抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座專家講座

第十一章抗生素類藥品分析Rturn抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第1頁思索與練習(xí)第一節(jié)概述第二節(jié)β–內(nèi)酰胺類抗生素

第三節(jié)氨基糖苷類抗生素第四節(jié)四環(huán)素類抗生素第五節(jié)抗生素類藥品中高分子雜質(zhì)檢驗(yàn)基本要求抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第2頁基本要求一、掌握抗生素類藥品結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方法之間關(guān)系。二、掌握抗生素類藥品判別原理與方法。三、掌握抗生素類藥品法定含量測定方法原理、測定方法與計(jì)算。四、熟悉抗生素類藥品雜質(zhì)檢驗(yàn)方法。五、了解抗生素類藥品中高分子聚合物檢驗(yàn)。Return抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第3頁第一節(jié)概述1.抗生素藥品特點(diǎn)化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第4頁2.微生物學(xué)法與理化法比較微生物檢定法理化法以抗生素對微生物殺傷或抑制程度為指標(biāo)衡量抗生素生物效價(jià)

依據(jù)抗生素結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，利用其特有理化性質(zhì)測定其含量已知或新發(fā)覺抗生素、精制品或粗制品均能測定

測定化學(xué)結(jié)構(gòu)已知、已提純抗生素靈敏度高、樣品需用量小、反應(yīng)抗抗生素醫(yī)療價(jià)值，但操作步驟多、費(fèi)時(shí)、誤差大

快速、準(zhǔn)確、專屬性高、樣品需用量小、操作簡單、省時(shí)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第5頁生物學(xué)方法：測定抗生素抑菌或殺菌能力優(yōu)點(diǎn)1、與臨床效果一致2、靈敏度高3、干擾物質(zhì)少1、操作繁瑣2、培養(yǎng)時(shí)間長3、測定誤差大缺點(diǎn)化學(xué)及物理化學(xué)方法1.準(zhǔn)確度高2.簡單、快速優(yōu)點(diǎn)不一定代表生物效價(jià)2。易受雜質(zhì)干擾缺點(diǎn)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第6頁抗生素效價(jià)測定管碟法：系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)擴(kuò)散作用，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品二者對接種試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈大小，以測定供試品效價(jià)一個(gè)方法。抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第7頁3.抗生素活性以效價(jià)單位來表示：每ml或每mg中含有某種抗生素有效成份多少，用單位（u）或μg表示。

1mg青霉素G鈉鹽定為1667單位

1mg青霉素G鉀鹽單位（u）=1667×356.4/372.5=1595u/mg抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第8頁分類（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）：β–內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類林可霉素類、其它抗生素類Return抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第9頁第二節(jié)β–內(nèi)酰胺類抗生素

青霉素類NSCH3CH3COOHOHN1234567RCOAB母核：6-氨基青霉烷酸側(cè)鏈：脂?；Y(jié)構(gòu)特點(diǎn)：

β-內(nèi)酰胺氫化噻唑環(huán)-COOH

3個(gè)手性碳原子抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第10頁頭孢菌素類AB母核：7-氨基頭孢菌烷酸側(cè)鏈：脂酰基結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：β-內(nèi)酰胺、氫化噻嗪環(huán)、-COOH

2個(gè)手性碳原子、O=C8-N5-C4=C3共軛結(jié)構(gòu)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第11頁青霉素（青霉素鉀、鈉）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第12頁氨芐西林

（氨芐青霉素）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第13頁阿莫西林

（羥氨芐青霉素）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第14頁普魯卡因青霉素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第15頁頭孢氨芐抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第16頁頭孢拉啶抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第17頁頭孢羥氨芐抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第18頁頭孢噻吩鈉抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第19頁酸性結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與性質(zhì)一、Na與堿金屬(Na+、K+)成鹽

（一）羧基

易溶于水

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第20頁與有機(jī)堿(普魯卡因)成鹽

難溶于水普魯卡因青霉素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第21頁（二）手性C

頭孢菌素類

C6C7青霉素類C3C5C6

旋光性﹡﹡﹡﹡﹡抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第22頁

（三）共軛體系

頭孢菌素類母核有共軛體系

青霉素類母核無顯著UV多數(shù)有苯環(huán)取代基

UV抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第23頁

青霉素類頭孢菌素類青霉素鈉UV7-20頭孢氨芐264nm260nm抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第24頁（四）β–內(nèi)酰胺環(huán)

