LC-Q-OF在藥物雜質(zhì)鑒定中應(yīng)用PPT課件2

LC-QTOF聯(lián)用技術(shù)在藥物雜質(zhì)鑒定中的應(yīng)用浙江省食品藥品檢驗研究院化藥所楊偉峰2023/4/151雜質(zhì)定義：藥物化學(xué)實體之外的其他任何成分▲有機雜質(zhì)（顯著影響）種類：▲無機雜質(zhì)（已知）▲殘留溶劑（已知）2023/4/152雜質(zhì)來源雜質(zhì)可以分為工藝雜質(zhì)（包括合成中未反應(yīng)完全的反應(yīng)物及試劑、中間體、副產(chǎn)物等）、降解產(chǎn)物、從反應(yīng)物及試劑中混入的雜質(zhì)等。按照其毒性分類，雜質(zhì)又可分為毒性雜質(zhì)和普通雜質(zhì)等。雜質(zhì)還可按其化學(xué)結(jié)構(gòu)分類，如其它甾體、其它生物堿、幾何異構(gòu)體、光學(xué)異構(gòu)體和聚合物等。2023/4/153起始物中間體降解物反應(yīng)副產(chǎn)物藥物質(zhì)量和安全：顯著影響有機雜質(zhì)2023/4/154雜質(zhì)譜2023/4/155ICHQ3A人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會（ICH）日劑量＞2g：0.05%日劑量≤2g：0.10%鑒定閾值：2023/4/156雜質(zhì)對比研究雜質(zhì)對比研究是仿制藥有關(guān)物質(zhì)研究工作的重要環(huán)節(jié)。通過對比研究，比較試制品及被仿藥品的實測結(jié)果，考察雜質(zhì)種類是否一致，是否有新的雜質(zhì)出現(xiàn)，雜質(zhì)含量是否超過被仿藥品，以確定后續(xù)進一步的研究工作方向。2023/4/157雜質(zhì)對比研究結(jié)果雜質(zhì)譜與被仿品一致或雜質(zhì)種類較被仿品少，各雜質(zhì)含量也不超過被仿品，無含量超過鑒定限度的新雜質(zhì)這種情況說明試制品的雜質(zhì)控制達到了預(yù)期目標(biāo)。2023/4/158若通過改進工藝，雜質(zhì)含量仍不能降至鑒定限度以下，則應(yīng)參照雜質(zhì)研究指導(dǎo)原則中雜質(zhì)研究決策樹進行后續(xù)的研究，必要時應(yīng)提供雜質(zhì)安全性的試驗研究資料。但一般情況下，提供額外的安全性論證資料，往往不如通過改進工藝把雜質(zhì)水平控制在限度值以下更為簡便。2023/4/159雜質(zhì)對比研究結(jié)果雜質(zhì)譜與被仿品一致或雜質(zhì)種類較被仿品少，沒有超過鑒定限度的新雜質(zhì)，但一個或多個雜質(zhì)的含量超過了被仿品這種情況下，應(yīng)當(dāng)通過改進完善制備工藝，降低雜質(zhì)的含量。2023/4/1510雜質(zhì)鑒定的難點1、雜質(zhì)含量低，采用制備色譜分離純化，所需的樣品量較大。2、在分離純化的過程中容易發(fā)生再次降解。3、由于制備色譜柱的柱效較低，有時難以得到有效分離。2023/4/1511高靈敏度高選擇性不經(jīng)純化即可獲得化合物信息HPLC-Q-TOF聯(lián)用技術(shù)2023/4/1512頭孢拉定有關(guān)物質(zhì)測定1.23%未檢出7-ADCA和雙氫苯甘氨酸2023/4/1513時間（min）甲醇%水相%0158510158510.1307037307037.11585451585色譜柱溫度：35℃；流速：0.9mL·min-1；檢測波長：254nm；水相為水-2.18%醋酸銨（1564:30）用4%的醋酸調(diào)pH至4.0，進行梯度洗脫雜質(zhì)XY雜質(zhì)群2023/4/1514鑒定雜質(zhì)X的結(jié)構(gòu)頭孢氨芐頭孢拉定未知雜質(zhì)相對豐都：19.9%、18.8%、19.7%不飽和度：10、9、82023/4/15152023/4/1516偏差均小于3.6ppm雜質(zhì)的裂解途徑2023/4/1517Fragmentor150→200V2023/4/1518雜質(zhì)X來源分析雙氫苯甘氨酸四氫苯甘氨酸苯甘氨酸2023/4/1519四氫苯甘氨酸可能的裂解途徑2023/4/1520Y雜質(zhì)群綜合解析多一個氧原子1~5易脫水6不易脫水1、3、6為同分異構(gòu)體2、4、5為同分異構(gòu)體2023/4/1521解析結(jié)果2023/4/1522

