǔ)。報(bào)告要求：目的、原理、實(shí)驗(yàn)操作、記錄、數(shù)據(jù)處理、計(jì)算的結(jié)果、討論。實(shí)驗(yàn)室要求：1．按時(shí)到、遵守實(shí)驗(yàn)室紀(jì)律。2．不抽煙、不唱歌、不串門、不胡鬧。3．進(jìn)實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)檢查所需東西是否帶齊：鑰匙、課本、筆記本、實(shí)驗(yàn)記錄本、預(yù)習(xí)報(bào)告、上次的實(shí)驗(yàn)報(bào)告本等。4．實(shí)驗(yàn)前考察：提問(wèn)或抽查方式，記入平時(shí)成績(jī)。5．實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)登記實(shí)驗(yàn)結(jié)果，方能離開(kāi)，報(bào)告一次交清。6．打掃衛(wèi)生。個(gè)人衛(wèi)生：整理儀器、擦桌子；值日生：掃地、拖地、收拾儀器藥品、洗水池等。

Na2S含量的測(cè)定一、概述1．Na2S的性質(zhì)Na2SM=78.05粉粒狀。Na2S?9H2OM=240.2無(wú)色或微紫色棱柱形晶體。一般市售Na2S含Na2S50~60﹪。硫化堿、臭堿、火堿。Na2S+2H2O＝NaOH+NaHS強(qiáng)堿性，故使用應(yīng)戴手套加以防護(hù)，防止對(duì)皮膚及眼睛腐蝕。Na2S+2H+==2Na++H2S↑有毒而易燃故Na2S放置應(yīng)與酸分開(kāi)2Na2S+2O2+H2O=Na2S2O3+2NaOH空氣潮解使?jié)舛冉档?。S2-極易被空氣中的氧氧化為Na2S2O3或Na2SO4。2．Na2S在制革生產(chǎn)中的作用那么Na2S在制革生產(chǎn)中到底有什么作用呢？主要用于脫毛：灰堿法或堿堿法R-S-S-R1+2Na2S→R-SNa+R1-SNa+Na2S2Ca（OH）2+2NaHS→Ca（SH）2+2NaOHR-S-S-R1+Ca（SH）2OH-2R-SH+CaS+S↓皮膠原在強(qiáng)堿作用下膨脹分散，HS-有還原性，可破壞角蛋白的雙硫鍵并阻止毛內(nèi)新的交聯(lián)鍵的形成，破壞護(hù)毛作用，大大加快脫毛速度。3．那么為什么要測(cè)定Na2S的含量呢？（1）原材料Na2S?9H2O易在空氣中吸收CO2、O2、H2O等而轉(zhuǎn)為Na2S2O3、Na2CO3、Na2SO4、NaOH等，從而降低Na2S的含量，使用前必須分析其含量，確定用量。（2）配制的脫毛浸灰液，脫毛效果的好壞直接與Na2S的含量有關(guān)，一般Na2S4~6g/L；灰堿涂灰脫毛要求Na2S濃度達(dá)8~13波美，使用前必須測(cè)定Na2S含量保證脫毛工序順利進(jìn)行。（3）脫毛后的廢液，其殘留的硫化物也要回收使用，減少污染，所以應(yīng)測(cè)其含量提供數(shù)據(jù)，或進(jìn)行三廢處理。二、高鐵氰化鉀法測(cè)定浸灰液中Na2S含量的測(cè)定原理氧化-還原滴定法以K3[Fe（CN）6]為滴定劑，以Na2[Fe（CN）5（NO）]為指劑示，在堿性介質(zhì)中采用先粗滴定，再后加指示劑精確滴定的方法，根據(jù)K3[Fe（CN）6]的用量和濃度計(jì)算Na2S的含量。1．化學(xué)反應(yīng)原理S2-具有還原能性：在OH-中：S+2e-S2-E0=-0.48V在H+中：S+2H++2eH2SE0=0.141V在OH-中易被氧化，還原能力強(qiáng)。K3[Fe（CN）6]/K4[Fe（CN）6]E0=0.36VΔE0=0.36-(-0.48)=0.84VΔE0=0.36-0.141=0.219V在堿性介質(zhì)中，電位差大，故反應(yīng)在OH-中進(jìn)行。Na2S+2K3[Fe(CN)6]OH-S↓+2NaK3[Fe(CN)6]還原劑氧化劑2．指示原理氧化還原法滴定指示劑（1）氧化還原指示劑是一些比較復(fù)雜的有機(jī)化合物，它們本身具有氧化還原性，它的氧化型和還原型具有不同的顏色。如二苯胺磺酸鈉、鄰菲羅啉。（2）指示劑與氧化劑或還原劑發(fā)生顯色反應(yīng)某些試劑能與標(biāo)準(zhǔn)溶液或被測(cè)(滴)物質(zhì)產(chǎn)生顯色反應(yīng)。就可以利用該試劑作指示劑。如淀粉指示劑（3）自身指示劑利用標(biāo)準(zhǔn)溶液本身的顏色變化的指示終點(diǎn)如KMnO4在此屬于第（2）類(CN)5Na2S+Na2[Fe(CN)5(NO)]→Na4FeN=O‖S2-紫紅色絡(luò)合物在含有硫化物的灰液中加入亞硝酰鐵氰化鈉Na2[Fe(CN)5（NO）]，生成了紫紅色的絡(luò)合物。用K3[Fe（CN）6]滴定時(shí)，K3[Fe（CN）6]首先與溶液中游離的S2-進(jìn)行反應(yīng)，至到接近終點(diǎn)，游離S2-被氧化完，此時(shí)K3[Fe（CN）6]奪取絡(luò)合物中S2-使絡(luò)合物解體，紫色消失，顏色發(fā)出突變指示終點(diǎn)。顏色變化：深紫色→淺紫→乳白色中透紫→幾乎乳白→微黃（過(guò)量半滴的K3[Fe（CN）6]）。三、試劑1．0.1mol/LNaOH水溶液.(調(diào)節(jié)堿性)；2．0.1mol/LK3[Fe（CN）6]水溶液深紅色單斜晶體赤血鹽稱取32.925gK3[Fe（CN）6]配成1000ml容量瓶。易分解放于棕色容量瓶中避光保存?；鶞?zhǔn)物可直接配制。3．0.4%的亞硝酰鐵氰化鈉Na2[Fe(CN)5（NO）]·2H2O水溶液。棕色瓶保存。4gNa2[Fe(CN)5（NO）]·2H2O→1000ml。不穩(wěn)定，在中水中逐漸變?yōu)榫G色，現(xiàn)用現(xiàn)配。有毒，使用時(shí)小心。四、操作四層沙布過(guò)濾灰液1．粗滴定50mlH2O5ml0.1mol/LNaOH250ml三角瓶→K3[Fe（CN）6]滴定→淡黃→讀取V110或25ml試液1ml指示劑深紫色2．精確滴定50ml煮沸過(guò)的H2O（趕走CO2）5ml0.1mol/LNaOH→K3[Fe（CN）6]快速滴定到(V1-0.5)ml10或25ml試液+1ml指示劑→繼續(xù)用K3[Fe（CN）6]滴定到淡黃色。精確滴走兩次：V2、V3注意：1．終點(diǎn)應(yīng)仔細(xì)觀察，第二、三終點(diǎn)不能以第一瓶為參照。滴定應(yīng)迅速，測(cè)試液不能長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。2．指示劑即使在散射光的照射也能分解，所以應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，且有毒，小心使用。3．加液次序采用水、NaOH、試液，減少S2-損失，但平行實(shí)驗(yàn)加液次序應(yīng)一致。五、計(jì)算（M×V）Fe3+Na2S（g/L）=——————×78.052×V試根據(jù)化學(xué)反應(yīng)式可知：Na2S+2K3[Fe(CN)6]OH-S↓+NaK3[Fe(CN)6]1molNa2S2molK3[Fe（CN）6]六、討論1．介質(zhì)選擇。為什么選堿性介質(zhì)？（四點(diǎn)理由）（1）S/S2-電對(duì)在堿性介質(zhì)中電位低，S2-易被氧化即還原能力強(qiáng)。E0S/S2-=-0.48V（2）S2-+[Fe（CN）6]3+→S↓+[Fe（CN）6]4+能斯特方程：0.059[S]E=E0+————lg———n[S2-]

