含酚污水降解菌的分離課件

含酚污水降解菌的分離一、目的要求學(xué)習從含酚工業(yè)廢水、活性污泥中篩選苯酚降解菌。學(xué)習通過活性污泥培養(yǎng)馴化和分離耐酚菌二、實驗原理許多微生物可從不同基物中獲取能量，具有降解某些特殊污染物的能力，這是目前環(huán)境微生物研究的重點。本次實驗以含酚污水降解菌的分離、純化與篩選為例，介紹某些特殊污染物微生物降解菌的篩選方法。三、實驗材料1、菌源含酚工業(yè)污水或含酚廢水曝氣池中的活性污泥2、培養(yǎng)基耐酚細菌培養(yǎng)基，包括固體（平板、斜面）和液體兩種。固體：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基，滅菌后加入苯酚至6g/L。3、其他物品稀釋分離所用的裝有無菌水的試管，每組6支。無菌移液管，每組2支。四、步驟實驗分離——耐酚菌馴化——性能測定

四、實驗內(nèi)容1．梯度平板制備在已滅過菌的培養(yǎng)皿中，先傾倒7－10ml不含苯酚的已滅過菌的細菌或真菌培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿一側(cè)放置木條上，使皿中的培養(yǎng)基傾斜成斜面，而且剛好完全蓋住培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿放平，再傾倒7－10m1已融化的無菌耐酚真菌培養(yǎng)基或耐酚細菌培養(yǎng)基(苯酚終濃度為75mg/100m1)，剛好完全蓋住下層斜面，由于苯酚的擴散作用，上層培養(yǎng)基薄的部分苯酚濃度大大降低，造成上層培養(yǎng)基由厚到薄苯酚濃度遞減的梯度(圖6－4－2)。（一）分離酚降解菌1．梯度平板制備在已滅過菌的培養(yǎng)皿中，先傾倒7－10ml不含苯酚的已滅過菌的細菌培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿一側(cè)放置木條上，使皿中的培養(yǎng)基傾斜成斜面，而且剛好完全蓋住培養(yǎng)皿底部，待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿放平，再傾倒7－10m1已融化的無菌耐酚細菌培養(yǎng)基(苯酚終濃度為6g/L)，剛好完全蓋住下層斜面，由于苯酚的擴散作用，上層培養(yǎng)基薄的部分苯酚濃度大大降低，造成上層培養(yǎng)基由厚到薄苯酚濃度遞減的梯度2．涂布法分離將采集的樣品按稀釋涂布法分離，37℃培養(yǎng)2d后，半板上生長的菌落也形成密度梯度，上層培養(yǎng)基薄的部分苯酚低濃度區(qū)形成菌苔較多、上層培養(yǎng)基厚的部分苯酚高濃度區(qū)出現(xiàn)稀少菌落。將此菌落在耐酚細菌培養(yǎng)基平板或耐酚真菌培養(yǎng)基平板上連續(xù)劃線分離，最后挑取單菌落接種到耐酚斜面培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)2d。（二）耐酚菌馴化先活性污泥、放入苯酚無機培養(yǎng)液中、30℃振蕩培養(yǎng)6—10d，使苯酚降解菌大量增殖，淘汰對酚不適應(yīng)的微生物；再添加苯酚無機培養(yǎng)液(苯酚終濃度增加至100mg/L30℃振蕩培養(yǎng)4—6d。再流加苯酚無機培養(yǎng)液(苯酚終濃度增加至200mg/L)30℃振蕩培養(yǎng)4—6d，再提高到加250mg/L苯酚無機培養(yǎng)液，30℃培養(yǎng)4d后從中選出對苯酚耐受力強的苯酚降解2、復(fù)篩將經(jīng)初篩純化的菌種，分別接入碳源對照培養(yǎng)液和苯酚培養(yǎng)液中，20℃振蕩培養(yǎng)48h，于發(fā)酵的0、12、24、36、48h取樣，在OD600處檢測光密度值(OD)。繪制在葡萄糖培養(yǎng)液和苯