HPV檢測目的及最佳檢測方法

HPV病毒檢測的目的及最佳檢測方法現(xiàn)在是1頁\一共有39頁\編輯于星期一

1、HPV檢測的目的是什么？

2、HPV檢查的最佳方法？

3、德同產(chǎn)品介紹

2主要內(nèi)容現(xiàn)在是2頁\一共有39頁\編輯于星期一

■

只是為了查有沒有HPV病毒感染？

■是為了查HPV感染型別，檢測型別越多越好？

■是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預CIN2+的

風險人群？3HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是3頁\一共有39頁\編輯于星期一專家對HPV檢測是否要臨床驗證如何看待？HPV檢測的目的是什么？1個HIV/HBV=AIDS/HBV1個HPV≠CIN或宮頸癌

（80-90%的女性HPV感染是一過性的，可在6-24個月通過自體免疫清除）高危型HPV持續(xù)感會導致宮頸癌從HPV感染到宮頸癌，一般需要10－20年高分析敏感度檢測與臨床無關的病毒水平（假陽性）一過性的感染會自身清除恢復階段：免疫響應早期感染會自身清除Snijdersetal.JournalofPathology2003;201:1-6現(xiàn)在是4頁\一共有39頁\編輯于星期一

HPV檢測的目的是什么？

HPV病毒含量與臨床病變的關系CIN病變進展為高級病變無CIN病變CIN轉歸現(xiàn)在是5頁\一共有39頁\編輯于星期一WHO指南對于HPVCutoff有明確推薦檢測陽性判斷值6WHOguidelinesforscreeningandtreatmentofprecancerouslesionsforcervicalcancerprevention.?WorldHealthOrganization2013陽性判斷值（Cutoff）的設定，在2013年的WHO宮頸癌篩查和管理指南中是有具體建議的，其推薦高危型HPV檢測cut-off值≥1.0pg/mlHPV檢測的目的是什么？HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是6頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢測的目的是什么？7不再是單純的病毒檢測，而是強調(diào)“臨床”，不再是制造商說了算，而是臨床說了算陽性判斷標準是要獲得理想臨床敏感度和特異度的臨界值，制造商不能僅憑簡單的病毒檢測數(shù)據(jù)來制定，建議使用ROC曲線的方式進行評估，這需要大量臨床檢測數(shù)據(jù)才能最終找到理想的臨界值2015年CFDA針對HPV檢測試劑陽性判斷值的規(guī)定：臨床靈敏度特異度的Cutoff值現(xiàn)在是7頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢測的目的是什么？82015年歐洲IPV大會：宮頸癌篩查HPV檢測目的HPV檢測不是為了檢測病毒，不是一過性感染，而是檢測感染病毒后的進展風險HPV檢測需要關注臨床敏感度，最大化的保護低風險人群，最大化的辨別高風險人群2015

IPV

Conference，Mark.Stoler現(xiàn)在是8頁\一共有39頁\編輯于星期一2016年CSCCP會議GreaterChinaCommericalSummit9HPV檢測不是僅僅為了檢出HPV感染，而是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預測CIN2+的風險；對于HPV檢測來說，最重要的是臨床靈敏度和陰性預測值HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是9頁\一共有39頁\編輯于星期一WHO/IRAC明確檢測13種HPVTitle,Location,Date10從流行病學和致癌機制證據(jù)方面，WHO/IRAC明確檢測13種HPV型別：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68最強的致癌型別，幾個致癌位點已經(jīng)明確充足流行病學證據(jù)證實會導致宮頸癌缺乏宮頸癌流行病學證據(jù)，但從致癌機制上有強的證據(jù)支持2009WHOIARCSpecialReportPolicyAreviewofhumancarcinogensPartB現(xiàn)在是10頁\一共有39頁\編輯于星期一2015年中國CFDA明確HPV檢測型范圍11另外最多可包含5種不確定風險的HPV型別高危型13種：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68若可檢測的HPV基因型別不能涵蓋上述13種高危型，則可能造成陰性預期值無法達到臨床要求，因此不能用于宮頸癌篩查。-------不能少?。?！宮頸癌相關檢測必須包含13種高危HPV型別可包含不確定其風險的“中等風險型”5種：HPV26、53、66、73、82HPV檢測型別太少的產(chǎn)品如只檢測5種型別、2種型別（如HPV16/18）等，將不能再注冊HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是11頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢測的目的是什么？