水溶液不穩(wěn)定

干燥純凈穩(wěn)定

不穩(wěn)定性原因四元環(huán)張力大

酰胺鍵易水解

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第25頁青霉素類

一些氧化劑酸、堿、青霉素酶（一些金屬離子）（溫度）降解失效抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第26頁例青霉素降解反應(yīng)青霉素羥肟酸衍生物強(qiáng)酸性完全水解青霉酸中強(qiáng)酸性pH=2不完全水解或100℃青霉烯酸弱酸性pH4青霉胺(2)CO2青霉醛(1)+增強(qiáng)酸度1+2+強(qiáng)性或加熱不完全水解堿性或青霉素酶羥胺堿性O(shè)H-或100℃增強(qiáng)酸度紅色絡(luò)合物脫羧青霉噻唑酸強(qiáng)性或加熱抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第27頁頭孢菌素類酸、堿、胺類-內(nèi)酰胺酶降解失效抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第28頁（一）呈色反應(yīng)1.羥肟酸鐵反應(yīng)β-內(nèi)酰胺類呈色羥肟酸衍生物Fe3+/3H+判別試驗(yàn)NaOH?2HClNOHH-b內(nèi)酰胺類抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第29頁H+Fe3+/3（紅、棕、褐）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第30頁2.類似肽鍵反應(yīng)茚三酮反應(yīng)α-氨基-氨基茚三酮藍(lán)紫色抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第31頁

雙縮脲反應(yīng)似肽鍵（開環(huán)分解）-內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅紫抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第32頁其它呈色反應(yīng)與重氮苯磺酸反應(yīng)橙黃色重氮苯磺酸--56OHHC（偶合）酚羥基頭孢哌酮抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第33頁與變色酸（1,8-二羥基萘-3,6-二磺酸）-硫酸反應(yīng)青霉素阿莫西林氨芐西林150℃（縮合）褐色抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第34頁與H2SO4-HNO3反應(yīng)頭孢菌素類抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第35頁與銅鹽反應(yīng)NaOH橄欖綠色青霉素鉀（鈉）氨芐西林與H2SO4–HCHO反應(yīng)H2SO4–HCHO△暗黃色紅棕色抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第36頁1.K+、Na+火焰反應(yīng)（二）各種鹽反應(yīng)

焰色→鮮黃色

Na+

焰色→紫色

K+抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第37頁2.沉淀反應(yīng)（青霉素鹽）遇酸→↓在過量HCl或有機(jī)溶劑中溶解白青霉素青霉素鈉

青霉素鉀

緘+H抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第38頁3.重氮化-偶合反應(yīng)

重氮化-偶合反應(yīng)芳伯氨基抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第39頁4.與三硝基苯酚反應(yīng)—測定熔點(diǎn)

△二芐基乙二胺抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第40頁mp三硝基苯酚抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第41頁光譜法（三）1、UV法樣品、分解產(chǎn)物Cu2+頭孢氨芐λmax=262nm青霉素V鈉A280nm/A264nm=1.30～1.50抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第42頁pH3.8分子重排苯唑西林鈉苯唑青霉烯酸抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第43頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第44頁2、IR法3180cm-1酰胺N-H1780cm-1β–內(nèi)酰胺C=O3470cm-1酚羥基O-H1690cm-1仲酰胺C=O1250cm-1酚羥基C-O以阿莫西林為例抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第45頁色譜法（四）1、TLC法對照品對照法2、HPLC法抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第46頁三、雜質(zhì)檢驗(yàn)

藥品

檢驗(yàn)項(xiàng)目

檢驗(yàn)方法

頭孢他啶聚合物HPLC法

頭孢曲松鈉

頭孢哌酮鈉

頭孢噻肟鈉

頭孢呋辛酯相關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體HPLC法

頭孢氨芐相關(guān)物質(zhì)反相TLC法

青霉素鉀（鈉）吸收度紫外分光光度法

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第47頁1.頭孢他啶聚合物測定

固定相：葡聚糖凝膠G-10（40~120μm）

流動相A：3.5%硫酸銨0.01mol/L磷酸鹽緩沖液

流動相B：0.01%十二烷基硫酸鈉

對照品溶液：頭孢他啶對照品100μg/ml

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第48頁1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：理論塔板數(shù)和拖尾因子用1mg/ml藍(lán)色葡聚糖、流動相A測定；重復(fù)性用對照品溶液、流動相B測定。

