GZ041 檢驗(yàn)檢疫技術(shù)賽項(xiàng)技能賽題（模塊3 生物化學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)試卷）-2023年全國(guó)職業(yè)院校技能大賽擬設(shè)賽項(xiàng)賽題

全國(guó)職業(yè)院校檢驗(yàn)檢疫技術(shù)競(jìng)賽生物化學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn)-血清總蛋白測(cè)定+乙肝病毒表面抗體檢測(cè)試卷（高職組、本科組）一、競(jìng)賽說(shuō)明1.主要考核醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)、衛(wèi)生檢驗(yàn)與檢疫技術(shù)專業(yè)學(xué)生對(duì)生化檢驗(yàn)和免疫學(xué)檢驗(yàn)基本操作技術(shù)的熟練程度和對(duì)半自動(dòng)生化分析儀、酶標(biāo)儀等常規(guī)設(shè)備的規(guī)范操作能力。2.本題滿分100分，完成時(shí)間55分鐘。3.獨(dú)立完成，不得相互詢問(wèn)或討論。4.考核成績(jī)?yōu)椴僮鬟^(guò)程評(píng)分、操作結(jié)果和考核時(shí)間評(píng)分、職業(yè)素養(yǎng)之和。5.全部操作過(guò)程時(shí)間和操作后處理時(shí)間計(jì)入時(shí)間限額，超過(guò)規(guī)定時(shí)間將終止操作。6.設(shè)定項(xiàng)目：血清總蛋白（TP）測(cè)定（雙縮脲法）+乙肝病毒表面抗體檢測(cè)項(xiàng)目（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附法）。二、實(shí)驗(yàn)原理1.血清總蛋白測(cè)定原理：血清蛋白質(zhì)分子中的肽鍵(-CO-NH-)在堿性溶液中能與試劑中的Cu2+作用生成穩(wěn)定的紫紅色的絡(luò)合物，此絡(luò)合物在540nm處有明顯的吸收峰，其溶液吸光度在一定濃度范圍內(nèi)與血清（漿）蛋白質(zhì)（TP）含量成正比，經(jīng)與同樣處理的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液比較，即可求得血清（漿）TP含量。2.乙肝表面抗體測(cè)定原理（雙抗原夾心酶聯(lián)免疫吸附法）：在微孔板條上預(yù)包被HBsAg，加入待測(cè)樣本及酶標(biāo)抗原（HBsAg-HRP）試劑進(jìn)行孵育；樣本中的HBsAb與包被抗原和酶標(biāo)抗原形成“包被抗原-抗體-酶標(biāo)抗原”復(fù)合物；洗板后加入酶底物顯色溶液，復(fù)合物上連接的HRP催化色原底物發(fā)生顯色反應(yīng)。若樣品中無(wú)HBsAb時(shí)，不發(fā)生顯色反應(yīng)。三、實(shí)驗(yàn)器材和試劑1.血清總蛋白測(cè)定：小號(hào)試管4只（使用3只，備用1只），試管架，移液槍1支（規(guī)格5～50μl）及配套槍頭、槍頭盒，1ml、2ml刻度吸管各1支，洗耳球1個(gè)，計(jì)時(shí)器1個(gè)，托盤1個(gè)。半自動(dòng)生化分析儀、恒溫水浴箱、銳器盒、廢液缸、污物缸、垃圾回收桶、膠水、簽字筆、記號(hào)筆等。2.乙肝病毒表面抗體檢測(cè)：微孔板（已用純化HBsAg包被，96孔），洗耳球1個(gè)、試管架1個(gè)，手動(dòng)可調(diào)式移液器（已校正）1把及配套槍頭、槍頭盒、濾紙、沖洗瓶（內(nèi)裝已經(jīng)稀釋的洗滌液）、標(biāo)記筆、計(jì)算器、簽字筆、計(jì)時(shí)器、恒溫水浴箱、計(jì)時(shí)器（孵育專用）、酶標(biāo)儀、消毒洗手液、面盆、抹布、廢液缸、銳器盒，濾紙，移液槍架、振蕩器、廢液中轉(zhuǎn)箱，醫(yī)療廢物桶（反應(yīng)板/杯）3.