液基薄層細(xì)胞制片技術(shù)培訓(xùn)

◆液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展◆液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢◆TBS報告系統(tǒng)的解讀◆影響制片效果的因素及操作要點

珠海.麗拓第一頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展細(xì)胞病理學(xué)：

根據(jù)細(xì)胞內(nèi)異常狀況，研究疾病發(fā)生的原因，發(fā)病原理,以及疾病發(fā)生過程中，細(xì)胞的生理功能發(fā)生改變的規(guī)律，從而提出診斷和防治疾病的依據(jù)。主要涵蓋脫落細(xì)胞學(xué)和細(xì)針吸取細(xì)胞學(xué)

。脫落細(xì)胞學(xué)：采集人體各部位，特別是管腔器官表面的脫落細(xì)胞，經(jīng)染色后用顯微鏡觀察這些細(xì)胞的形態(tài)，并作出診斷的一門臨床檢驗學(xué)科，又名診斷細(xì)胞學(xué)或臨床細(xì)胞學(xué)

。主要包括宮頸脫落細(xì)胞學(xué)、痰液脫落細(xì)胞學(xué)等。第二頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展宮頸脫落細(xì)胞學(xué)的檢查意義：宮頸癌是婦女最常見的惡性腫瘤。據(jù)統(tǒng)計，宮頸癌的發(fā)病率與死亡率居女性惡性腫瘤的第二位。在我國，每年約有15萬新發(fā)病例，約占世界的1／4,每年約有8萬患者死于宮頸癌。在發(fā)達國家，宮頸癌的發(fā)病率已明顯下降，這在很大程度上歸因于對癌前病變的早期診斷和治療。在發(fā)展中國家，由于宮頸篩查工作尚不完善，因此宮頸癌發(fā)生率是發(fā)達國家的6倍。特別應(yīng)引起警惕的是，由于環(huán)境污染和不良的生活衛(wèi)生習(xí)慣，使原本在婦女50歲左右才比較多發(fā)的宮頸癌，如今已盯上了年輕女性。據(jù)北京友誼醫(yī)院有關(guān)專家對上萬例宮頸病變患者的篩查結(jié)果顯示，發(fā)現(xiàn)異常607例，最后確診宮頸癌前病變345例，宮頸癌9例。宮頸癌前病變最年輕者23歲，宮頸癌患者年齡分布在34—48歲，其中40歲以下者占33.3％，40—48歲者占66.6％，宮頸癌已嚴(yán)重威脅到中青年女性的健康和生命。第三頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展宮頸癌防治的關(guān)鍵在于定期進行婦科檢查，及時發(fā)現(xiàn)和治療宮頸癌前病變，終止其向?qū)m頸癌的方向發(fā)展。由于宮頸癌有一系列的前驅(qū)病變，它的發(fā)生、發(fā)展是由量變到質(zhì)變，漸變到突變的過程。通常由子宮頸鱗狀上皮不典型增生(癌前病變)發(fā)展到原位癌再到早期浸潤癌，最后發(fā)展到浸潤癌的連續(xù)發(fā)展過程有6-8年的時間。在這期間如果對宮頸病變及時的診斷和正確的治療，就能預(yù)防及早期治愈宮頸癌。第四頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展宮頸脫落細(xì)胞學(xué)的傳統(tǒng)診查手段—巴氏涂片

希臘醫(yī)生Papanicolaou

GN（巴氏)通過對陰道細(xì)胞的長期觀察，發(fā)現(xiàn)了源于子宮頸癌的細(xì)胞，巴氏理論和技術(shù)對惡性腫瘤和癌前病變診斷起了重要的作用，自1943年巴氏涂片應(yīng)用以來，宮頸癌的發(fā)生率和死亡率在50年間降低了70%.第五頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展

1943年發(fā)明的巴氏宮頸涂片法應(yīng)用半個多世紀(jì)以來，為早期診斷子宮癌及降低死亡率發(fā)揮了重要作用。直到80年代中后期，美國報道了大量巴氏宮頸涂片診斷為假陰性（2%-50%）的病例，使人們認(rèn)識到對制片技術(shù)進行進一步改進的必要性。

