補(bǔ)充酶類藥物及其生產(chǎn)工藝課件

常見的酶類藥物及治療作用常見酶類藥物L(fēng)-天門冬酰胺酶工藝說(shuō)明

①菌種培養(yǎng)大腸桿菌37℃培養(yǎng)24h普通牛肉培養(yǎng)基;②種子培養(yǎng)16％玉米漿，接種量1～1.5％，37℃，通氣攪拌培養(yǎng)4～8h;③發(fā)酵罐培養(yǎng)玉米漿培養(yǎng)基，接種量8％，37℃通氣攪拌培養(yǎng)6～8h，離心分離發(fā)酵液，得菌體，加2倍量丙酮攪拌，壓濾，濾餅過(guò)篩，自然風(fēng)干成菌體干粉;④提取、沉淀、熱處理每千克菌體干粉加入0.01mol/LpH8的硼酸緩沖液10L37℃攪拌1.5h，30℃8mol/L醋酸調(diào)節(jié)pH4.2～4.4，壓濾，濾液加入2倍體積的丙酮，放置3～4h過(guò)濾，收集沉淀，自然風(fēng)干，得干粗酶。取粗制酶，加入0·3％甘氨酸，調(diào)節(jié)pH8.8攪拌1.5h離心，上清液60℃30min熱處理。上清液加2倍體積的丙酮，析出沉淀，離心，收集酶沉淀，0.01mol/L，pH8磷酸緩沖液溶解，離心得上清酶溶液。⑤精制、凍干調(diào)節(jié)pH8.8離心棄去沉淀，清液再調(diào)pH7.7加入50％聚乙二醇，濃度達(dá)到16％。2～5℃放置4～5天，離心得沉淀。蒸餾水溶解加4倍量的丙酮沉淀，同法反復(fù)1次，pH6.4,0.05mol/L磷酸緩沖液溶解，50％聚乙二醇處理1次，即得無(wú)熱原的L一天門冬酸胺酶。溶于0.8mol/L磷酸緩沖液，在無(wú)菌條件下用6號(hào)垂熔漏斗過(guò)濾，分裝，冷凍干燥制得注射用L一天門冬酸胺酶成品，每I支1萬(wàn)或2萬(wàn)單位。二、細(xì)胞色素C生產(chǎn)工藝臨床上主要用于組織缺氧的急救和輔助治療藥物，適用于治療腦、心肌缺氧和其它因缺氧引起的一切癥狀。③鹽析、濃縮、透析

洗脫液加入固體硫酸鍍達(dá)到45％飽和度，使雜蛋白析出，過(guò)濾。收集透明濾液，緩緩加入20％三氯醋酸，邊加邊攪拌使細(xì)胞色素C沉淀析出，離心收集沉淀。再將沉淀溶于蒸餾水，裝入透析袋中，透析至無(wú)硫酸根為止，過(guò)濾得細(xì)胞色素C粗品溶液。④吸附、洗脫、透析粗品溶液通過(guò)處理好的AmberiteIRC－50（NH4＋）樹脂柱吸附，然后將樹脂移入大燒杯中，水洗至澄清為止，再分別上柱，用0·6mol/L磷酸氫二鈉與0.4mol/L氯化鈉混合液洗脫，洗脫液用蒸餾水透析去氯離子，得細(xì)胞色素C精品溶液。⑤制劑取含相當(dāng)于1.5g的細(xì)胞色素C精品液，加200mg亞硫酸氫鈉，攪拌溶解再加雙甘肽1.5g混合均勻，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH6.4左右，加注射用水1