暗視場和相差顯微鏡

暗視場和相差顯微鏡第1頁/共24頁實驗內(nèi)容一暗視場顯微鏡

1實驗原理2結構特點

3使用方法4注意事項二相差顯微鏡

1實驗原理2結構特點

3使用方法三觀察動植物細胞的胞質(zhì)運動和胞質(zhì)環(huán)流第2頁/共24頁一暗視場顯微鏡（一）實驗原理

暗視野顯微鏡是以丁達爾效應為基礎，通過特殊的聚光器，使照射樣品的直射光不能進入物鏡，只有被照樣品表面反射或衍射的散射光進入物鏡，因而在黑暗的視野中形成物體明亮的像。第3頁/共24頁圖1暗視野聚光器工作原理第4頁/共24頁（二）結構特點1.丁達爾效應：光通過渾濁媒質(zhì)時,渾濁媒質(zhì)所呈現(xiàn)的光的強烈散射現(xiàn)象,通常稱為丁達爾效應2.暗視野照明方法（1）暗視場光擋（2）暗視場聚光器拋物面聚光器心形聚光器第5頁/共24頁（三）使用方法1.換上暗視野聚光器2.聚光器和載玻片之間加香柏油并貼緊（或直接用干燥系聚光器）3.聚光器光路合軸4.更換需用的高倍物鏡進行鏡檢觀察第6頁/共24頁（四）應用價值及注意事項觀察活細胞結構,細胞器運動等分子布朗運動.觀察超微質(zhì)點位移(0.2—0.004微米)提高分辨力50倍由于是散射光成像和實體有差別,僅有結構的光輪廓，不能分辨內(nèi)部改造第7頁/共24頁

觀察原生動物的結構，細胞器，細胞質(zhì)中超微質(zhì)點的運動，存在方式，觀察植物細胞器，細胞質(zhì)運動。（五）鏡檢第8頁/共24頁二相差顯微鏡（一）實驗原理

相差顯微鏡是利用特殊的相差裝置,通過光的衍射和干涉效應把光波通過樣品的相位差變?yōu)檎穹钜栽龃笸该魑矬w的明暗反差,從而可以用來觀察未染色的活體組織和細胞結構的一種儀器第9頁/共24頁

相位:是指在某一時間上，光的波動所能達到的位置.

相差:是指相同波長的光線經(jīng)過折射率不同的介質(zhì)，其相位發(fā)生變化而產(chǎn)生的位差，相差一般不為肉眼所分辨，而相位的變化是由光程的差別造成的。

光程:是指媒質(zhì)的折射率和媒質(zhì)厚度的乘積。

衍射:光在不均一的媒質(zhì)中傳播，其方向發(fā)生彎曲變化，形成衍射光，此為衍射現(xiàn)象。衍射光和直射光比較有1/4的相位差，振幅亦弱。

干涉:直射光和衍射光相遇會發(fā)生迭加現(xiàn)象造成振幅的變化，或明或暗。第10頁/共24頁圖2光波通過不同介質(zhì)時產(chǎn)生的相位差第11頁/共24頁圖3直射光及衍射光的產(chǎn)生與波動第12頁/共24頁圖4相差顯微鏡的光路圖第13頁/共24頁（二）相差顯微鏡的結構特

1.用環(huán)狀光闌代替可變光闌：把直射光所成的像從衍射旁像中分出來。

2.用相差物鏡(內(nèi)含相板)代替普通物鏡相板結構共軛面:環(huán)狀，通過直射光補償面:非環(huán)狀，通過衍射光相板作用:將直射光和衍射光分別加以相位調(diào)整及強度削弱.相板類型:明相差或負相差,暗相差或正相差.3.用中心望遠鏡合軸調(diào)中4.光源和濾色鏡：強光低熱和綠色濾色鏡第14頁/共24頁圖5相板結構示意圖第15頁/共24頁圖6光的干涉及明暗相差形成的圖解第16頁/共24頁相差裝置的安裝相差物鏡的調(diào)換安裝轉(zhuǎn)盤聚光器的調(diào)換安裝把綠色濾色鏡放入鏡座的濾色鏡架上聚光器的調(diào)中相板圓環(huán)與環(huán)狀光闌圓,薄則環(huán)的合軸調(diào)中相差物鏡與環(huán)狀光闌的匹配把CT放入目鏡筒明環(huán)和暗環(huán)的聚焦明環(huán)和暗環(huán)的調(diào)中重疊回裝觀察目鏡

（三）使用方法第17頁/共24頁圖7相差聚光器及合軸望遠鏡第18頁/共24頁圖8光環(huán)與相板的合軸過程a未調(diào)整狀態(tài)b近調(diào)整狀態(tài)c正常態(tài)第19頁/共24頁

字母 反差 應用

P 正 觀察細胞和細胞核的內(nèi)部結構

N 負 觀察微小的物體,如孢子,鞭毛和活的樣品等

H 高 當樣品反差較低時

L 低 當樣品反差較高時

M 中 當樣品反差為中等時 四相差物鏡的選擇第20頁/共24頁（五）觀察:培養(yǎng)的草履蟲裝片及其它原生動物鴨趾草下表皮（質(zhì)點顫動）鴨趾草雄蕊毛（胞質(zhì)環(huán)流）注意事項:制片愈薄愈好（20微米以下）必須加蓋片，否則圓環(huán)和亮環(huán)不重合，反差不好。玻片無傷，均勻，平整，以免亮環(huán)發(fā)生歪斜，制片厚度不超過1.0mm，厚則亮環(huán)大，薄則亮環(huán)小。如果染色必須淺，而且