生理學試驗指導

本文格式為Word版，下載可任意編輯——生理學試驗指導試驗目錄：

試驗1制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標本

試驗2不同刺激強度和頻率對骨骼肌收縮的影響試驗3神經(jīng)干動作電位及其傳導速度的測定試驗4神經(jīng)興奮性不應期的測定試驗5刺激強度-時間曲線試驗6ABO血型鑒定

試驗7出血時間和凝血時間的測定

試驗8血液凝固及影響血液凝固的因素試驗9蛙心起搏點

試驗10蛙心期前收縮和代償間歇

試驗11某些因素對離體蟾蜍心臟的影響試驗12人體心音聽診

試驗13人體動脈血壓的測定

試驗14容積導體在心電圖描記中的作用試驗15人體心電圖的描記和分析試驗16減壓神經(jīng)放電

試驗17心血管活動的神經(jīng)體液調(diào)理試驗18胸內(nèi)壓的測量和氣胸的觀測試驗19呼吸運動的調(diào)理試驗20膈神經(jīng)放電

試驗21消化道平滑肌的生理特性試驗22胃腸運動的觀測試驗23基礎代謝測定試驗試驗24小鼠能量代謝的測定試驗25影響尿生成的因素試驗26視敏度測定試驗27視野測定試驗28盲點測試

試驗29視覺調(diào)理反射和瞳孔對光反射試驗30聲音的傳導途徑

試驗31動物一側(cè)迷路破壞的效應試驗32反射弧的分析試驗33去大腦僵直

試驗34大腦皮層運動機能定位

試驗35小腦受傷動物運動功能障礙的觀測試驗36大腦皮層誘發(fā)電位

試驗1制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標本

蛙類的一些基本生命活動規(guī)律與溫血動物相像，而維持其離體組織正常活動所需的理化條件比較簡單，易于建立和控制。因此，在試驗中常用蟾蜍或蛙的坐骨神經(jīng)腓腸肌標本來觀測興奮與興奮性、刺激與肌肉收縮等基本生命現(xiàn)象和過程。故制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標本（sciatic

nerve-gastrocnemiusmusclespecimen）是機能學試驗中必需把握的一項基本技術。本試驗要求把握制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標本的技能，并獲得興奮性良好的標本。

蟾蜍或蛙；蛙板、玻璃分針、普通剪刀、手術剪、鑷子、探針、玻璃分針、蛙釘、瓷盤、滴管、培養(yǎng)皿、鋅銅弓；任氏液（Ringer’ssolution）。標本制作方法：

1.破壞腦和脊髓取蟾蜍一只，用自來水沖洗清白。左手握住蟾蜍，用食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部，右手持探針于枕骨大孔處垂直刺入，然后向前通過枕骨大孔刺入顱腔，左右攪動充分搗毀腦組織。然后將探針抽回至進針處，再向后刺入脊椎管，反復提插搗毀脊髓。此時如蟾蜍四肢松軟，呼吸消失，說明腦和脊髓已完全破壞，否則應按上法反復進行。

2.剪除軀干上部及內(nèi)臟在骶骼關節(jié)水平以上1～2cm處剪斷脊柱，左手握住蟾蜍后肢，用拇指壓住骶骨，使蟾蜍頭與內(nèi)臟自然下垂，右手持普通剪刀，沿脊柱兩側(cè)剪除一切內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及緊貼于脊柱兩側(cè)的坐骨神經(jīng)。剪除過程中注意勿損傷坐骨神經(jīng)。

3.剝皮左手握緊脊柱斷端（注意不要握住或壓迫神經(jīng)），右手握住其上的皮膚邊緣，用力向下剝掉全部后肢的皮膚。把標本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。將手及用過的剪刀、鑷子等全部手術器械洗凈，再進行下面步驟。

4.分開兩腿用鑷子夾住脊柱將標本提起，后面朝上，剪去向上突起的尾骨（注意勿損傷坐骨神經(jīng)）。然后沿正中線用剪刀將脊柱和恥骨聯(lián)合中央劈開兩側(cè)大腿，并完全分開，注意保護脊柱兩側(cè)灰白色的神經(jīng)。將兩條腿浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。