細(xì)胞學(xué)專家通過研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的巴氏涂片漏診或誤診的主要原因是取材時細(xì)胞丟失和涂片質(zhì)量差，涂片上存在著大量的紅細(xì)胞、白細(xì)胞、粘液及脫落壞死組織等。針對上述缺陷，美國新柏氏公司于1996年，率先推出了液基薄層細(xì)胞涂片技術(shù)（Thin-layerlogyTest,

TCT），并于1998年引入中國市場，通過近10年的市場推廣，得到了長遠發(fā)展。第六頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的發(fā)展液基薄層細(xì)胞涂片技術(shù)：

通過特制采樣器，采集標(biāo)本，將細(xì)胞100%保存于細(xì)胞保存液內(nèi)，再通過技術(shù)手段，去除紅細(xì)胞、粘液等非診斷成分，通過不同原理的制片技術(shù)將細(xì)胞均勻、薄層的涂布于載玻片上。

1996年新柏氏推出了基于高精密過濾膜的制片技術(shù)，簡稱TCT；

1998年超柏氏推出了基于密度梯度離心和自然沉降的制片技術(shù)，簡稱LCT。

2001年推出了替代巴氏五級分類法的報告系統(tǒng)，簡稱為TBS報告系統(tǒng)。第七頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢取材部位：

鱗狀上皮細(xì)胞與柱狀上皮細(xì)胞交接區(qū)---移形帶第八頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢取材優(yōu)勢：傳統(tǒng)的取材器

取材方法：采用硬質(zhì)刮片，沿宮頸口，按一個方向，刮取一定圓周范圍，創(chuàng)傷較大；由于操作人員不同，可能造成病變部位未取到的情況新型的取材器

取材方法：采用軟質(zhì)毛刷，沿宮頸口，按一個方向，旋轉(zhuǎn)3-5圈；確保整個宮頸口圓周區(qū)域內(nèi)各部位細(xì)胞均被取到，創(chuàng)傷較小。第九頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢細(xì)胞保存優(yōu)勢：

巴氏涂片：將刮片從載玻片一頭推至另一頭，丟棄刮片。可能造成刮片未接觸玻片面的細(xì)胞不被取到，丟棄大量細(xì)胞。液基細(xì)胞學(xué)制片：將刷頭上細(xì)胞充分洗入細(xì)胞保存液內(nèi)，使得制片前細(xì)胞不發(fā)生丟失。第十頁，共24頁。液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的應(yīng)用優(yōu)勢診斷優(yōu)勢：

傳統(tǒng)的巴氏涂片可能由于人員操作差異，導(dǎo)致部分涂片可觀察細(xì)胞少，粘液等大量聚集，覆蓋觀察成分，造成診斷失誤。

液基細(xì)胞制片技術(shù)：將細(xì)胞充分混勻，通過技術(shù)手段制成鏡下觀察細(xì)胞呈薄層分布，粘液等非診斷成分少的薄片，更有利于診斷。第十一頁，共24頁。TBS報告系統(tǒng)的解讀巴氏五級分類法：

Ⅰ級：正常：未見異常細(xì)胞.

Ⅱ級：炎癥：發(fā)現(xiàn)異常細(xì)胞,但均為良性.

Ⅲ級：可疑：發(fā)現(xiàn)可疑惡性細(xì)胞.（1）性質(zhì)不明細(xì)胞.（2）細(xì)胞形態(tài)明顯異常,難于肯定其良,惡性,需要近期復(fù)查核實.（3）未分化或退化的可疑惡性細(xì)胞與惡性裸核.

Ⅳ級：高度：發(fā)現(xiàn)待證實的癌細(xì)胞（高度可疑的惡性細(xì)胞）,具有惡性特征但不夠典型;或更典型但數(shù)目太少,需要復(fù)核,例如高度可疑的未分化或退化癌細(xì)胞,或少數(shù)低分化癌細(xì)胞.