[S2-]↑E↓對(duì)反應(yīng)越有利；[S2-]↓E↑對(duì)反應(yīng)越都不利。在酸性介質(zhì)中S2-+2H+H2S↑[S2-]↓不利于反應(yīng)，且H2S有毒。（3）S2-極易水解S2-+H2OHS-+OH-Kh=KW/Ka2=10-14/（7.1×10-15）=1.41很大加堿抑制水解[S2-]↑E↓有利于反應(yīng)。（4）堿性介質(zhì)是K3[Fe（CN）6]的安全介質(zhì)K3[Fe（CN）6]+6H+3K++Fe3++6HCN↑(劇毒)所以使用K3[Fe（CN）6]非但不能在一般酸性介質(zhì)中，而且還應(yīng)與酸分開(kāi)放置?？偵纤?，滴定反應(yīng)在堿性介質(zhì)中，且控制在PH=9～12。否則PH太高S2-→S有可能繼續(xù)被氧化到SO42-。使計(jì)量關(guān)系打亂。2．為什么進(jìn)行粗滴定，再后加指示劑精滴定？（1）在堿性介質(zhì)中S2-極易被空氣中氧所氧化：2Na2S+2O2+H2O→Na2S2O3+2NaOH造成S2-的損失，影響測(cè)定結(jié)果，所以必須減少灰液與空氣接解時(shí)間，即進(jìn)行粗滴定，再滴定時(shí)可根據(jù)初滴定數(shù)值，加快滴定速度，縮短滴定時(shí)間，提高測(cè)定確度。（2）S2-與Na2[Fe（CN）5(NO)]所生成的深紫色絡(luò)合物的穩(wěn)定性隨時(shí)間的增長(zhǎng)而增加，破壞困難，終點(diǎn)不明顯，影響測(cè)定結(jié)果，所以采用后加指示劑的辦法。根據(jù)初滴數(shù)據(jù)，提前在初滴數(shù)的0.5～1ml加入批示劑，縮短絡(luò)合物存在時(shí)間，減小穩(wěn)定性，變色敏銳，測(cè)定準(zhǔn)確。3．對(duì)本方法的評(píng)價(jià)優(yōu)點(diǎn)：快速,Na2S試液測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。適用于新脫毛液、原材料Na2S的含量分析。缺點(diǎn)：微量分析誤差大，不能去除有機(jī)物、蛋白質(zhì)分解物等有機(jī)物的干擾。脫毛廢液、廢水S2-的分析就不能用。

思考題1．如何配制0.1mol/L的K3[Fe(CN)6]標(biāo)準(zhǔn)溶液?2．測(cè)定固體Na2S(含Na2S在50~60﹪)，一般先將其配制成一定體積一定濃度的溶液，然后再移取25ml進(jìn)行測(cè)定，請(qǐng)問(wèn)用0.1mol/LK3[Fe(CN)6]滴定，則Na2S溶液的濃度應(yīng)為多少范圍較為合適?若配制在250ml容量瓶中，試確定Na2S試樣的稱量重量?并寫(xiě)出計(jì)算公式。如果直接稱量進(jìn)行測(cè)定，又當(dāng)稱多少?如何計(jì)算?1．32.9250g→1000ml容量瓶2．解：1molNa2S2molK3[Fe(CN)6]1/2×0.1×25mmol0.1×25mmol0.05×25mmolMNa2S=0.05MW試=0.05×0.25×78.05/（50~60﹪）=（1.9～1.6）g(M×V)Fe3+×78.05×V容Na2S(﹪)=————————————×100%2×V試×1000×W試(M×V)Fe3+×78.05Na2S(﹪)=——————————×100﹪2×W試×1000

蛋白酶活力測(cè)定一、概述1．什么是酶？酶是一種生物催化劑，是由動(dòng)植物體中提取或由微生物發(fā)酵而產(chǎn)生的，具有特殊催化功能的蛋白質(zhì)。（1）催化速度快。牛肉2～3hr可在胃腸中被酶消化。20﹪HCL需4倍，100℃20多hr。（2）酶作用的特異性。專一性、選擇性。通常被酶催化的物質(zhì)稱為該酶作用的底物。一種酶只作用一種底物：淀粉酶：只能催化淀粉水解→糊精、低聚糖；蛋白酶：只能催化蛋白質(zhì)水解→氨基酸、肽；脂肪酶：脂肪→脂肪酸→甘油。（3）酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì)。四級(jí)結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。由許多不同種類的氨基酸按一定順序排列構(gòu)成的多肽鏈。具有一、二、三、四級(jí)空間結(jié)構(gòu)。激烈振蕩、加熱、紫外線、X-射線的照射，重金屬鹽作用，會(huì)改變結(jié)構(gòu)。而（失活）變性，失去催化能力，這種現(xiàn)象叫做酶的失活；與H+、OH+成鹽；兩性；成色。2．影響酶催化反應(yīng)的因素（1）底物濃度底物濃度低，酶的活性中心，沒(méi)完全和底物結(jié)合，因此隨底物濃度的增加反應(yīng)速度加快，當(dāng)C↑=CO飽合濃度時(shí)，酶的活性中心和底物作用完全。反應(yīng)速度達(dá)到極限值——最大的反應(yīng)速度。當(dāng)C>CO增加時(shí)，因酶活性中心已被占完再C↑，對(duì)V也無(wú)影響。故使酶催反應(yīng)達(dá)到最大速度，必須給底物濃度的大約CO的作用條件。Vmax

底物濃度C飽和濃度C0（2）PH值的影響酶是蛋白質(zhì)，屬于兩性物質(zhì)，兩個(gè)極性基。NH2NH3+∣∣R—C—COOHR—C—COO-∣∣HH不同的PH值都有不同的離解狀態(tài)，而不同的離解狀態(tài)又有不同的活力，而要使酶的活力最大，必需使活性基團(tuán)處在最佳理解狀態(tài)，而每一種酶要達(dá)到他的最大活力，必須處在它們最佳離解狀態(tài)。也就是說(shuō)必須控制一個(gè)最適合PH。每一種酶都有其自己的最適PH值。OD

PH最適PH實(shí)際應(yīng)用中可根據(jù)酶的最適PH值不同將酶分為酸性、中性、堿性蛋白酶。酸性蛋白酶。最適PH在酸性范圍內(nèi)。如：3350蛋白酶PH最適2～4；7401蛋白酶PH最適3.0中性蛋白酶。最適PH在中性范圍內(nèi)。如：1398PH最適7～7.5；166PH最適7～8堿性蛋白酶。最適PH在堿性范圍內(nèi)。如：2709PH最適9～11；209PH最適9.5～11（3）溫度的影響。T↗T最適速度加快。ODT最適↗蛋白酶受熱失活V↘。每個(gè)酶都有最適溫度。一般在40℃±。T最適T（℃）