HPLC-QTOF-MS聯(lián)用技術(shù)鑒定鹽酸吉西他濱中的未知雜質(zhì)

注射用鹽酸吉西他濱尚未被中國藥典收載，地方試行標(biāo)準(zhǔn)以及美國藥典有關(guān)物質(zhì)檢查項下僅對胞嘧啶及其α異構(gòu)體進行控制原料藥凍干粉針劑120606A120903110801111001雜質(zhì)總量%0.0860.0390.150.13未知雜質(zhì)含量%0.0630.0260.110.11USP方法測定結(jié)果樣品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定，熱破壞3h后未知雜質(zhì)達3.692%123注射用鹽酸吉西他濱2023/4/1524Q-TOF高分辨質(zhì)譜結(jié)果分析Gemcitabine

Unknownimpurity多了一個O原子少了一個N原子，符合氮規(guī)則，不飽和度也未變化2023/4/1525偏差均小于17吉西他濱裂解途徑2023/4/1526吉西他濱m/z112離子胞嘧啶母離子未知雜質(zhì)m/z113離子尿嘧啶母離子2023/4/1527注射用吉西他濱雜質(zhì)吉西他濱雜質(zhì)：2’-脫氧-2’，2’-二氟尿苷2023/4/1528胞嘧啶離子尿嘧啶離子偏差均小于232023/4/1529NMR結(jié)構(gòu)確證H-Hcosy2023/4/1530dFdU來源分析胞嘧啶、六甲基二硅胺烷和硫酸銨高溫回流1h在企業(yè)提供的起始原料胞嘧啶中沒檢查出尿嘧啶，但是在水浴2h后尿嘧啶明顯增加到2.1%。來源一2023/4/1531來源二從合成過程分析，反應(yīng)液先在甲醇中析晶得到粗品，再將粗品溶解于50℃超純水中，最后于60℃的丙酮中重結(jié)晶得到鹽酸吉西他濱成品，所以需要對溫度、受熱時間、以及充氮氣是否對雜質(zhì)產(chǎn)生影響做考察。2023/4/1532高效液相色譜-四極桿飛行時間質(zhì)譜法分析克拉屈濱注射液中主要雜質(zhì)及其來源克拉屈濱結(jié)構(gòu)式克拉屈濱為核苷類抗白血病藥2023/4/1533色譜柱GraceC18(250mm×4.6mm,5μm),流動相為10mmol.L-1乙酸銨溶液-甲醇(80:20),柱溫35℃,檢測波長為265nm.以ESI為離子源,克拉屈濱注射液色譜圖2023/4/1534克拉屈濱不同能量下的二級質(zhì)譜圖30kv30kv30kv15kv2023/4/1535克拉屈濱雜質(zhì)二級質(zhì)譜圖2023/4/1536克拉屈濱及其主要雜質(zhì)的高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)Compounds[M+H]+Experimentalvalue（m/z）Theoreticalvalue（m/z）Deviation（×10-6）Cladribinefragmention123452-Chloroadeninefragmention123C10H13ClN5O3+C5H5ClN5+C5H4N5+C5H9O3+C5H7O2+C3H5O2+C5H5ClN5+C5H4N5+C4H3N4+C3H2N3+286.0722170.0240134.0463117.054399.043773.0283170.0245134.0478107.036280.0256286.0701170.0228134.0461117.054699.044173.0284170.0228134.0461107.035280.02437.37.11.52.64.01.410.011.29.316.22023/4/1537雜質(zhì)的[M+H]+峰m/z為170，為偶數(shù)，屬于偶電子離子，應(yīng)含奇數(shù)個氮，且離子豐度[M+1]+/[M+2]+為3:1，說明雜質(zhì)中含一個氯原子，根據(jù)質(zhì)譜裂解規(guī)律，并通過高分辨質(zhì)量數(shù)的確證（見表1），推斷出雜質(zhì)為2-氯腺嘌呤。2023/4/1538分別考察克拉屈濱注射液在pH為4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0溶液及光強為4500lx,5%過氧化氫(H2O2),60℃環(huán)境中的穩(wěn)定性。由降解試驗推測該雜質(zhì)可能是克拉屈濱在pH偏低和有氧條件下降解產(chǎn)生。結(jié)果表明克拉屈濱注射液在pH為6.5~8.0環(huán)境下最穩(wěn)定，酸性越強，越不穩(wěn)定；克拉屈濱易氧化，而受光照和溫度的影響較小。2023/4/1539SynnoveLindemalm等人[6]研究了克拉屈濱在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物，指出代謝產(chǎn)物主要為本文所研究的雜質(zhì)（2-氯腺嘌呤）。同時也指出克拉屈濱在低pH值時不穩(wěn)定及在核苷磷酸化酶的作用下易發(fā)生去糖基反應(yīng)生成2-氯腺嘌呤，其LD50與克拉屈濱一致，但未見抗腫瘤活性的報道。故在生產(chǎn)和儲存時應(yīng)特別注意溶液酸度和容器密封，必要時充氮，避免克拉屈濱降解。