高中生物選修一-分解纖維素的微生物的分離

分解纖維素的微生物的分離纖維素酶

纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認為它至少包括三種組分，即C1酶(外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維二糖C1酶、Cx酶葡萄糖苷酶葡萄糖纖維素①取二支20mL的試管實驗：纖維素酶分解纖維素的實驗②各加入一張濾紙條③各加入pH4.8，物質(zhì)量為0.1mol/L的醋酸－醋酸鈉緩沖液11ml和10ml甲乙④在乙試管中加入1mL纖維素酶⑤兩支試管固定在錐形瓶中，放在140r/min的搖床上振蕩1h⑥結(jié)果：乙試管的濾紙條消失

討論：乙試管的濾紙條為什么會消失？甲試管的作用是什么？提示：本實驗的自變量是纖維素酶的有無自變量的操縱方法是：在一支試管中添加適量（1mL）的纖維素酶溶液，另一支試管不添加纖維素酶，但需加入等量的緩沖液，不能加入蒸餾水，否則會影響溶液的pH。實驗分析：P27的小實驗是如何構(gòu)成對照的？可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌培養(yǎng)基成分分析培養(yǎng)基組成提供主要的營養(yǎng)物質(zhì)纖維素粉5g碳源（能源）NaNO31g氮源、無機鹽KCl0.5gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4·7H2O0.5g無機鹽酵母膏0.5g生長因子、氮源、少量碳源水解酵素0.5g氮素、生長因子溶解后，蒸餾水定容至1000mL水比較項目分解尿素的細菌纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基原理培養(yǎng)基類型目的鑒定培養(yǎng)基原理現(xiàn)象方法將細菌涂布在只有尿素做氮源的選擇培養(yǎng)基上將細菌涂布在只有纖維素粉做碳源的選擇培養(yǎng)基上固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基篩選菌株選擇培養(yǎng)思考：本實驗的流程與課題2中的實驗流程有哪些異同？

課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，直接分離得到菌落。本課題通過選擇培養(yǎng)，使纖維素分解菌得到增殖后，再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。按照課題1的稀釋操作方法，將選擇培養(yǎng)后的培養(yǎng)基進行等比稀釋101～107倍。3.梯度稀釋1011021031041051064.將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上（1）制備鑒別培養(yǎng)基:（2）涂布平板：將稀釋度為104～106的菌懸液各取0.1ml涂布到平板培養(yǎng)基上，30℃倒置培養(yǎng)。培養(yǎng)基組成提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na5~10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長因子KH2PO40.25g無機鹽土豆汁100mL碳源、生長因子瓊脂15g凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)方法一：先

，再加入剛果紅進行顏色反應(yīng)。方法二：在

時就加入剛果紅。培養(yǎng)微生物倒平板5.剛果紅染色法

挑選產(chǎn)生透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足？染色法優(yōu)點缺點方法一方法二顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣剛果紅會使菌落之間發(fā)生混雜操作簡便不存在菌落混雜問題1.產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈2.有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。比較項目分解尿素的細菌纖維素分解菌選擇培養(yǎng)原理培養(yǎng)基類型目的鑒定培養(yǎng)基原理現(xiàn)象方法在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨，氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，pH升高。在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，如果pH升高指示劑會變紅剛果紅可以與纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被纖維素酶催化分解后紅色復(fù)合物無法形成，培養(yǎng)基上就會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈觀察菌落周圍是否有著色的環(huán)帶出現(xiàn)來鑒定尿素分解菌觀察菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈來篩選纖維素分解菌脲酶檢測法剛果紅染色法

在產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，挑取并接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C－370C培養(yǎng)，可獲得純化培養(yǎng)。6、純化培養(yǎng)

為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進行_____________實驗，纖維素酶的發(fā)酵方