（4）作用時(shí)間的影響K=dQ/dt直線Q（反應(yīng)物的消耗量或生成物的生成量）t↗toV恒定to↗V↙to—反應(yīng)初速度時(shí)間

tto結(jié)論：酶催化反應(yīng)必須在反應(yīng)初速度時(shí)間內(nèi)，選擇最適溫度、最適PH，飽合底物濃度的條件下才能達(dá)到最大反應(yīng)速度，即此時(shí)酶的活力最大。對(duì)于測(cè)定酶活力時(shí)，只有這樣才能消除諸多因素的影響，比較各種酶活力的大小。（最大活力、可比性）。3．什么是酶的活力?酶催化底物進(jìn)行反應(yīng)的本領(lǐng)。酶催化底物反應(yīng)在一定時(shí)間內(nèi)生成物越多或消耗的反應(yīng)物量越大，則催化速度越快，活力越高。蛋白酶的活力定義：在一定溫度、PH值條件下，1g酶粉或1ml酶液，每分鐘催化水解酪蛋白（或血紅蛋白）所產(chǎn)生的酪氨酸的微克數(shù)，稱為酶的活力。表示為：?jiǎn)挝?g或單位/ml。通常人們愛(ài)講多少個(gè)單位。如一般出廠酶活力為5萬(wàn)單位，即：50000μg/g=0.05g酪氨酸/1g酶粉。4．測(cè)定意義制革生產(chǎn)中，蛋白酶主要用于酶脫毛，利用酶催化作用，促使生皮毛囊及周圍的蛋白質(zhì)水解而使毛脫落。目前酶法脫毛所用的酶制劑種類也比較多。根據(jù)每種酶作用的條件不同，主要是最適PH不同而分為酸性蛋白酶、中性蛋白酶和堿性蛋白酶。其中酸性蛋白酶可用于毛皮的軟化。在制革上則主要選用中性和堿性蛋白酶來(lái)脫毛。而這些酶在出廠后的長(zhǎng)途運(yùn)輸及存放過(guò)程中，由于條件的變化、振蕩、陽(yáng)光等的作用，其活力要有所改變，故在使用之前必須測(cè)定其活力，作為計(jì)算酶制劑用量的依據(jù)，以達(dá)到預(yù)期的脫毛效果。即現(xiàn)測(cè)現(xiàn)用。二、測(cè)定原理酶催化1．酪蛋白酪氨酸

條件穩(wěn)定有關(guān)條件，使酶作用底物一定時(shí)間，測(cè)定底物酪蛋白水能所產(chǎn)生的酪氨酸的量，在相同條件下，所生成酪氨酸的量越多，說(shuō)明酶催化水解能力越強(qiáng)，活力越大。有關(guān)條件：底物濃度C反應(yīng)溫度T反應(yīng)PH值反應(yīng)時(shí)間t措施：飽合濃度最適溫度最適PH初速度時(shí)間內(nèi)對(duì)酶而飽合的濃度恒溫水浴緩沖溶液在此區(qū)間例：5370.5%酪蛋白40℃PH=3.010min27090.5%酪蛋白40℃PH=1010min13980.5%酪蛋白40℃PH=7.510min

那么水解產(chǎn)物酪氨酸的量如何測(cè)定呢？采用分光光度法測(cè)定。福林—酚法。2．顯色福林試劑+酪氨酸→藍(lán)色物質(zhì)福林試劑在堿性條件下，易被還原性物質(zhì)還原生成藍(lán)色絡(luò)合物質(zhì)（鉬藍(lán)、鎢藍(lán)的混合物）。而酪氨酸所含的酚羥基具有還原性，可在堿性條件下將福林試劑還原成藍(lán)色物質(zhì)。藍(lán)色的深淺與酪氨酸的多少成正比。那么藍(lán)色的深淺如何確定呢？通常是通過(guò)比色測(cè)其消光度來(lái)確定。HO——CH2—CH—COOH∣（酪氨酸）NH23．朗伯-比爾定律及其應(yīng)用當(dāng)一束單色光（波長(zhǎng)一定）通過(guò)有色溶液時(shí)，溶液的質(zhì)點(diǎn)要吸收一部分光能，光強(qiáng)減弱。若有色溶液的濃度C不變，液層厚度L越厚，由于增加了溶液的質(zhì)點(diǎn)，對(duì)光的吸收愈多，即光的強(qiáng)度減弱越多。若L不變，C增大，同樣光被吸收的也愈多。且通過(guò)實(shí)踐證明，有色溶液對(duì)光的吸收程度，也叫消光度與溶液的濃度C及液層厚度L的乘積成正比。這就是光的吸收定律。即朗伯-比爾定律。公式表示如下：E=KＣL=lg（I0/I）E——吸光度、消光值A(chǔ)或光密度ODK——比例系數(shù)或消光系數(shù)。其大小與有色溶液的性質(zhì)。入射光的波長(zhǎng)以及溶液的溫度有關(guān)。測(cè)定時(shí)，溶液性質(zhì)一定，選用此溶液最大吸收波長(zhǎng)，固定溶液的溫度，則K為一個(gè)常數(shù)，且一般都選用同樣厚度的比色皿，即液層厚度在整個(gè)測(cè)定中保持不變。則K*L也為一個(gè)常數(shù)。則：OD=KLC=K′C這就是說(shuō)對(duì)于一種有色溶液的測(cè)定，選用最大吸收波長(zhǎng)，固定比色皿厚度，在一定溫度下，光密度OD與有色溶液的濃度成直線關(guān)系。結(jié)合前面所講的，藍(lán)色的深淺，與藍(lán)色物質(zhì)的濃度成正比，與酪氨酸的多少成正比，而消光度又與有色溶液的濃度成正比，所以被測(cè)組分的濃度（在此為酪氨酸的濃度）與消光度OD成直線關(guān)系。OD=KC組分[X]→[RX]→OD[X]OD另：OD=KCL=lg（Io/I）=－lg（Io/I）=－lgT其中T=I/Io叫透光度或透光率一般分光光度計(jì)讀盤(pán)上常有OD光密度和T透光度兩種讀數(shù)OD=－lgT。而測(cè)定時(shí)一般都用消光度，然后計(jì)算其濃度。因?yàn)橄舛扰c有色溶液的濃度成正比，是直線關(guān)系，而透光度T的負(fù)對(duì)數(shù)才與溶液的濃度C成正比；注意：為了保證測(cè)定準(zhǔn)確性必須：①選擇λmax有色溶液對(duì)于不同波長(zhǎng)的光選擇吸收。必須在有色溶液的最大波長(zhǎng)吸收處。只有在最大波長(zhǎng)處，濃度較小的改變，可引起OD較大的改變，靈敏度高。不同的有色溶液最大波長(zhǎng)不同，如測(cè)定酶活力，鉬藍(lán)、鎢藍(lán)的最大吸收波長(zhǎng)為680nm，我們?cè)诖瞬ㄩL(zhǎng)下測(cè)定。②OD值的范圍OD值通常落在0.2～0.6范圍，因OD=0.43時(shí)測(cè)定誤差最小，(可計(jì)算出)可通過(guò)試樣稱量，改變?nèi)芤簼舛龋蜻x擇不同厚度的比色皿來(lái)調(diào)節(jié)OD值的范圍。即然OD=KC組分，只要知道K，即OD與被測(cè)組分濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系(直線斜率)，要測(cè)某組分先測(cè)OD值，即可計(jì)算出組分含量。那么OD與組分濃度的對(duì)應(yīng)關(guān)系如何確定呢?即如何確定K，即如何制作這條直線。4．制作標(biāo)準(zhǔn)曲線在比色分析中，應(yīng)用朗伯－比爾定律進(jìn)行測(cè)定，首先配制一個(gè)已知系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別顯色測(cè)其光密度OD值。得到系列對(duì)應(yīng)的光密度值。然后以O(shè)D為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作圖，得到一條過(guò)原點(diǎn)的直線，稱為標(biāo)準(zhǔn)曲線，它反應(yīng)了OD與組分含量的對(duì)應(yīng)關(guān)系。然后測(cè)定未知有色溶液的OD，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出與被測(cè)溶液濃度相對(duì)應(yīng)的C值。通過(guò)計(jì)算可求出被測(cè)溶液組分的含量。如：要測(cè)水解產(chǎn)生的酪氨酸的量，首先用酪氨酸配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。顯色測(cè)OD值.然后作圖或求出直線斜率K，再進(jìn)行計(jì)算。綜上所述，可以總結(jié)福林酚法測(cè)定蛋白酶活力的方法要點(diǎn)：用分析純的酪氨酸配成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在一定條件下（溫度、PH、時(shí)間）與福林試劑反應(yīng)顯色，再在分光光度計(jì)上測(cè)定光密度OD值。繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后，稱取一定量的酶制劑試樣，配成適當(dāng)濃度的溶液，以過(guò)量的酪素為底物在一定溫度、PH條件下與上述酶液作用。水解反應(yīng)進(jìn)行一定時(shí)間后，加入三氯醋酸，終止水解反應(yīng)，并使未水解的酪素沉淀，過(guò)濾，水解產(chǎn)物就留在濾液中，移取濾液，加入碳酸鈉中和過(guò)量的三氯醋酸，調(diào)節(jié)PH為堿性，加入福林試劑，顯色后在分光光度計(jì)上測(cè)出光密度OD與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，計(jì)算出被測(cè)酶制劑的活力。三、試劑本次實(shí)驗(yàn)所用試劑較多，對(duì)于主要試劑重點(diǎn)掌握其配制方法和作用。1．福林試劑——顯色劑——一種雜多酸兩個(gè)或兩個(gè)以上的酸酐組成的酸叫多酸。含有相同酸酐的多酸叫同多酸。如：H2Cr2O7→H2O·2CrO3而多酸中含有不相同的酸酐時(shí)稱為雜多酸。如：磷鉬酸H3[P（Mo3O10）4]、磷鎢酸H3[P（W3O10）4]福林試劑就是雜多酸磷鎢酸和磷鉬酸的混合物，是磷酸作為原酸，PO43-中的O2-完全被作為配位酸根的Mo3O102-和W3O102-所取代，形成了以原酸PO43-的成酸原子P為中心原子，其它酸根Mo3O102-、W3O102-作為配位體的配位酸磷鉬酸、磷鎢酸。一種絡(luò)合物。雜多酸的制備只需將相應(yīng)的組分在酸性條件下混合并給以一定的條件，如加熱、煮沸等。福林試劑的制備，就是制備雜多酸的過(guò)程。MoO42-、WO42-離子在PH降低到酸性范圍，則易形成多酸根離子Mo3O102-、W3O102-。