Ⅴ級：惡性：發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞,其惡性特征明顯或數(shù)目較多,可作互相比較以確定為惡性者,例如高分化的鱗癌或腺癌細(xì)胞;成群未分化或低分化癌細(xì)胞.第十二頁，共24頁。TBS報告系統(tǒng)的解讀以級別來表示細(xì)胞學(xué)改變的程度易造成假象，每個級別之間有嚴(yán)格的區(qū)別，使臨床醫(yī)師僅根據(jù)分類級別的特定范圍處理患者，實際上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級之間的區(qū)別并無嚴(yán)格的客觀標(biāo)準(zhǔn)，主觀因素較多；對癌前病變也無明確規(guī)定，可疑癌是指可疑浸潤癌還是CIN不明確；不典型細(xì)胞全部作為良性細(xì)胞學(xué)改變也欠妥，因為偶然也見到CINⅠ伴微小浸潤癌的病例；未能與組織病理學(xué)診斷名詞相對應(yīng)，也未包括非癌的診斷。

2001年推出的TBS報告系統(tǒng)已逐步取代傳統(tǒng)的巴氏五級分類法。第十三頁，共24頁。TBS報告系統(tǒng)的解讀處理原則：（1）對涂片的滿意程度分為滿意、基本滿意、不滿意。（2）結(jié)果為正常，則每年定期進行TCT檢查。（3）良性細(xì)胞改變①感染：滴蟲性陰道炎；霉菌性陰道炎；形態(tài)學(xué)似放線菌感染；形態(tài)學(xué)似乳頭瘤病毒感染；形態(tài)學(xué)似單純皰疹病毒感染。②反應(yīng)性改變：炎癥（包括典型修復(fù)細(xì)胞的出現(xiàn)）；萎縮性改變及炎癥；放療后改變；放置宮內(nèi)節(jié)育器的改變及其它。第十四頁，共24頁。TBS報告系統(tǒng)的解讀（4）上皮細(xì)胞的異常改變①鱗狀上皮細(xì)胞異常結(jié)果為ASC-US（不能明確診斷意義的非典型鱗狀上皮細(xì)胞），建議3－6個月后重復(fù)TCT檢查。結(jié)果為ASC-H（非典型鱗狀上皮細(xì)胞不排除高度鱗狀上皮內(nèi)病變），應(yīng)在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。結(jié)果為LSIL（低度鱗狀上皮內(nèi)病變，包括CINⅠ），建議3－6個月后重復(fù)TCT檢查。復(fù)查陽性者，尤其對HPV陽性者，應(yīng)在陰道鏡下行組織活檢，以及HPV檢測。復(fù)查結(jié)果陰性者，則每年定期進行TCT復(fù)查。結(jié)果為HSIL（高度磷狀上皮內(nèi)病變,包括CINⅡ、CINⅢ、原位癌、鱗癌），應(yīng)在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。

注：宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervicalintraepithelialneoplasias，CIN)是一組與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的癌前期病變的統(tǒng)稱包括宮頸不典型增生和宮頸原位癌，反映了宮頸癌發(fā)生中連續(xù)發(fā)展的過程，即由宮頸不典型增生(輕→中→重，CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ)→原位癌→早期浸潤癌→浸潤癌的一系列病理變化。CIN已被國內(nèi)外病理學(xué)者和婦科腫瘤學(xué)者所接受。第十五頁，共24頁。TBS報告系統(tǒng)的解讀②腺上皮細(xì)胞異常結(jié)果為AGC-US（不能明確診斷意義的非典型腺上皮細(xì)胞），建議3－6個月后重復(fù)TCT檢查。結(jié)果為非典型腺細(xì)胞傾向原位腺癌，應(yīng)在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。結(jié)果為AGC（非典型腺上皮細(xì)胞），應(yīng)在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。結(jié)果為可疑腺癌、腺癌（包括宮頸腺癌、子宮內(nèi)膜腺癌、子宮外的腺癌及來源不明的腺癌等），應(yīng)在陰道鏡下行組織活檢以及HPV檢測。