圖1坐骨神經(jīng)腓腸肌標本

5.制作坐骨神經(jīng)腓腸肌標本取一條腿放置于蛙板上或置于蛙板上的小塊玻璃板上。（1）游離坐骨神經(jīng)將腿標本腹面朝上放置(如圖1)。用玻璃分針沿脊柱旁游離坐骨神經(jīng)，并于近脊柱處穿線結扎神經(jīng)。再將標本后面朝上放置，把梨狀肌及其附近的結締組織剪去。循坐骨神經(jīng)溝（股二頭肌與半膜肌之間的裂縫處），找出坐骨神經(jīng)的大腿段。用玻璃分針細心剝離，然后從脊柱根部將坐骨神經(jīng)剪斷，手執(zhí)結扎神經(jīng)的線將神經(jīng)輕輕提起，剪斷坐骨神經(jīng)的所有分支，并將神經(jīng)一直游離至腘窩。

（2）完成坐骨神經(jīng)小腿標本將游離清白的坐骨神經(jīng)搭于腓腸肌上，在膝關節(jié)周邊剪掉全部大腿肌肉，并用普通剪刀將股骨刮清白。然后從股骨中部剪去上段股骨，保存的部分就是坐骨神經(jīng)小腿標本。

（3）完成坐骨神經(jīng)腓腸肌標本將上述坐骨神經(jīng)小腿標本在跟腱處穿線結扎后，于結扎處遠端剪斷跟腱。游離腓腸肌至膝關節(jié)處，然后從膝關節(jié)處將小腿其余部分剪掉，這樣就制得一個具有附著在股骨上的腓腸肌并帶有支配腓腸肌的坐骨神經(jīng)的標本。

6.檢查標本興奮性用經(jīng)任氏液潮濕的鋅銅弓輕輕接觸一下坐骨神經(jīng)，如腓腸肌發(fā)生迅速

而明顯的收縮，則說明標本的興奮性良好，即可將標本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中，以備試驗用。若無鋅銅弓，亦可用中等強度單個電刺激測試神經(jīng)肌肉標本的興奮性。

1.操作過程中，勿污染、壓榨、損傷、過度牽拉神經(jīng)和肌肉。

2.經(jīng)常給神經(jīng)肌肉上滴加任氏液，防止表面枯燥，以保持其正常興奮性。

制備的坐骨神經(jīng)腓腸肌標本興奮性如何？有哪些操作體會？

試驗2不同刺激強度和頻率對骨骼肌收縮的影響

一條坐骨神經(jīng)干是由大量興奮性不同的神經(jīng)纖維所組成的。保持足夠的刺激時間不變，剛好能引起其中興奮性較高的神經(jīng)纖維產(chǎn)生興奮，表現(xiàn)為受這些神經(jīng)纖維支配的肌纖維發(fā)生收縮，此時的刺激強度即為這些神經(jīng)纖維的閾強度(thresholdintensity)，具有此強度的刺激叫閾刺激(thresholdstimulus)。隨著刺激強度的不斷增加，有較多的神經(jīng)纖維興奮，肌肉的收縮反應也相應逐步增大，強度超過閾值的刺激叫閾上刺激。當閾上刺激強度增大到某一值時，神經(jīng)中所有纖維均產(chǎn)生興奮，此時肌肉做最大的收縮。再繼續(xù)加強刺激強度，肌肉收縮反應不再繼續(xù)增大。這種能使肌肉發(fā)生最大收縮反應的最小刺激強度稱為最適強度(optimalintensity)。具有最適強度的刺激稱為最大刺激(maximalstimulus)?？梢娫谝欢ǚ秶鷥?nèi)，骨骼肌收縮力的大小決定于刺激的強度。不同頻率的電脈沖刺激神經(jīng)時，肌肉會產(chǎn)生不同的收縮反應。若刺激頻率較低，每次刺激的時間間隔超過肌肉單次收縮的持續(xù)時間，則肌肉的反應表現(xiàn)為一連串的單收縮(twitch)；若刺激頻率逐漸增加，刺激間隔逐漸縮短，肌肉收縮的反應可以融合，開始表現(xiàn)為不完全強直收縮(incompletetetanus)，以后成為完全強直收縮(completetetanus)。本試驗目的在于觀測刺激強度和肌肉收縮力量及刺激頻率和肌肉收縮形式之間的關系，從而認識機體在自然狀態(tài)下骨骼肌的收縮形式及其生理意義。