Na2Wo4·2H2O100g Na2MoO4·2H2o25g回流Li2O450gH2O100ml———→10hr+H2O50ml→混勻+溴水—→15`85﹪H3PO450mlΔ Δ濃HCL100ml→冷卻→黃色→過(guò)濾→金黃色濾液入棕色試劑瓶。用時(shí)按1∶2稀釋?？砷L(zhǎng)期保存。雜多酸只有在酸性條件下才是穩(wěn)定的，在堿性條件下雜多酸中的配位酸根很容易被還原成各自元素的還原產(chǎn)物而呈現(xiàn)不同的顏色。如：福林試劑與酪氨酸成鉬藍(lán)和鎢藍(lán)。HO——CH2—CH—COOH所含的酚羥基具有還原性，可在堿性條件下將福林∣還原性NH2試劑還原。加入Br2將福林試劑中的還原性物質(zhì)氧化得很干凈。2．10﹪三氯醋酸CL3CCOOH水溶液，調(diào)節(jié)PH，終止酶促反應(yīng)；3．0.55M碳酸鈉溶液。中和過(guò)量的三氯醋酸，調(diào)PH為堿性利于顯色；4．緩沖溶液維持酶催反應(yīng)的在最適PH下進(jìn)行。測(cè)定不同種類的酶，則選用不同體系的緩沖溶液。以提供最適PH。如：測(cè)定537酸性蛋白酶選用PH=3.0的緩沖溶液檸檬酸—檸檬酸鈉緩沖溶液PH=3.0A液：0.1mol/L檸檬酸。21.01gC6H8O7·H2O →1000mlCH2—COOHHO—C—COOHCH2—COOHB液：0.1mol/L檸檬酸納。29.4gNa3C6H5O7·2H2O→ 1000ml用時(shí)，A∶B=18.6∶1.4混合即可。弱酸—弱酸鹽緩沖體系PH=Pka1-lg（C酸/C鹽）=3.13-lg（C酸/C鹽）檸檬酸Pka1=3.13Pka2=4.76Pka3=6.40如測(cè)2709蛋白酶，最適PH=9～11，則選用硼砂—?dú)溲趸{緩沖溶液(PH=10)。A液：0.055mol/LNa2B4O7·8H2O。19g→1000ml水溶液B液：0.2mol/LNaOH。8g → 1000ml水溶液使用時(shí)取A液50mlB液43ml+H2O → 200mlNa2B4O7+7H2O===NaOH+4H3BO3H3BO3+H2O===B(OH)4-+H+一元弱酸Ka=5.6×10-10弱酸—弱酸鹽緩沖體系PH=PKa-lg（C酸/C鹽）=9.24-lg（C酸/C鹽）如測(cè)1398蛋白酶選用0.02mol/L的磷酸鹽緩沖溶液A液：0.2mol/LNaH2PO4溶液。31.2gNaH2PO4·2H2O→1000mlB液：0.2mol/LNa2HPO4溶液。71.7gNa2HPO4·12H2O→1000mlA液28ml+B液72ml，+H2O到1000ml，PH=7.2；A液16ml+B液84ml，+H2O到1000ml，PH=7.5。弱酸—弱酸鹽緩沖體系PH=PKa-lg（C酸/C鹽）[H2PO4-]=7.21-lg————[HPO4=]Ka2=6.17×10-8四、操作手續(xù)(一)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線為了確定光密度OD值與酪氨酸之間量的關(guān)系1．配制100mg/ml酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液分析純酪氨酸105℃烘干至恒重。用直接法準(zhǔn)確稱取0.1000g于50ml小燒杯，用0.1mol/L的HCL溶解并定容到100ml容量瓶中?！?μg/ml=1000mg/ml(保存在冰箱中)。移取10ml上述溶液，用0.1mol/L的HCL溶解并定容到100ml容量瓶中?！?00μg/ml。2．系列濃度的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液配制取干燥試管編號(hào)按下表操作。管號(hào)酪氨酸濃度（μg/ml）加100μg/ml酪氨酸的量（ml）加蒸餾水的量（ml）00010110192202833037440465505566064