2023/4/1540芐達賴氨酸滴眼液76批次樣品8家生產(chǎn)企業(yè)2023/4/1541acb雜質(zhì)12023/4/1542def2023/4/1543gh雜質(zhì)2雜質(zhì)32023/4/1544芐達酸雜質(zhì)1雜質(zhì)2雜質(zhì)32023/4/1545芐達酸雜質(zhì)12023/4/1546芐達酸裂解機理2023/4/1547芐達酸雜質(zhì)12023/4/1548芐達賴氨酸合成路徑2023/4/15492023/4/15502023/4/15512023/4/1552芐達賴氨酸雜質(zhì)結(jié)構(gòu)2023/4/1553注射用阿洛西林鈉有關(guān)物質(zhì)和高聚物的分析2023/4/15543.柱切換液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析高聚物探索性研究1.UPLC梯度洗脫法測定有關(guān)物質(zhì)2.雜質(zhì)譜解析2023/4/1555中國藥典2010年版新建方法方法HPLC法、等度UPLC法、梯度探索性研究---有關(guān)物質(zhì)中國藥典方法新建方法產(chǎn)品中國藥典UPLC法最大單雜總雜雜質(zhì)個數(shù)最大單雜總雜雜質(zhì)個數(shù)A公司0.63%0.99%160.66%1.99%42B公司0.99%1.69%181.12%2.05%412023/4/1556ⅩⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨ探索性研究---雜質(zhì)譜解析UPLC法典型色譜圖UPLC-MS/MS(TOF)典型總離子流圖2023/4/1557ⅩⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨ雜質(zhì)編號保留時間分子離子（m/z）元素組成MS/MS主要碎片Ⅰ0.5387.055C3H6N2O87.055Ⅱ1.59480.1547C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅲ2.35480.1545C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅳ4.94436.1648C19H25N5O5S218.1,246.1Ⅴ8.05476.2193C21H25N5O6S218.1,246.1Ⅵ8.87811.2535C36H42N8O10S2462.1,434.0Ⅶ9.50595.198C28H30N6O7S218.1246.1Ⅷ10.15923.2821C40H46N10O12S2218.1Ⅸ11.64764.2452C34H37N9O10S218.1,246.1Ⅹ13.76793.2433C36H40N8O9S2491.1,247.1阿洛西林裂解途徑2023/4/1558雜質(zhì)編號保留時間分子離子（m/z）元素組成MS/MS主要碎片Ⅰ0.5387.055C3H6N2O87.055Ⅱ1.59480.1547C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅲ2.35480.1545C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅳ4.94436.1648C19H25N5O5S218.1,246.1Ⅴ8.05476.2193C21H25N5O6S218.1,246.1Ⅵ8.87811.2535C36H42N8O10S2462.1,434.0Ⅶ9.50595.198C28H30N6O7S218.1246.1Ⅷ10.15923.2821C40H46N10O12S2218.1Ⅸ11.64764.2452C34H37N9O10S218.1,246.1Ⅹ13.76793.2433C36H40N8O9S2491.1,247.1阿洛西林裂解途徑218.1246.187.12023/4/1559ⅩⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨ雜質(zhì)編號保留時間分子離子（m/z）元素組成MS/MS主要碎片Ⅰ0.5387.055C3H6N2O87.055Ⅱ1.59480.1547C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅲ2.35480.1545C20H25N5O7S218.1,436.2Ⅳ4.94436.1648C19H25N5O5S218.1,246.1Ⅴ8.05476.2193C21H25N5O6S218.1,246.1Ⅵ8.87811.2535C36H42N8O10S2462.1,434.0Ⅶ9.50595.198C28H30N6O7S218.1246.1Ⅷ10.15923.2821C40H46N10O12S2218.1Ⅸ11.64764.2452C34H37N9O10S218.1,246.1Ⅹ13.76793.2433C36H40N8O9S2491.1,247.12023/4/1560雜質(zhì)Ⅱ、Ⅲ：裂解途徑探索性研究---雜質(zhì)譜解析2023/4/1561阿洛西林酸阿洛西林青霉烯酸水解探索性研究---雜質(zhì)譜解析雜質(zhì)Ⅱ、Ⅲ

最大單個雜質(zhì)與水分顯著正相關(guān)2023/4/1562探索性研究---高聚物

3.柱切換液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)分析高聚物

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