實(shí)驗(yàn)試劑：雙縮脲法總蛋白測(cè)定試劑盒、乙肝病毒表面抗體檢測(cè)試劑盒（含酶標(biāo)記、酶底物顯色溶液、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照）四、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本血清總蛋白測(cè)定建議購(gòu)買質(zhì)控血清作為標(biāo)本。乙肝病毒表面抗體檢測(cè)使用不同濃度無(wú)溶血血清標(biāo)本。五、操作步驟1.血清總蛋白測(cè)定取3支潔凈的小試管，按表1操作如下：TP的操作加入物空白管(B)標(biāo)準(zhǔn)管(S)測(cè)定管(U)生理鹽水（μl）蛋白標(biāo)準(zhǔn)液（μl）血清標(biāo)本（μl）雙縮脲試劑（ml）25002.002502.000252.0混勻，37℃水浴10min，波長(zhǎng)540nm，用半自動(dòng)化生化分析儀讀其測(cè)定值并打印結(jié)果（以上各加液量及參數(shù)以選用的試劑盒使用要求為準(zhǔn)）。2.乙肝病毒表面抗體檢測(cè)（1）實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備核對(duì)實(shí)驗(yàn)儀器和材料，檢查試劑和標(biāo)本，選取所需反應(yīng)板并做好標(biāo)記。（設(shè)立空白對(duì)照孔1孔，陰性對(duì)照2孔，陽(yáng)性對(duì)照2孔。陽(yáng)性對(duì)照用紅色記號(hào)筆，陰性對(duì)照用黑色記號(hào)筆）。（2）稀釋濃縮洗液按照說(shuō)明書(shū)要求稀釋濃縮液，混勻備用。（已配制好待用）（3）加待測(cè)標(biāo)本按照既定順序依次加入陰性對(duì)照（2孔）、陽(yáng)性對(duì)照（2孔）、待測(cè)標(biāo)本（7孔）各50μl，待測(cè)?？瞻讓?duì)照（1孔）不加。（3min內(nèi)完成）（4）加酶結(jié)合物每孔用滴瓶滴加1滴（空白孔不加），通過(guò)振蕩器充分混勻（時(shí)間30s），封板，置37℃水浴箱中孵育25min。（孵育期間同時(shí)進(jìn)行總蛋白測(cè)定操作）（5）洗板取出反應(yīng)板，棄液、拍干，每孔注滿洗滌液，靜置5秒后棄液、甩干，重復(fù)洗滌5次，在干凈的濾紙上拍干。（6）加顯色劑每孔先后加顯色劑A、B各1滴，通過(guò)振蕩器充分混勻（時(shí)間30s），封板，放置37℃水浴箱中避光孵育10min。（7）終止反應(yīng)每孔加入終止液1滴，混勻。（8）測(cè)定打開(kāi)電腦軟件進(jìn)行布板、選擇酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)（450nm/630nm）比色、選用空白孔校零，點(diǎn)擊開(kāi)始，讀取各孔OD值，并打印并粘貼結(jié)果。全國(guó)職業(yè)院校檢驗(yàn)檢疫技術(shù)競(jìng)賽生化檢驗(yàn)和免疫學(xué)技術(shù)及檢驗(yàn)-血清總蛋白測(cè)定+乙肝病毒表面抗體檢測(cè)答題卷（高職組、本科組）一、血清總蛋白測(cè)定數(shù)據(jù)記錄：血清總蛋白測(cè)定結(jié)果結(jié)果書(shū)寫（小數(shù)點(diǎn)后兩位）：打印結(jié)果報(bào)告粘貼處說(shuō)明：打印報(bào)告單上選手（只寫場(chǎng)次、組號(hào)和工位號(hào)，不得寫選手姓名）、現(xiàn)場(chǎng)裁判都需簽字確認(rèn)。得分裁判簽名二、乙肝表面抗體檢測(cè)數(shù)據(jù)記錄與計(jì)算1．?dāng)?shù)據(jù)記錄與結(jié)