用5或10ml刻度移液管移取由于6號(hào)管濃度較大，顯色后顏色太深，測(cè)量不準(zhǔn)，偏離吸收定律較大，所以往往只做到5號(hào)，應(yīng)使測(cè)量值在0.2～0.6范圍內(nèi)。解釋：（1）為什么酪氨酸要干燥至恒重？在此酪氨酸作為基準(zhǔn)物，所以應(yīng)干燥至恒重，防止含有水份帶來(lái)誤差。（2）為什么稱取酪氨酸的量為0.1000g？為了作圖描點(diǎn)在軸上好表示，故希望系列濃度取整數(shù)，這樣更準(zhǔn)確，故稱取酪氨酸的量應(yīng)為0.1000g，減少誤差。（3）為什么酪氨酸用鹽酸溶解？凡有需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)驗(yàn)，為了減少誤差，總是盡可能的使制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的條件與實(shí)際測(cè)定條件一致，消除因條件差異所帶來(lái)的誤差，提高測(cè)定準(zhǔn)確度。酪氨酸是兩性物質(zhì)，酸堿均可用溶，而為什么在此用鹽酸不用堿呢？正是考慮上述原因，因?yàn)槊复呋业鞍姿夥磻?yīng)是用來(lái)終止的，酪蛋白水解的酪氨酸是處在酸性介質(zhì)中的，用酸溶解剛好前后介質(zhì)一致。3．系列濃度的酪氨酸顯色并測(cè)OD值從上述配制的系列濃度的酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液中各移取1ml于干試管中分別加5ml0.55mol/LNa2CO3，福林試劑1ml，搖勻放入40℃水浴上顯色10分鐘，應(yīng)顯藍(lán)色，冷卻到室溫。用0號(hào)管調(diào)零，1cm的比色皿，680nm波長(zhǎng)下測(cè)OD值。說(shuō)明：（1）所加各試劑均用刻度移液管移取，保證體積一至。（2）顯色后需冷卻到室溫，因?yàn)镵值受溫度的影響。（3）每一個(gè)點(diǎn)均測(cè)兩份平行試樣，誤差ΔOD≤0.01，這樣算來(lái)共用3×6＝18支干試管。4．描點(diǎn)作圖（1）畫(huà)圖求直線斜率的倒數(shù)K應(yīng)為一條過(guò)原點(diǎn)的直線。各點(diǎn)OD取平均試樣的平均值，為了便于后面計(jì)算。應(yīng)求出K=ΔC/ΔOD（μg/mlOD）即OD為一個(gè)單位時(shí)所相當(dāng)?shù)睦野彼釢舛?。?）計(jì)算求K根據(jù)各點(diǎn)所測(cè)平均OD分別求出K=C/OD取K=（K1+K2+K3+K4+K5）/5（3）直接查取（4）電腦做圖、計(jì)算、使用四種方法均可使用，道理都一樣。標(biāo)準(zhǔn)曲線所用儀器不同，試劑不同或其它條件的不同均會(huì)引起變動(dòng)。故應(yīng)定期校正。更換儀器、更換試劑。標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)重新制作。同樣實(shí)測(cè)應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線條件一致。儀器、試劑、比色皿厚度、操作等。注意：直線應(yīng)落在一群點(diǎn)的中間，同時(shí)縱橫坐標(biāo)的比例，使直線處于坐標(biāo)系的中間。（二）測(cè)定蛋白酶活力——實(shí)測(cè)1．底物配制測(cè)定酸性蛋白酶（如537）0.5﹪?yán)宜嘏渲品Q取酪素0.5g,加入約50mlPH=3.0的緩沖溶液攪勻調(diào)溶，然后在沸水中加熱，到清晰透明冷卻后再以上述緩沖溶液定容到100ml，若有泡沫，可加1～2滴無(wú)水酒精消除。置于4℃的冰箱中保存，超過(guò)5天另外配制。測(cè)定堿性蛋白酶（如2709）或中性蛋白酶（如1398）0.5﹪?yán)宜嘏渲?.5g酪素不必太精確，工業(yè)大平即可，(多點(diǎn)少點(diǎn)沒(méi)關(guān)系)于小燒杯中，用0.5MNaOH潤(rùn)漲加相應(yīng)的緩沖溶液，在沸水浴上溶解(透明液體)，冷卻，用精密試紙檢查調(diào)節(jié)PH為測(cè)酶的最適PH,（如PH=10；PH=7.5）然后用相應(yīng)的緩沖溶液定容到100ml，置于4℃的冰箱中保存，超過(guò)5天另外配制。2．配置待測(cè)酶液精稱酶粉0.5g加數(shù)滴緩沖溶液研磨5`(潮濕為止)，再加數(shù)滴緩沖液再磨5`，加緩沖液攪拌均勻、沉降，轉(zhuǎn)移上層清液。如此反應(yīng)3~4次，到酶液及所有殘?jiān)D(zhuǎn)入容量瓶中，用緩沖溶液定容到200ml。搖勻過(guò)濾(8層干沙布)，濾溶液于干燒杯中，吸取濾液10ml，用緩沖溶液定容到100ml容量瓶中。實(shí)測(cè)時(shí)只需吸取二次定容后的酶液1ml那么實(shí)際用了所稱量酶的幾分之幾呢?(即稀釋倍數(shù)為多少呢)（10/200）×（1/100）=1/2000故稀釋倍數(shù)為2000用了酶粉W/2000(g)此次操作關(guān)鍵有兩點(diǎn)：稱量重量與稀釋倍數(shù)、研磨時(shí)間。（1）稀釋倍數(shù)與稱量重量的原則是以測(cè)定水解時(shí)酪氨酸的光密度在0.4±（0.2~0.4），即0.2~0.6范圍之內(nèi)。稱量重量與稀釋倍數(shù)相互聯(lián)系，要么固定稱量，改變稀釋倍數(shù)，來(lái)測(cè)OD。要么固定稀釋倍數(shù)改變稱量重量，以使OD落在范圍內(nèi)。一次測(cè)定時(shí)通常是固定稱量重量。而改變稀釋倍數(shù)，尤其是改變第二次稀釋倍數(shù)。這樣比較方便。多次測(cè)定常采用改變稱量重量，固定稀釋倍數(shù)。（2）研磨時(shí)間酶制劑是粗制品，顆粒大小不均。又有雜質(zhì)及不溶物混在一起，尤其是填料能吸附一部分酶體，故需研磨浸提。使酶的活性基團(tuán)充分暴露出來(lái)，故研磨浸提程度不同?；鶊F(tuán)暴露程度不同，活力也不同。關(guān)鍵是第一、二次，故用力及時(shí)間應(yīng)力求均衡準(zhǔn)確，最后的殘?jiān)舱俭w積，故需全部轉(zhuǎn)移進(jìn)去定容。3．測(cè)定酶催化酪蛋白酪氨酸

條件底物酪素液40℃水浴予熱。取9支干試管編號(hào)，按下表順序操作，所用試液均用刻度移液管準(zhǔn)確移取。

空白管0平行管1平行管2酶液（ml）11110﹪三氯乙酸（ml）300酪素（ml）222現(xiàn)象白色↓無(wú)無(wú)操作40℃水浴保溫10分鐘10﹪三氯乙酸（ml）033

現(xiàn)象白色↓白色↓白色↓操作取出搖振后室溫下靜置數(shù)分鐘過(guò)濾接濾液1`1`2`干試管0``1``2``移取濾液（ml）1110.55MNa2CO3（ml）555福林試劑（ml）111操作40℃水浴保溫10分鐘取出冷卻至室溫，用空白對(duì)照管0``調(diào)零，測(cè)1``、2``平行管，誤差不大于0.01。解釋：（1）三個(gè)順列試管0為空白管，1、2為平行試樣管，即一樣的東西。0號(hào)先加入CCL3COOH使酶不能催化酪素水解。而1、2號(hào)管使酶作用底物10`以后再迅速加入CCL3COOH終止反應(yīng)，故0號(hào)一開(kāi)始就有白色↓，而1、2管10`后加CCL3COOH后產(chǎn)生白色↓酪素。（2）為了便于過(guò)濾保證濾液透明干凈，應(yīng)使↓沉靜片刻顆粒凝聚變大，濾紙應(yīng)是干燥的。（3）濾液中所含酪氨酸，即酶催化酪素產(chǎn)生的水解物是處在酸性介質(zhì)中，與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線一致。（4）為什么不以蒸餾水為空白呢?在比色分析中，常需利用空白溶液(又稱參比或?qū)φ杖芤?調(diào)節(jié)儀器的消光度為0。以消除顯色溶液中其它有色物質(zhì)的干擾，抵消比色皿和試劑對(duì)入射光的影響。常用的空白有三種：蒸餾水空白、試劑空白和平行操作空白。若所用操作試劑無(wú)色，對(duì)測(cè)定沒(méi)影響。則可用蒸餾水作空白調(diào)零。而我們這次均用了平行操作空白。即沒(méi)有反應(yīng)實(shí)測(cè)的實(shí)測(cè)。以消除溶劑、各種試劑、水、器皿和操作條件帶入的誤差。比如實(shí)測(cè)時(shí)，底物在配制溶液過(guò)程中以及以后的操作中，難免產(chǎn)生微量的水解，或多或少卻不可避免。此水解產(chǎn)生的酪氨酸。并非由酶催化而產(chǎn)生，故應(yīng)扣除掉這部分。用平行測(cè)定空白即上述溶液為空白，即可做到這一點(diǎn)，也可消除其它因素帶來(lái)的影響。所以，空白也是有顏色的，肉眼看不見(jiàn)的淺藍(lán)色。1、2號(hào)肉眼所觀的顏色深淺應(yīng)一致，否則肯定不平行。（4）前后兩個(gè)10分鐘有什么不同？前要準(zhǔn)確，后可以多，但不可少。五、計(jì)算兩份平行試樣結(jié)果平行后（ΔOD≤0.01）取平均值計(jì)算：1g酶粉或1ml酶液每分鐘水解酪蛋白產(chǎn)生酪氨酸的μg數(shù)。單位/g=（K·OD·6·N）/（10·W）=（6·K·OD·N）/（10·W）OD：實(shí)測(cè)水解底物時(shí)所產(chǎn)生酪氨酸的光密度K：當(dāng)OD值為1單位時(shí)所代表的酪氨酸的濃度（酪氨酸μg/ml/OD）K=C/OD=1/K′6：過(guò)濾以前水溶液的總體積為6ml，酪氨酸就處于體積為6ml的溶液中。N：稀釋倍數(shù)。在此N=2000W：酶粉重（g）。10：反應(yīng)時(shí)間為10分鐘。六、注意事項(xiàng)本次實(shí)驗(yàn)屬于微量分析，麻煩，細(xì)碎，故要特別細(xì)心操作，嚴(yán)格控制條件、溫度、反應(yīng)時(shí)間等，否則很難平行，最后在報(bào)告中應(yīng)標(biāo)明測(cè)定條件。

