蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)課件

蛋白質(zhì)的性質(zhì)實(shí)驗(yàn)——蛋白質(zhì)及氨基酸的呈色反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?）了解蛋白質(zhì)和某些氨基酸的呈色反應(yīng)原理。（2）學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方法。

二、實(shí)驗(yàn)原理雙縮脲反應(yīng)尿素加熱至180℃左右，生成雙縮脲并放出一分子氨。雙縮脲在堿性環(huán)境中能與Cu2+結(jié)合生成紫紅色化合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中有肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮脲相似，也能發(fā)生此反應(yīng)。可用于蛋白質(zhì)的定性或定量測(cè)定。雙縮脲反應(yīng)不僅為含有兩個(gè)以上肽鍵的物質(zhì)所有。含有一個(gè)肽鍵和一個(gè)—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基團(tuán)的物質(zhì)也有此反應(yīng)。NH3干擾此反應(yīng)，因?yàn)镹H-3與Cu-2+可生成暗藍(lán)色的絡(luò)離子Cu（NH3）42+。因此，一切蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽都有雙縮脲反應(yīng)，但有雙縮脲反應(yīng)的物質(zhì)不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。黃色反應(yīng)含有苯環(huán)結(jié)構(gòu)的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黃色物質(zhì)，該化合物在堿性溶液中進(jìn)一步形成橙黃色的硝醌酸鈉。多數(shù)蛋白質(zhì)分子含有帶苯環(huán)的氨基酸，所以有黃色反應(yīng)，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量濃硫酸才有黃色反應(yīng)。乙醛酸反應(yīng)在濃硫酸存在下，色氨酸與乙醛酸反應(yīng)生成紫色物質(zhì)，反應(yīng)機(jī)理尚不清楚，可能是一分子乙醛酸與兩分子色氨酸脫水縮合形成與靛藍(lán)相似的物質(zhì)。含有色氨酸的蛋白質(zhì)也有此反應(yīng)。三、儀器、材料和試劑實(shí)驗(yàn)儀器試管；試管架；漏斗；鐵架臺(tái)；滴管；試劑瓶；水浴鍋。實(shí)驗(yàn)材料和試劑尿素；10%氫氧化鈉溶液；1%硫酸銅溶液；2%卵清蛋白溶液；0.5%甘氨酸溶液；0.1%茚三酮水溶液；大豆提取液；頭發(fā)；指甲；0.5%苯酚溶液；濃硝酸；0.3%色氨酸溶液；0.3%酪氨酸溶液；冰醋酸、濃硫酸。四、操作步驟與方法

取少量尿素結(jié)晶，放在干燥試管中。用微火加熱使尿素熔化。熔化的尿素開(kāi)始硬化時(shí)，停止加熱，尿素放出氨，形成雙縮脲。冷后，加10%氫氧化鈉溶液約1ml，振蕩混勻，再加1%硫酸銅溶液1滴，再振蕩。觀察出現(xiàn)的粉紅顏色。要避免添加過(guò)量硫酸銅，否則，生成的藍(lán)色氫氧化銅能掩蓋粉紅色。向另一試管加卵清蛋白溶液約1ml和10%氫氧化鈉溶液2ml，搖勻，再加1%硫酸銅溶液2滴，隨加隨搖。觀察紫玫瑰色的出現(xiàn)。雙縮脲反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作黃色反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作向7個(gè)試管中分別按下表加入試劑，觀察各管出現(xiàn)的現(xiàn)象，有的試管反應(yīng)慢可略放置或用微火加熱。待各管出現(xiàn)黃色后，于室溫下逐滴加入10%氫氧化鈉溶液至堿性，觀察顏色變化。管號(hào)1234567材料（滴）雞蛋清溶液4大豆提取液4指甲少許頭發(fā)少許0.5%苯酚40.3%色氨酸40.3%酪氨酸4濃硝酸/（滴）244040444現(xiàn)象乙醛酸反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作

取3支試管。編號(hào)。分別按上表加入蛋白質(zhì)溶液、色氨酸溶液和水，然后各加入冰醋酸2毫升，混勻后傾斜試管，沿管壁分別緩緩加入濃硫酸約1毫升，靜置。觀察各管液面間紫色環(huán)的出現(xiàn)。若不明顯，可于水浴中微熱。試劑管號(hào)水滴0.03%色氨酸溶液（滴）