蟾蜍或蛙；蛙類手術器械、SMUP-PC生理信號處理系統(tǒng)、肌動器（肌槽）、張力換能器；任氏液。

l.制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標本，在任氏液中浸泡10～15分鐘。

2.試驗裝置坐骨神經(jīng)-腓腸肌標本的股骨固定于肌槽插孔中。坐骨神經(jīng)放置在刺激電極上，將腓腸肌肌腱上的絲線系于張力換能器（全量程100克或50克）的著力點上，調(diào)理肌槽與換能器之間的位置和距離，使絲線垂直、松緊度適合，并令肌肉處于自然拉長的長度。

圖2-1儀器連接示意圖

按圖2-1連接試驗裝置，開啟微機、四路放大器的電源開關，指示燈亮，在菜單條目中選擇

“骨骼肌單收縮與復合收縮〞程序，開啟信號處理系統(tǒng)主界面，點擊顯示屏上快捷方式圖標（也可運行中設置直接進行處理系統(tǒng)程序）。肌肉收縮信號由壓力放大通道輸入處理系統(tǒng)。四路放大器D/A-1或D/A-2輸出接刺激電極，D/A-1或D/A-2的輸出幅度，由電位器順時針方向調(diào)理，強度在1～5V的范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)，也可由主界面右側(cè)灰色三角按鈕調(diào)整各項參數(shù)，上下三角表示設置量的增大或減小，數(shù)值由三角旁的數(shù)值框顯示。程序參數(shù)設置如下：

掃描控制觸發(fā)掃描；掃描速度調(diào)理由“《〞或“》〞改變X軸的坐標時間。一般0.4s/Div～0.8s/Div。

刺激器控制根據(jù)需要設置前延時，脈沖寬度為0.1～0.3ms、調(diào)理脈沖強度、刺激時間。1.不同刺激強度對腓腸肌收縮的影響按鍵盤空格鍵或單擊“刺激〞按鈕，刺激脈沖輸出，屏幕顯示收縮曲線，改變脈沖強度，觀測不同刺激強度對肌肉收縮力量之間的關系。

（1）確定本組所制備標本產(chǎn)生興奮收縮所需閾強度，并鑒別肌肉收縮的三個時期。肌肉興奮的外在表現(xiàn)是收縮。肌肉收縮有兩種形式，一種為等長收縮，另一種為等張收縮。給活著的肌肉一個短暫的有效刺激，肌肉將發(fā)生一次（等張或等長）收縮，此稱為單收縮。單收縮的全過程以分為潛伏期、收縮期和舒張期。其具體時間和收縮幅度可因不同動物和不同肌肉及肌肉當時的機能狀態(tài)的不同而各不一致。蟾蜍腓腸肌的單收縮共歷時約0.12秒，其中潛伏期0.01秒，收縮期0.05，舒張期0.O6秒。