胰酶的測(cè)定一、概述1．胰酶的性質(zhì)食用動(dòng)物的新鮮胰臟→清洗→切碎→脫水干燥→粉碎→脫脂→浸提→干胰酶粉劑.胰酶是白色或黃色的無(wú)晶形粉末，有微弱的肉類物臭味，在水中緩緩溶解（但不完全），不溶于醇和醚中。是從豬、牛、羊等食用動(dòng)物的胰臟中得到的一種水解酶類，可以促進(jìn)某些蛋白質(zhì)的水解的反應(yīng)。在中性或弱堿性條件下，即PH=7.8~8.7活性強(qiáng)。遇到少量無(wú)機(jī)酸或大量的堿即降低活性，經(jīng)煮沸則迅速分解而變性。2．胰酶在制革生產(chǎn)中的應(yīng)用一種常用的酶軟劑（混合酶類）胰酶在原料皮脫灰后進(jìn)行軟化。胰酶中所含的彈性蛋白酶，可以分解彈性蛋白質(zhì)，防止成革粒面出現(xiàn)碎玻璃花紋，提高產(chǎn)品質(zhì)量。胰酶軟化時(shí)，對(duì)皮內(nèi)一些蛋白質(zhì)進(jìn)行不同程度的消解，可除去皮內(nèi)殘存的臟物、毛根分解產(chǎn)物、纖維間質(zhì)等，有利于皮纖維進(jìn)一步分散，促進(jìn)鞣劑與皮膠原的結(jié)合，以使成革具有柔軟性、豐滿性和良好的透氣性。胰酶中還含有一些脂肪酶可繼續(xù)脫脂。3．為什么要測(cè)定胰酶活力？酶軟化是制造軟革很重要的操作，但胰酶濃度過(guò)高。皮內(nèi)膠原纖維損失大，致使成革造成松面。為了達(dá)到正常的軟化目的，必須在軟化之前，測(cè)定含量即活力，以便正確確定其含量。4．定義胰酶能催化酪蛋白水解，而且胰酶量越多，被水解的酪蛋白就越多。一定量的胰酶，促化的酪蛋白越多或生成的分解產(chǎn)物越多，其胰酶的活力越大。與蛋白酶活力不同的表示是，胰酶活力是用在一定條件下底物的消耗量來(lái)表示。即：在一定的PH和時(shí)間內(nèi)1g胰酶能使酪蛋白完全水解的克數(shù)，即胰酶能使酪蛋白轉(zhuǎn)化的能力。以倍數(shù)來(lái)計(jì)量：×克酪蛋白/g酶粉，叫×倍。出廠胰酶活度一般為25倍。二、測(cè)定原理;醋酸鹽指示劑法（富爾德—哥勞斯法）控制胰酶的最適條件PH=8~9、T=40±1℃，用定量的酪蛋白和不同量的胰酶作用，水解一定的時(shí)間后，用醋酸鹽(或醋酸)指示劑調(diào)節(jié)反應(yīng)液PH達(dá)到酪蛋白的等電點(diǎn)(PH=4.6)附近，未被水解的酪蛋白呈白色沉淀折出，而水解產(chǎn)物則不沉淀。據(jù)此，則可找到恰好使定量的酪蛋白完全水解的最小胰酶用量。根據(jù)胰酶的體積和濃度，即可計(jì)算出胰酶對(duì)酪蛋白的轉(zhuǎn)化倍數(shù)，即胰酶的活力。三、試劑1．1.24∶50硼酸水溶液。（0.4mol/L）H3BO4PKa=9.24弱酸；2．0.1mol/LNaOH水溶液；3．硼酸鹽液。弱酸—弱酸鹽緩沖溶液；1.24∶50的H3BO420ml+2ml0.1mol/LNaOHPH=PKa+lg[H2BO3-]/H3BO3理論上PH=7.64實(shí)際上PH=6~74．13.6﹪NaAC水溶液（1.66mol/L）；5．60﹪醋酸溶液；6．醋酸鹽緩沖液(指示劑)13.6﹪NaAC(1.66M)與60﹪HAC(10M)等體積混合PH=PKa+lg[NaAC]/[HAC]=3.95≌4四、操作1．配制底物酪蛋白精稱0.2g細(xì)酪蛋白于小燒杯中，加20mlH2O，移取5ml0.1mol/LNaOH，40℃水浴上加熱約30分鐘，攪拌使之溶解，移入100ml容量瓶，加5mlH3BO3溶液，并定容到刻度。（PH=8.5）2．胰酶溶液的配制研缽中精稱胰酶0.1g，（先加3~5滴研磨，再補(bǔ)加15~17滴）加1ml硼酸鹽溶液，浸泡3~5分鐘，研磨到無(wú)大塊胰酶，轉(zhuǎn)移定容到500ml容量瓶，用H2O定容。3．粗測(cè)取5支帶刻度的干燥試管編號(hào)1234567移取酪蛋白溶液（ml）5555555移取胰酶溶液（ml）4.03.53.02.52.01.51.0移取蒸餾水（ml）1.01.52.02.53.03.54.0總體積（ml）10101010101010充分振蕩搖勻，40℃水浴保溫1hr加醋酸鹽指示劑（10滴）

↓↓↓依次滴加醋酸鹽緩沖液0.5ml(10滴)，邊滴邊觀察剛加入時(shí)絲狀液體是否轉(zhuǎn)為白色↓，若緩沖溶液到了試管底部還不出現(xiàn)↓，說(shuō)明酪蛋白已水解完全，有↓產(chǎn)生，證明酪蛋白沒(méi)有全部水解，找出剛不產(chǎn)生↓的胰酶ml數(shù)。即使5ml酪蛋白完全水解的最少胰酶量。4．精確測(cè)定剛不↓～↓之間，梯度為0.1ml。如上表中2.0ml剛↓，則取2.5～2.0ml。編號(hào)123456移取酪蛋白溶液（ml）555555移取胰酶溶液（ml）移取蒸餾水（ml）總體積（ml）101010101010充分振蕩搖勻，40℃水浴保溫1hr滴加醋酸鹽指示劑（10滴）

↓↓↓↓操作同上，找出剛不產(chǎn)生↓的胰酶量記為U2。五、計(jì)算酪蛋白的g數(shù)（W酪/100）×525×W酪X=——————=—————————=———————（倍）胰酶的g數(shù)（W酶/500）×U2W酶×U2六、注意事項(xiàng)及討論1．酪蛋白、胰酶、水按比例加入以后一定要使其混合均勻，否則將造成試管底部的酪蛋白沒(méi)有水解，使測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。2．水浴加熱，使整個(gè)液面都進(jìn)入到水中。3．試管的粗細(xì)程度。試管不可太粗或太細(xì)。即好搖勻又好觀察。且粗細(xì)一致。4．配制好的胰酶和酪蛋白溶液在室溫20℃以下，存放24hr有效，室溫高于20℃時(shí)胰酶4hr有效，酪蛋白8hr有效。5．配制酪蛋白與蛋白酶活力測(cè)定時(shí)配制酪蛋白有什么不同，為什么？精稱。因?yàn)槭且缘孜锏南牧縼?lái)表示活力的，要加入計(jì)算。操作條件緩和。加NaOH潤(rùn)漲，40℃水浴加熱30`，作用條件緩和，防止酪蛋白自身水解過(guò)多，又沒(méi)有辦法校正。6．產(chǎn)生白色↓必須是現(xiàn)加現(xiàn)看，不能放置過(guò)久，否則酪氨酸也↓出來(lái)了。7．與酪蛋白測(cè)定相比使蛋白質(zhì)沉淀的方法有什么不同？使蛋白質(zhì)沉淀的方法：PH=PI；鹽析；溶解度不同等。