N不低于900，拖尾因子0.75~1.5，峰面積RSD應(yīng)小于5.0%。

2）測定方法

進(jìn)樣供試液，用流動相A；進(jìn)樣對照液，用流動相B。以外標(biāo)法計(jì)算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計(jì)不得超出0.3%?？股仡愃幬锏姆治鰧I(yè)知識講座第49頁2.頭孢呋辛酯中相關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體檢驗(yàn)

固定相：ODS

流動相：0.2mol/L磷酸二氫銨-甲醇（62:38）

1）頭孢呋辛酯Δ2-異構(gòu)體制備：頭孢呋辛酯對照品+流動相頭孢呋辛酯Δ2-異構(gòu)體。

2）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：各異構(gòu)體之間R>1.5，以頭孢呋辛酯A異構(gòu)體計(jì)算n>1500?？股仡愃幬锏姆治鰧I(yè)知識講座第50頁

3）異構(gòu)體：t‘R1

相對保留時(shí)間r12=-----1----被測物

t’R22----標(biāo)準(zhǔn)物異構(gòu)體相對保留時(shí)間判斷B異構(gòu)體0.85供試液譜圖中A異構(gòu)體峰面積A異構(gòu)體1.0與A、B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng)為0.48~0.55。抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第51頁3.頭孢氨芐中相關(guān)物質(zhì)檢驗(yàn)---反相TLC法

固定相：活化后硅膠G板置5%（V/V）正十四烷正己烷溶液中，展至頂部，涼干展開劑：0.1mol/L枸櫞酸-0.2mol/L磷酸氫二鈉-丙酮（120：80：3）

供試液：本品50mg/ml

對照液（1）：本品0.5mg/ml

對照液（2）：α-苯甘氨酸0.5mg/ml

對照液（3）：7-氨基去乙酰氧基頭孢烷酸0.5mg/ml

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第52頁結(jié)果判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照液（2）（3）位置相同上所斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深；如顯其它雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對照液（1）所顯主斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深。

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第53頁4.青霉素鈉（鉀）吸收度檢驗(yàn)：供試液1.80mg/ml，

結(jié)果判斷：A280不得大于0.10抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第54頁-8I24I碘量法（一）1.原理水解產(chǎn)物定量過量剩下ChP四、含量測定（水解）NaOH頭孢菌素族青霉素族抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第55頁反應(yīng)分兩步進(jìn)行：1.水解反應(yīng)(按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)行)2.氧化-還原反應(yīng)(無固定量關(guān)系，受溫度、PH值和時(shí)間等原因影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采取標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第56頁第一步第二步抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第57頁V樣空V樣對照液+緩沖液+碘液+回滴+堿+酸+緩沖液+碘液+回滴

V對空V對2.方法供試液+緩沖液+碘液+回滴+堿+酸+緩沖液+碘液+回滴抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第58頁

空白試驗(yàn)A、消除樣品已降解產(chǎn)物干擾B、消除樣品中其它消耗碘雜質(zhì)干擾C、消除碘揮發(fā)造成誤差

以未經(jīng)水解樣品作空白測定抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第59頁空白樣品I2Na2S2O3I-I2抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第60頁

采取標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定A、可消除溫度、pH、操作、環(huán)境等條件影響B(tài)、使本法測定結(jié)果與微生物檢定法一致抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第61頁3.條件（1）弱酸性pH4.5堿↑I2→IO3-+I-酸↑普魯卡因與碘在酸性條件下會產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀（2）溫度24～26℃溫度＞38℃

未水解供試品亦消耗碘抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第62頁（3）水解時(shí)間以水解20分鐘后耗碘量最大（4）反應(yīng)時(shí)間反應(yīng)20分鐘后，耗碘量隨時(shí)間改變較小，可減小含量測定誤差?？股仡愃幬锏姆治鰧I(yè)知識講座第63頁4.特點(diǎn)（1）靈敏度高樣品:碘=1:8（2）反應(yīng)條件、試驗(yàn)操作要求高V對、V對空V樣、V樣空1份含量加試劑次序、反應(yīng)時(shí)間、滴定速度相同4I2→8I-抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第64頁5.計(jì)算原料制劑S0、S-供試品空白液、供試品消耗硫代硫酸鈉體積R0、R-對照空白液、對照品消耗硫代硫酸鈉體積U0、U-樣品標(biāo)示量、對照品效價(jià)（單位/mg）C-對照品濃度（g/mL）W、D-供試品取樣量（g）、稀釋倍數(shù)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第65頁電位配位滴定法（汞量法）（二）1.原理青霉素族ChPNaOHHNO3Hg2+配位化合物抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第66頁2.方法醋酸鹽緩沖液pH4.6滴定水解(降)空醋酸鹽緩沖液V(NO3)2HgpH4.6滴定樣品以未經(jīng)水解樣品作空白測定抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第67頁3、討論（1）水解必須完全（2）空白試驗(yàn)消除已降解產(chǎn)物干擾（2）優(yōu)點(diǎn)