下面主要介紹2006ASCCP循證醫(yī)學(xué)指南介紹具體處理流程。最新臨床處理指南，請參照2011NCCP宮頸癌篩查指南。第十六頁，共24頁。影響制片效果的因素及操作要點符合TBS系統(tǒng)的滿意的制片其評價標(biāo)準(zhǔn)為：★玻片有標(biāo)識；★涂片上有足夠量的形態(tài)保持良好的鱗狀上皮細(xì)胞（50000個以上），細(xì)胞覆蓋面積不得少于30%；★包含有移行區(qū)成分（5個以上的宮頸內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞或鱗狀上皮化生細(xì)胞至少有兩團）；★涂片上至少有75%以上的細(xì)胞能觀察清楚。

注意：鏡下視覺美觀的細(xì)胞涂片不等于是對臨床診斷有意義的細(xì)胞涂片。有成堆存在，但結(jié)構(gòu)清晰、可觀察的細(xì)胞涂片往往對臨床診斷有重要的診斷價值，因為病變細(xì)胞往往成堆出現(xiàn)，且伴隨陽性背景。第十七頁，共24頁。影響制片效果的因素及操作要點使用LT-YJ2000型自動液基薄層細(xì)胞涂片機，制出有利于臨床診斷的片子，主要影響因素為標(biāo)本取材、標(biāo)本預(yù)處理、儀器制片、后續(xù)染色。1取材：儀器只能基于所取到的樣本進行制片，取得的細(xì)胞量過少或者全部為粘液成分，會造成所制得的片子上診斷成分不足。

第十八頁，共24頁。影響制片效果的因素及操作要點取樣前：

應(yīng)先用棉簽將宮頸口表面的粘液盡可能的擦拭干凈取樣：

施加一定的力度，朝一個方向旋轉(zhuǎn)3-5圈。應(yīng)特別注意，施加力度不夠或者表面粘液過多時，刷頭會在粘液表面打滑，取到的成分全是粘液（非診斷成分），細(xì)胞成分少。取樣后：

將刷頭在細(xì)胞保存液內(nèi)反復(fù)刷洗5-8次，將細(xì)胞洗入保存液內(nèi)，丟棄刷頭，蓋緊瓶蓋。注：若將刷頭丟至保存液瓶內(nèi)，蓋緊瓶蓋后，應(yīng)立即搖動，將刷頭上細(xì)胞洗脫，避免細(xì)胞粘附在刷頭表面，后續(xù)震蕩不能從刷頭上脫落并且易成塊。第十九頁，共24頁。影響制片效果的因素2標(biāo)本預(yù)處理

適當(dāng)?shù)念A(yù)處理能提高制片成功率。預(yù)處理前首先觀察標(biāo)本性狀，針對不同性狀標(biāo)本進行不同的預(yù)處理，常見標(biāo)本性狀如下圖所示：第二十頁，共24頁。影響制片效果的因素及操作要點如圖所示，從左數(shù)起，第1瓶和第2瓶為血性標(biāo)本，含中量粘液，粘度較大；第3瓶為黃色，原因為使用了藥物，第四瓶淺黃色，為粘液偏多，第5瓶本色透明，粘液少。

1取樣后隔夜后制片更好，不得少于20min。2在粘液偏多的標(biāo)本瓶內(nèi)加入1ml清洗液1，血性標(biāo)本不需要針對紅細(xì)胞作任何處理，所有標(biāo)本在振蕩器上強烈震蕩10min，或者渦旋振蕩器上震蕩（但應(yīng)注意有效震蕩，觀察瓶內(nèi)溶液，應(yīng)呈高速漩渦狀態(tài)）20s。標(biāo)本量較少時，可直接用手強力振搖數(shù)次即可。

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上機前剔除不能被打散的蛋清樣粘液團和未被打散的大塊固態(tài)粘液團第二十一頁，共24頁。影響制片效果的因素及操作要點3制片模式選擇首先要避免細(xì)胞越多越好的誤區(qū)，利于診斷的片子上細(xì)胞量合適即可，關(guān)鍵是可被觀察的細(xì)胞足夠，若細(xì)胞量過多，亦會造成細(xì)胞重疊量大，影響診斷的結(jié)果。外觀為透明本色，懸浮有白色顆粒的標(biāo)本:一般選擇模式1.

外觀為紅色或黃綠色，但粘液量少的標(biāo)本，用模式2制片。外觀為紅色或者黃綠色、