（2）逐漸增大脈沖強度，觀測刺激強度與肌肉收縮力量之間的關系。找到最適強度和最大刺激。

2.不同刺激頻率對腓腸肌收縮的影響

將刺激強度固定在最適強度，調(diào)整頻率、刺激時間，給肌肉相繼兩個有效刺激，且使兩個刺激的間隔時間小于該肌肉單收縮的總時程，則引起肌肉的收縮可以總和起來，出現(xiàn)一相繼連續(xù)的兩個收縮，稱此為復合收縮。當給肌肉一連串有效刺激時，可因刺激頻率不同，肌肉浮現(xiàn)不同的收縮形式。假使刺激頻率很低，即相繼兩個刺激的間隔大于單收縮的總時程，肌肉出現(xiàn)一連串的在收縮波形上彼此分開的單收縮。若逐漸增大刺激頻率，使相繼兩個刺激的間隔時間小于單收縮的總時程，而大于其收縮期，肌肉則浮現(xiàn)鋸齒狀收縮波形，此稱為不完全強直收縮。再增大刺激頻率，使相繼兩個刺激的間隔時間小于單收縮的收縮期，肌肉將處于完全的持續(xù)的收縮狀態(tài)，看不出舒張期的痕跡，此稱為完全強直收縮（如圖2-2）。強直收縮的幅度大于單收縮的幅度，并且在一定范圍內(nèi)，當刺激強度和作用時間不變時，肌肉的收縮幅度隨著刺激頻率的增加而增高。在體骨骼肌的收縮都是強直收縮。

圖2-2骨骼肌單收縮和復合收縮曲線①單收縮；②不完全強直收縮；③完全強直收縮

1.每次刺激后不管肌肉有無收縮，只要有刺激，都需要記錄。如有肌肉收縮，則待肌肉收縮完全恢復至基線后，再進行下一次刺激，使每次肌肉收縮的曲線起點均在同一水平上。2.每兩次刺激之間要讓標本休息半分鐘，并用任氏液潮濕標本，以保持良好興奮性。

1.骨骼肌的收縮與刺激強度之間的關系如何？

2.為什么在達到最大刺激之前，骨骼肌收縮會隨刺激強度的增加而增大幅度？3.為什么刺激頻率增加時，肌肉收縮幅度也增大？

4.假使刺激直接施加在肌肉上會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？為什么？試驗3神經(jīng)干動作電位及其傳導速度的測定

學習神經(jīng)干（nervetrunk）復合動作電位的細胞外記錄（extracellularpotentialrecording）方法，觀測動作電位的一些特性。有生物活性的神經(jīng)纖維具有一定的興奮性，當受到足夠強度的刺激（stimulation）后，其膜電位會發(fā)生改變而產(chǎn)生動作電位，這是神經(jīng)纖維興奮（excitation）的標志。在刺激時間一定的狀況下，剛好能引起神經(jīng)纖維興奮（產(chǎn)生動作電位）的最小刺激強度稱為閾強度（thresholdintensity），神經(jīng)纖維的興奮性高低與閾值之間具有反變關系，即興奮性=1/閾值。

將兩個引導電極置于正常完整的神經(jīng)干表面，當神經(jīng)干一端受刺激興奮后，興奮波（動作電位）會向未興奮處傳導，先后通過兩個引導電極時，便可記錄到兩個方向相反的電位偏轉(zhuǎn)波形，此稱為雙相動作電位（diphasicactionpotential）。神經(jīng)干動作電位的傳導，要求神經(jīng)在結構和功能上是完整的，假使將兩個引導電極之間的神經(jīng)組織損傷（或麻醉、低溫處理等），即破壞了神經(jīng)結構上的連續(xù)性或功能上的完整性，可以阻滯動作電位的傳導，興奮波只能通過第一個引導電極，不能傳導至其次個引導電極。這樣就只能記錄到一個方向的電位偏轉(zhuǎn)波形，此稱為單相動作電位（monophasicactionpotential）。

單根神經(jīng)纖維的動作電位具有“全或無〞現(xiàn)象，而神經(jīng)干是由大量粗細不等的有髓和無髓神經(jīng)纖維組成，故神經(jīng)干動作電位（actionpotential）與單根神經(jīng)纖維的動作電位不同，它是一種由大量神經(jīng)纖維動作電位合成的綜合性電位變化，是一種復合動作電位。假使神經(jīng)興奮性較高，掃描速度快，則可在顯示器上出現(xiàn)Aα、