PCR基因擴(kuò)增儀的分類(lèi)眾多如何選擇合適自己實(shí)驗(yàn)的那個(gè)它

———PCR基因擴(kuò)增儀的分類(lèi)眾多，如何選擇合適自己實(shí)驗(yàn)的那個(gè)它

什么是PCR

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。因此，無(wú)論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇殺案中兇手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一丁點(diǎn)的DNA，就能用PCR加以放大，進(jìn)行比對(duì)。這也是"微量證據(jù)'的威力之所在。由1983年**Mullis首先提出設(shè)想，1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)，即簡(jiǎn)易DNA擴(kuò)增法，意味著PCR技術(shù)的真正誕生。到如今2023年，PCR已發(fā)展到第三代技術(shù)。1976年，中國(guó)科學(xué)家錢(qián)嘉韻，發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的TaqDNA聚合酶，為PCR技術(shù)發(fā)展也做出了基礎(chǔ)性貢獻(xiàn)。

PCR是利用DNA在體外攝氏95高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60C左右）時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互補(bǔ)鏈?；诰酆厦钢圃斓腜CR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。PCR基因擴(kuò)增儀是分子診斷實(shí)驗(yàn)室的重要工具，直接影響臨床檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、重復(fù)性、甚至工作效率。其有著不同的分類(lèi)與類(lèi)型，所以我們一定要清楚。

PCR基因擴(kuò)增儀分類(lèi)：

1.普通的PCR儀

一次PCR擴(kuò)增只能運(yùn)行一個(gè)特定退火溫度的PCR儀，又叫傳統(tǒng)的PCR儀。

用途：主要是做一些簡(jiǎn)單的、對(duì)單一退火溫度的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。（1）梯度PCR儀

一次PCR擴(kuò)增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度)，通常為12種溫度梯度的普通PCR儀。

用途：研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增。

（2）原位PCR

將具有細(xì)胞定位能力的原位雜交技術(shù)運(yùn)用于從細(xì)胞內(nèi)靶DNA的定位分析，在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)基因擴(kuò)增的普通PCR儀。

用途：用于在細(xì)胞的靶DNA所在位置上進(jìn)行基因擴(kuò)增。

2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀

PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)并輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實(shí)時(shí)輸出量化結(jié)果，這樣的PCR儀叫實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

（1）金屬板式實(shí)時(shí)定量PCR儀

可作為普通PCR儀使用

可帶梯度功能

可容納的樣本量大，無(wú)需特殊耗材

溫度均一性欠佳，有邊緣效應(yīng)，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的反應(yīng)條件難以做到與樣品完全一致

（2）離心式實(shí)時(shí)定量PCR儀

溫度均一性較好

使用的是同一個(gè)激發(fā)光源和檢測(cè)器，隨時(shí)檢測(cè)旋轉(zhuǎn)到跟前的樣品，有效減少系統(tǒng)誤差

可容納樣品量少，有的需用特殊毛細(xì)管作樣品管，增加了使用成本，也不帶梯度功能

（3）各孔控溫的定量PCR儀

不同樣品槽分別擁有的智能升降溫模塊，各孔控溫，適合多指標(biāo)快