動物細胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)上課用課件

2.2動物細胞工程1、簡述動物細胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用2、對比說出動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的學習目標：動物細胞工程常用的技術(shù)手段：動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、動物細胞核移植技術(shù)、動物細胞融合技術(shù)、生產(chǎn)單克隆抗體技術(shù)復(fù)習：植物細胞工程常用的技術(shù)手段有哪些？植物組織培養(yǎng)技術(shù)、植物體細胞雜交技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。動物細胞培養(yǎng)過程：原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)1、動物細胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實施的原理是什么？從動物機體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個細胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和繁殖。

原理是細胞增殖（有絲分裂）。聚焦一、動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞生長特點：細胞貼壁：

懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。要求：培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。細胞的接觸抑制：

當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的接觸抑制。

接觸抑制：細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制動物細胞生長特性部分細胞突變，獲得不死性，向癌細胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。2、為什么要對取出的動物組織進行處理，使細胞分散？分散的單個細胞容易攝取所需的營養(yǎng)，排出代謝廢物；而用大塊組織培養(yǎng)時，內(nèi)部細胞的營養(yǎng)供應(yīng)和代謝廢物的排出都較困難。一、動物細胞培養(yǎng)過程3、用胰蛋白酶對動物組織進行處理是因為細胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？細胞間的物質(zhì)主要是蛋白質(zhì)（膠原纖維）。胃蛋白酶作用的適宜pH約為2，當pH大于6時，胃蛋白酶就會失去活性。胰蛋白酶作用的適宜環(huán)境pH為7.2～8.4。多數(shù)動物細胞培養(yǎng)的適宜pH為7.2～7.4。一、動物細胞培養(yǎng)過程5、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料？動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們的細胞分化程度低，增殖能力強，分裂旺盛，容易培養(yǎng)。一、動物細胞培養(yǎng)過程6、動物細胞培養(yǎng)過程：動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液胰蛋白酶10代細胞原代培養(yǎng)50代細胞傳代培養(yǎng)細胞株無限傳代細胞系單個細胞加培養(yǎng)液遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體傳代培養(yǎng)一般傳至10代直至50代就不能再分裂了，這時細胞核內(nèi)遺傳物質(zhì)未發(fā)生變化，形成的細胞群傳代培養(yǎng)過程中有個別細胞傳至50代以后，由于遺傳物質(zhì)改變，失去控制，成為無限增殖的不死的癌癥細胞，形成的細胞群7、什么是原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)？為什么要進行傳代培養(yǎng)？原代培養(yǎng)：

取材（動物組織）→細胞分散→初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)：

培養(yǎng)的細胞→細胞分散→繼續(xù)培養(yǎng)進行傳代培養(yǎng)的原因：

接觸抑制一、動物細胞培養(yǎng)過程9、動物細胞培養(yǎng)能否象植物組織培養(yǎng)那樣獲得克隆個體？需要誘導(dǎo)其脫分化的過程嗎？不可以，因為高度分化的動物細胞的全能性受到抑制。不需要誘導(dǎo)其脫分化。一、動物細胞培養(yǎng)過程原代培養(yǎng)定義：把第1代細胞的培養(yǎng)與10代以內(nèi)的細胞培養(yǎng)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。過程：從動物機體中取出組織剪碎加胰蛋白酶細胞游離加培養(yǎng)液將細胞接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)（1—2天換一次培養(yǎng)液）細胞貼壁生長長成單層細胞取材（動物組織）→細胞分散→初次培養(yǎng)傳代培養(yǎng)定義：當原代培養(yǎng)的細胞生長停止，這時如果要使細胞繼續(xù)生長，就要及時用胰蛋白酶等，使細胞從瓶壁上解離下來，然后加入新的培養(yǎng)液，將細胞分離稀釋，并從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新的培養(yǎng)瓶內(nèi)，這個過程稱傳代培養(yǎng)培養(yǎng)的細胞→細胞分散→繼續(xù)培養(yǎng)二、動物細胞培養(yǎng)條件1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細胞順利的生長增殖思考：動物血清的作用？主要是：提供有利于細胞生長增殖所需的激素、生長因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營養(yǎng)物質(zhì)等。動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境植物組織培養(yǎng)呢？無機鹽、蔗糖、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物激素成分比較：四、植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞的全能性細胞增殖培養(yǎng)基狀態(tài)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細胞株、細胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細胞或細胞分泌蛋白1、說出動物細胞培養(yǎng)的過程？2、簡述動物細胞培養(yǎng)的條件？3、說出動物細胞培養(yǎng)的應(yīng)用？4、對比說出動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的你達到學習目標了嗎？4、細胞株的特點是 A．遺傳物質(zhì)沒有改變，可以無限傳代

B．遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，不可無限傳代

C．遺傳物質(zhì)沒有改變，不可無限傳代

D．遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，且有癌變特點，可以無限傳代5、在動物細胞培養(yǎng)中有部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為:A．原代培養(yǎng)B．傳代培養(yǎng)C．細胞株D．細胞系CD6、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞A.容易產(chǎn)生各種變異B.具有更強的全能性C.取材十分方便D.分裂增殖的能力強D7.（09江蘇）下圖是一個新生小鼠的肝臟小塊培養(yǎng)裝置示意圖。請回答下列問題。（1）肝臟切成小薄片，這有利于肝臟細胞

。（2）氣室中充入5％C02：氣體的主要作用是

。（3）培養(yǎng)液中添加抗生素是為了抑制細菌生長，但要注意選擇抗生素的

，以保證抗生素對肝臟無害。吸收氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)、排出代謝廢物維持培養(yǎng)液適宜的pH種類和劑量08年寧夏卷回答下列有關(guān)動物細胞培養(yǎng)的問題：⑴在動物細胞培養(yǎng)的過程中，當貼壁細胞分裂生長到細胞表面

時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞的

。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是

，要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是

。

⑵隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn)

的現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質(zhì)發(fā)生改變而變成

細胞，該種細胞的黏著性

，細胞膜表面蛋白質(zhì)（糖蛋白）的量

。相互接觸單層胰蛋白酶衰老甚至死亡接觸抑制不死性降低減少⑷檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用細胞分裂到

期的細胞用顯微鏡進行觀察。⑸