不需標(biāo)準(zhǔn)品抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第68頁可見-紫外分光光度法（三）1、酸水解--銅鹽法穩(wěn)定劑nmCupHA3204+2青霉烯酸青霉素族（水解）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第69頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第70頁2、硫醇汞鹽法（1）原理青霉烯酸硫醇汞鹽青霉素族HgCl2（咪唑）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第71頁咪唑抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第72頁（2）方法對照品法計(jì)算pH9抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第73頁（3）注意

側(cè)鏈有-NH2時(shí)，需加醋酐先將其乙酰化后才能發(fā)生上述反應(yīng)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第74頁pH9抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第75頁3、羥肟酸比色法Fe3+/3H+紅色NaOHHClNOH·H2-b內(nèi)酰胺類羥肟酸衍生物抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第76頁HPLC法（四）ChP

內(nèi)標(biāo)法＋校正因子外標(biāo)法特點(diǎn)快速、高效、靈敏專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好

一法多用（判別、檢驗(yàn)、含測）Return抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第77頁第三節(jié)氨基糖苷類抗生素鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素卡那霉素慶大霉素巴龍霉素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第78頁鏈霉素鏈霉胍+鏈霉糖+N-甲基-L-葡萄糖胺

苷元糖鏈霉雙糖胺抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第79頁鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第80頁鏈霉胍鏈霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第81頁巴龍霉素D-葡萄糖胺+脫氧鏈霉胺+D-核糖+巴龍霉糖巴龍胺苷元巴龍二糖胺

糖抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第82頁D-葡萄糖胺脫氧鏈霉胺D-核糖巴龍霉糖抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第83頁慶大霉素

糖苷元絳紅糖胺+脫氧鏈霉胺+加洛糖胺

糖抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第84頁絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第85頁絳紅糖胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺加洛糖胺N-甲基-3-去氧-4-甲基戊糖胺抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第86頁慶大霉素C復(fù)合物慶大霉素C1R=HR1、R2=CH3慶大霉素C2R=R2=H

R1=CH3慶大霉素C1aR、R1、R2=H慶大霉素C2aR=CH3R1=R2=H

慶大霉素C2bR=R1=HR2=CH3抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第87頁鏈霉素坂口反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)UV3個(gè)堿性中心鏈霉胍鏈霉糖抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第88頁慶大霉素（慶大霉素C復(fù)合物）5個(gè)堿性中心抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第89頁一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽鏈霉素

3個(gè)慶大霉素5個(gè)堿性中心堿性（一）水溶性溶解性（二）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第90頁鏈霉素pH5～7.5慶大霉素pH2～12穩(wěn)定穩(wěn)定性（四）UV（三）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第91頁坂口反應(yīng)N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第92頁二、判別

茚三酮反應(yīng)（一）△羥基胺結(jié)構(gòu)a-氨基酸抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第93頁

Molisch試驗(yàn)（二）氨基糖苷類H+糠醛羥甲基糠醛-萘酚蒽酮呈色抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第94頁紅紫色抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第95頁N-甲基葡萄糖胺反應(yīng)（三）甲基葡萄糖胺巴龍霉素鏈霉素水解-N乙酰丙酮OH-吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛H+紅色（Elson-Morgan反應(yīng)）慶大霉素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第96頁(縮合)抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第97頁紅色對二甲氨基苯甲醛H+抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第98頁

麥芽酚反應(yīng)（四）

鏈霉素特征反應(yīng)H+分子重排抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第99頁紫紅麥芽酚抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第100頁鏈霉胍特有反應(yīng)（或α-萘酚）8-羥基喹啉坂口反應(yīng)（五）α-萘酚抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第101頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第102頁（六）反應(yīng)H+UV法（七）慶大霉素?zé)oUV吸收nmmax230=l鏈霉素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第103頁（八）色譜法（1）TLC法：硫酸慶大霉素判別

點(diǎn)樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色

對照液

判斷：供試液與對照液所顯斑點(diǎn)顏色與位置應(yīng)一致。

點(diǎn)樣：供試液

對照液①：硫酸鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品

對照液②：硫酸鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品+硫酸新霉素標(biāo)準(zhǔn)品+硫酸卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)品

抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第104頁判定法：供試液中主斑點(diǎn)位置、顏色、大小應(yīng)與對照液①相同，

對照液②應(yīng)顯示分離清楚3個(gè)斑點(diǎn)不然試驗(yàn)無效。

（2）HPLC法：硫酸慶大霉素判別

比較供試液與對照液各組分保留時(shí)間?？股仡愃幬锏姆治鰧I(yè)知識講座第105頁三、特殊雜質(zhì)檢驗(yàn)鏈霉素雜質(zhì)（一）鏈霉素B（甘露糖鏈霉素）

方法TLC中對照品法（BP）1.起源反應(yīng)中間體抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第106頁對微生物活性無顯著差異毒副作用和耐藥性不一樣發(fā)酵菌種不一樣工藝差異C組分百分比不一致要求控制各組分相對百分含量ChPUSPBPJP慶大霉素C組分測定（二）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第107頁++410.pH吲哚衍生物巰基醋酸鄰苯二醛氨基λmax=330nm衍生化原理

1.抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第108頁1-烷基硫代-2-烷基異吲哚衍生物抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第109頁RP－HPLC方法2.要求C125~50%C1a15~40%C2a+C220~50%計(jì)算3.峰面積歸一化法抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第110頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第111頁四、含量測定微生物檢定法各國藥典主要采取HPLC法慣用于體內(nèi)分析Return抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第112頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第113頁第四節(jié)四環(huán)素類抗生素ABCD抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第114頁123456789101112抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第115頁四環(huán)素（TC）tetracycline抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第116頁金霉素

(CTC)

chlortetracycline氯四環(huán)素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第117頁土霉素

(OTC)

oxytetracycline氧四環(huán)素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第118頁多西環(huán)素

(DOXC)doxycycline脫氧土霉素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第119頁美他環(huán)素（METC）metacycline抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第120頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第121頁一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)兩性（一）1.與酸、堿均能成鹽2.強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度↑

酚羥基、烯醇型羥基

弱酸性二甲胺基弱堿性抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第122頁與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+Mg2+Fe3+Al3+

UV和熒光性質(zhì)（三）與金屬離子絡(luò)合（四）pH3~7.5熒光

（二）旋光性抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第123頁抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第124頁不穩(wěn)定性（五）1.差向異構(gòu)化差向金霉素差向四環(huán)素金霉素四環(huán)素～-4-462pH淡黃→黑藍(lán)色熒光抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第125頁差向四環(huán)素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第126頁（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第127頁2.降解反應(yīng)（1）酸性下降解λmax=445nmλmax=435nm橙黃色脫水金霉素脫水四環(huán)素金霉素四環(huán)素＜2pH抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第128頁脫水四環(huán)素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第129頁～～TCETCATCEATC＜＜抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第130頁（2）堿性下降解異四環(huán)素四環(huán)素-OH抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第131頁二、判別試驗(yàn)濃H2SO4反應(yīng)（一）黃色朱紅色綠藍(lán)深紫色鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素42SOH鹽酸美他環(huán)素橙紅色加水金黃、棕黃黃抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第132頁FeCl3反應(yīng)（二）褐色橙褐色深褐色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素3FeCl酚羥基抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第133頁TLC法（三）鹽酸土霉素判別HPLC法（五）EDTA

克服痕量金屬造成拖尾現(xiàn)象比較保留時(shí)間抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第134頁三、特殊雜質(zhì)檢驗(yàn)·4-差向四環(huán)素（ETC）

·脫水四環(huán)素（ATC）·差向脫水四環(huán)素（EATC）·鹽酸金霉素（CTC）

相關(guān)物質(zhì)（一）HPLC法（版）鹽酸四環(huán)素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第135頁四環(huán)素相關(guān)物質(zhì)TLC圖I.供試液(5mg/ml)ETC(0.2mg/ml)ATC(0.025mg/ml)IV.EATC(0.025mg/ml)CTC(0.1mg/ml)VI.混合液4％0.5％0.5％2％抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第136頁吸收度（二）nmmax355268l、鹽酸四環(huán)素抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第137頁雜質(zhì)吸收度取供試品配成每毫升10mg/ml溶液至4cm吸收池中，在530nm處測定，其吸收度不得超出0.12。應(yīng)嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間抗生素類藥物的分析專業(yè)知識講座第138頁四、含量測定HPLC法鹽酸四環(huán)素測定

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：鹽酸四環(huán)素、相關(guān)物質(zhì)及ATC峰間

分離度均應(yīng)符合要求。

定量方法：外標(biāo)法以峰面積計(jì)