復(fù)習(xí)碘量法一、概述利用I2的氧化性和I-的還原性進(jìn)行滴定的方法。.I2在水中溶解度非常小，0.00133mol/L，沒(méi)有I2直接溶在水中的。一般：I2+I-→I3-，增大溶解度。為了簡(jiǎn)單起見(jiàn)，仍寫(xiě)作I2。I2+2e→I-E0=0.545VI2有比較弱的氧化性，能夠與較強(qiáng)的還原劑作用。I-是中等程度的還原劑，能與氧化劑作用生成I2。直接碘法：碘滴定方法以碘液為滴定劑，滴定還原性的物質(zhì)I2+SO2+2H2O==2I-+SO42-+4H+E0I2/I-=0.545VE0SO42–/SO2=0.17V，反應(yīng)能夠進(jìn)行。因?yàn)橄骃O2這這類還原性的物質(zhì)不是很多，而且I2即使生成三碘絡(luò)離子，也是容易揮發(fā)的，而使?jié)舛雀淖儯虼酥苯拥夥☉?yīng)用不多。間接碘法：滴定碘法適用于電位比I2/I-高的氧化性物質(zhì)，在一定條件下，氧化性物質(zhì)將I-氧化成氧化成I2，再用Na2S2O3滴定I2，根據(jù)Na2S2O3消耗量和濃度計(jì)算機(jī)氧化性物質(zhì)的含量。碘起中間介質(zhì)作用。基本反應(yīng)：2I-—2e→I2I2+2Na2S2O3══Na2S4O6+2NaI能用于測(cè)定：Cu2+，CrO42-，Cr2O72-，IO3-，BrO3-，AsO33-，SbO43-，CLO-，CLO3-，NO3-，NO2，MnO4-，MnO2，H2O2等離子的測(cè)定，因此滴定碘法應(yīng)用非常廣泛。二、滴定碘法的條件1．介質(zhì)選擇。只能在中性或弱酸性介質(zhì)中進(jìn)行。在堿性介質(zhì)能發(fā)生下列反應(yīng)：碘的歧化反應(yīng):3I2+6OH-══IO3-+5I-+3H2OS2O32-+4I2+10OH-══2SO42-+8I-+5H2OIO3-+S2O32-+4OH-══2SO42-+I-+2H2O計(jì)算關(guān)系打亂。如此不能在堿性介質(zhì)中進(jìn)行。在強(qiáng)酸性溶液中發(fā)生下列反應(yīng)：Na2S2O3歧化反應(yīng)S2O32-+2H+==SO2+S↓+H2O4I-+4H++O2（空氣中）====2I2+2H2O所以只能在中性或弱酸性介質(zhì)中進(jìn)行滴定碘法。2．防止I2揮發(fā)及I-被空氣中的氧氧氣的方法防止I2揮發(fā)：（1）加入過(guò)量的KI（一般加入理論值的2～3倍）生成三碘絡(luò)離子。I2+I-→I3-；（2）反應(yīng)在室溫下進(jìn)行。2I--2e→I2（3）使用碘量瓶，隨時(shí)塞好塞子，滴定前用水沖洗瓶塞（碘揮發(fā)于瓶塞上）。滴定開(kāi)始時(shí)不要?jiǎng)×覔u動(dòng)瓶子。防止I-被空氣中的氧氧氣：（1）避光放置，因?yàn)殛?yáng)光照射可促進(jìn)I-被O2氧化。（2）盡快滴定，不要人為的拉長(zhǎng)滴定時(shí)間，減少I-與空氣的接觸時(shí)間。操作要連續(xù)。3．淀粉的使用方法接近到滴定終點(diǎn)時(shí)再加，否則淀粉吸附I2多且牢，變色不敏銳，測(cè)定誤差大。4．Na2S2O3標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)定以K2Cr2O7為基準(zhǔn)物。Na2S2O3為什么不能直接配制？Na2S2O3細(xì)菌作用Na2SO3+S↓

Na2S2O3+CO2+H2O→NaHSO3+NaHCO3+S↓空氣中2S2O32-+O2→2SO42-+2S↓因此，配制前蒸餾水要煮沸，冷卻后再配制，殺死細(xì)菌，趕走O2、CO2。在配制好的溶液中加Na2CO3調(diào)成弱堿性，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，0.02g/100毫升，放置一個(gè)星期之后，待濃度穩(wěn)定后，過(guò)濾標(biāo)定。長(zhǎng)期放置后也應(yīng)過(guò)濾標(biāo)定?；痉磻?yīng)：Cr2O72-+6I-+14H+═══2Cr3++3I2+7H2O3I2+6Na2S2O3═══3Na2S4O6+6NaI反應(yīng)摩爾比：1molK2Cr2O73molI26molNa2S2O36（CV）Cr2O72-=（CV）Na2S2O36（CV）Cr2O72-CNa2S2O3=————————VNa2S2O36WK2Cr2O7×1000CNa2S2O3=——————————MK2Cr2O7VNa2S2O3

鉻鞣劑鉻含量的測(cè)定一、概述鉻鹽是使用最廣泛的一種鞣劑。鉻鹽常以兩種價(jià)態(tài)存在，即Cr3+與Cr6+，在鞣制過(guò)程中，只有三價(jià)堿式鉻鹽才具有鞣性，如Cr(OH)SO4。由鉻鹽配制成的鉻鞣液其鉻含量多少，對(duì)皮革質(zhì)量有著重要影響，因此對(duì)所用鉻鞣液必須分析其含量，以計(jì)算鞣劑用量。對(duì)于鞣后鉻液同樣也要進(jìn)行分析。以觀察在鞣制過(guò)程中，皮革吸收鉻量的情況，并為廢液循環(huán)使用提供依據(jù)，達(dá)到節(jié)約紅礬和減少環(huán)境污染的目的。鉻含量通常用Cr2O3g/l或Cr2O3%表示測(cè)定鉻含量的方法一般用碘量法：Cr3+氧化劑Cr6+KII2Na2S2O3Cr3+翠綠色（C·V）Na2S2O3H+根據(jù)Na2S2O3的體積和濃度計(jì)算鉻含量。根據(jù)所選用的氧化劑的不同可分為：Na2O2+2H2O→H2Na2O2+2H2O→H2O2+2NaOH本質(zhì)還是H2O2法，一回事。H2O2法OH-介質(zhì)KMnO4法H+介質(zhì)

我們只介紹用得比較多的Na2O2法測(cè)定鉻鞣劑中的鉻含量。HOHO-二、Na2O2法測(cè)定原理HH2O2

在堿性介質(zhì)中Na2O2將Cr3+Cr6+為什么要選擇堿性介質(zhì)？在H+介質(zhì)中：Cr2O72-+14H++6e═2Cr3++7H2OE0=1.33VH2O2+2H++2e═2H2OE0=1.77VO2+2H++2e═2H2O2E0=0.682VE0H2O2/H2O>E0Cr2O72-/Cr3+氧化氧化

H2O2Cr3+Cr6+

E0Cr2O72-/Cr3+>E0O2/H2O2還原H2O2Cr6+Cr3+

比較電位差：ΔE01=1.77-1.33=0.44V；ΔE02=1.33-0.682=0.648V；ΔE02>ΔE01。所以，在酸性介質(zhì)中發(fā)生如下反應(yīng)：還原H2O2Cr6+Cr3+

氧化還在反應(yīng)首先發(fā)生在電極電位最大的兩個(gè)電對(duì)之間，故此在H+中發(fā)生的是H2O2作為還原劑將Cr6+還原成Cr3+，在實(shí)驗(yàn)室中配制少量的鉻鞣液就是用這個(gè)原量，用H2O2還原紅礬在H+成三價(jià)鉻鞣液。在OH-介質(zhì)中：CrO42-+2H2O+3e═CrO2-+4OH-E0=-0.12VHO2-+H2O+2e═3OH-E0=0.88VO2+H2O+2e═HO2-+2OH-E0=-0.08VH2O2═HO2-+H+OH-H2O比較電極電位：E0HO2-/OH->E0CrO42-/CrO2-ΔE0=0.88-（-0.12）=1.00V氧化Cr3+Cr6+H2O2結(jié)論Cr2O72-在H+中有較強(qiáng)的氧化性；CrO2-在OH-中有較強(qiáng)的還原性。所以在減性介質(zhì)中H2O2可作為氧化劑將Cr3+氧化成Cr6+。上述討論是從化學(xué)熱力學(xué)觀點(diǎn)討論的，動(dòng)力學(xué)上的因素未加考慮，但實(shí)驗(yàn)證明，酸性介質(zhì)和堿性介質(zhì)中的反應(yīng)是的確存在的，說(shuō)明動(dòng)力學(xué)上是可行的。HH2O2綜上所述，我們選用在堿性介質(zhì)中：Cr3+Cr6+反應(yīng)如下：CrO2-+4OH--3e═CrO42-+2H2O×2HO2-+H2O+2e═3OH-×32CrO2-+3HO2-═2CrO42-+H2O+OH-3H2O2+3OH-═3HO2—+3H2O2CrO2-+3H2O2+2OH-═2CrO42-+4H2O2NaCrO2+3H2O2+2NaOH═2Na2CrO4+4H2O通常鉻液以Cr(OH)SO4代表Cr（OH）SO4+NaOH═Cr（OH）3↓+Na2SO4+)Cr（OH）3+NaOH═NaCrO2+2H2O2Cr（OH）SO4+6NaOH═2NaCrO2+2Na2SO4+4H2O2NaCrO2+3H2O2+2NaOH═2Na2CrO4+4H2O2Cr（OH）SO4+3H2O2+8NaOH═2Na2CrO4+2Na2SO4+8H2ONa2O2氧化Cr（OH）SO4Na2O2+2H2O═H2O2+2NaOH×32Cr（OH）SO4+3H2O2+8NaOH═2Na2CrO4+2Na2SO4+8H2OCr（OH）SO4+3Na2O2+2NaOH═2Na2CrO4+2Na2SO4+2H2ONa2O2法測(cè)定鉻鞣劑中鉻含量的原理：用Na2O2(或在堿性介質(zhì)中，用H2O2)將綠色的Cr3+鉻液氧化成黃色的Cr6+的鉻酸鹽溶液，酸化后將碘化鉀氧化釋放出相當(dāng)量的碘，再以Na2S2O3滴定釋出的碘，以淀粉為指示劑，當(dāng)藍(lán)色消失為終點(diǎn)，據(jù)Na2S2O3的用量及濃度計(jì)算出鉻的含量。反應(yīng)方程式：（1）氧化三價(jià)鉻2Cr（OH）SO4+3H2O2+8NaOH═2Na2CrO4+2Na2SO4+8H2OCr（OH）SO4+3Na2O2+2NaOH═2Na2CrO4+2Na2SO4+2H2O（藍(lán)綠色）（黃色）（2）多余的H2O2分解Ni2+2H2O22H2O+O2↑Δ（3）酸化2Na2CrO4+2HCL═Na2Cr2O7+2NaCL+H2O（黃色）（橙紅色）（4）氧化I-Na2Cr2O7+14HCL+6KI═2CrCL3+3I2+6KCL+2NaCL+7H2O（橙紅色）（茶褐色）（5）滴定2Na2S2O3+I2═Na2S4O6+2NaI注意溶液的顏色變化，及各溶液顏色所代表的物質(zhì)。終點(diǎn)應(yīng)為什么顏色？為什么？三、試劑Na2O2（淺黃色粉末）；1mol/L的NaOH和H2O2；0.1mol/LNa2S2O3的標(biāo)準(zhǔn)溶液；固體KI或10%的KI溶液；1∶1的HCL5%NiSO4溶液1%的淀粉水溶液四、操作手續(xù)1．稀釋鉻鞣溶液適于滴定的濃度一般剛配制好的鉻鞣溶液Cr2O3=130~145g/l很高，耗Na2S2O3很多。故不能直接測(cè)定。而是先稀釋到合適的濃度。鉻粉Cr2O320%，也要先配制成合適濃度的溶液。稀釋倍數(shù)的選擇應(yīng)遵照下列原則：凡容量分析最后落到50ml常量滴定管上，為了使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確，力求使滴定劑消耗量在25ml（20~30ml之間），若取消耗Na2S2O3為25ml，又知Na2S2O3濃度為0.1mol/L，則碘量瓶中所含的Cr2O3重量為：（0.1×25）/6×25.33=63.3mg若測(cè)定時(shí)移取5ml，測(cè)濃度為63.3/5=12.6g/l稀釋10倍；測(cè)定時(shí)移取10ml，測(cè)濃度為63.3/10=6.33g/l稀釋20倍稀釋時(shí)應(yīng)用移液和容量瓶配套進(jìn)行那么稀釋倍數(shù)一般為整數(shù)倍如：130g/l的鉻鞣溶液稀釋后測(cè)定移取5ml則需稀釋，10倍，可選用25ml移液管，250ml容量瓶，移取25ml稀釋定容到250ml容量瓶中。因鞣液密度與含量關(guān)系密切，故可根據(jù)不同密度確定稀釋倍數(shù)，若鉻鞣液密度很?。ǎ?.075）則直接取濾液5ml測(cè)定，若密度太大，特別濃，這樣稀釋誤差太大，可用稱量法取樣，再根據(jù)密度進(jìn)行折算。鉻粉Cr2O320%測(cè)定時(shí)移取5ml，Cr2O3=63.3/5=12.6g/lW=12.6×0.5/0.2=31.5g31g500ml容量瓶測(cè)定時(shí)移取10ml，Cr2O3=63.3/10=6.33g/lW=6.33×0.5/0.2=15.8g16g500ml容量瓶2．測(cè)定移取試液5ml（或10ml），+Na2O22g+H2O50ml，緩緩加熱煮沸3～5分鐘，此時(shí)溶液變?yōu)榧凕S色，沖洗小漏斗于瓶中，稍冷卻，加5%NiSO43ml，煮沸至小氣泡（氧氣）變?yōu)榇笃荩ㄋ橹?，（證明H2O2已趕盡），沖洗漏斗冷卻到室溫（可流水冷卻），加1︰1HCL搖動(dòng)到Ni（OH）2↓完全消失再多加5ml1︰1HCL，總體積達(dá)成90ml±，加10ml10%KI塞好瓶塞，暗處置5分鐘，取出沖洗瓶塞，用Na2S2O3滴定到稻草色（黃很淡呈綠色），加1ml淀粉為藍(lán)色繼續(xù)用Na2S2O3滴定到藍(lán)色消失為翠綠色（Cr3+），讀取Na2S2O3的消耗體積。做三份平行試驗(yàn)解釋：A．Na2O2起NaOH和H2O2的作用；B．小漏斗起冷凝作用，防止H2CrO4的揮發(fā)；Na2CrO4+H2O2═H2CrO4↑C．1︰1HCL（6mol/L）加到Ni（OH）2消失，再加5ml，為下列反應(yīng)提供酸性，Na2Cr2O7+14HCL+6KI═2CrCL3+3I2+6KCL+2NaCL+7H2O但不能太高，太高：4I+4H++O2（空氣）═2I2+2H2O但也不能太低，否則，I-不能被