Title,Location,Date12限制申報其他型HPV如申報的宮頸癌相關HPV核酸檢測產(chǎn)品涉及上述18種以外的其他HPV基因型，則需提出明確理由和依據(jù)且應得到國際有關權威機構的文獻支持。限制申報低危型HPV不建議將低危型HPV檢測用于宮頸癌篩查若申請人提出低危型HPV檢測相關產(chǎn)品注冊，則應詳細解釋其臨床意義和適應癥，并提供充分的證據(jù)。不能盲目的追求過多的HPV檢測型別不建議將低危型HPV檢測用于宮頸癌篩查中國CFDA明確限制低危型HPV檢測現(xiàn)在是12頁\一共有39頁\編輯于星期一2015最新CFDA指導原則以服務臨床為最終目的13陽性判斷值設定與臨床風險相關的陽性判斷標準Cutoff臨床敏感度、特異度以CIN2+為臨床終點的敏感度和特異度臨床適應癥初篩聯(lián)合篩查ASCUS分流一項檢測技術，要想滿足以上要求，必須基于長時間大量的臨床驗證才能實現(xiàn)2015年CFDA新的指導原則，從臨床目的出發(fā)，精確注冊標準要求現(xiàn)在是13頁\一共有39頁\編輯于星期一答案：

■只是為了查有沒有HPV病毒感染？NO

■是為了查HPV感染型別，檢測型別越多越好？NO

■是為了發(fā)現(xiàn)已經(jīng)存在的CIN2+病變和預CIN2+的風險

人群？yes14HPV檢測的目的是什么？現(xiàn)在是14頁\一共有39頁\編輯于星期一

1、HPV檢測的目的是什么？

2、HPV檢查的最佳方法？

3、德同產(chǎn)品介紹

15主要內(nèi)容現(xiàn)在是15頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢查的最佳方法直接核酸檢測（無需PCR實驗室）雜交捕獲技術（HC2、DH1、DH2、DH3）酶切信號放大法（Cervista）核酸擴增后檢測——PCR類技術（需PCR實驗室）

膜雜交法基因芯片法反向點雜交法流式熒光雜交法熒光探針法HPVDNA檢測技術分類現(xiàn)在是16頁\一共有39頁\編輯于星期一

HPV檢查的最佳方法

雜交捕獲技術（HPV檢測的金標準）

產(chǎn)品

德國凱杰的：HC2

杭州德同的：DH2、DH3

17HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是17頁\一共有39頁\編輯于星期一

雜交捕獲技術的三大優(yōu)勢：

1、獨特的探針技術：14種全長8000RNA探針，避免因

區(qū)域片段（如L1區(qū)）丟失造成的假陰性

2、無需DNA提取，無需核酸擴增，有效避免因環(huán)境因素造

成的假陽性

3、統(tǒng)一的臨床判定標準≥1.0pg/ml，避免因方法

學靈敏度過高產(chǎn)生的假陽性，結果重復性好，準確可靠。

18HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是18頁\一共有39頁\編輯于星期一雜交捕獲法獨特的探針技術HPV病毒基因組為環(huán)狀雙鏈DNA，含有~8000個堿基對德同DH系列HPV檢測“全長雞尾酒”探針技術HPV188000bp，基于全長，涵蓋HPVDNA所有區(qū)域2＋12種不同型別探針混合準確，不漏診CobasHPV&AbbottHPV(12+2Real-timePCR)“寡核苷酸探針”技術HPV16HPV1812種HR通用探針約200bp，僅基于L1片斷，

非全長僅3種探針混合病毒基因缺失、突變會造成漏診其他國產(chǎn)PCR方法“寡核苷酸探針”技術13種HR通用探針約100-150bp，僅基于L1片斷，非全長僅1種通用探針病毒基因缺失、突變會造成漏診HPV1612種HR通用探針德同DH系列HPV檢測“全長雞尾酒”探針技術Title,Location,DateCobasHPV&AbbottHPV(12+2Real-timePCR)“寡核苷酸探針”技術其他國產(chǎn)PCR方法“寡核苷酸探針”技術現(xiàn)在是19頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR和HC2的臨床敏感性比較：綜合1999-2005年間的主要研究

基于CIN2/3/癌癥的病例數(shù)〉1,500%PCRmedian82%HC2median94%現(xiàn)在是20頁\一共有39頁\編輯于星期一“L1片段的缺失并不普遍，但是任何變異或缺失都會造成PCR的檢測結果為陰性…”UngeretalJHC1998,46(4):535-540“L1片段是病毒衣殼蛋白，在HPV病毒引發(fā)的腫瘤進展過程中是不必要的，因此很可能在HPV整合過程會導致L1片段的缺失”

Caponeetal,ClinCancerResearch2000,6:4171-4175“~5%的癌癥和CIN3會因為HPVL1片段的缺失而無法被檢測出來”

Lorincz(MethodsforHPVDetection);EmergingIssuesonHPVInfections:FromSciencetoPractice,Monsonego2006HPV病毒基因L1片段缺失現(xiàn)在是21頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR中β-球蛋白的競爭β-globinβ-globinβ-globinβ-globinβ-globinβ-globinβ-globinHPVHPVHPVHPVHPVHPVHPVβ-globinHPVHPVβ-globin反應過程中的競爭會導致假陰性結果“β-球蛋白和HPV以共同引物L1片段進行擴增，這樣會降低HPV檢測的敏感度”Coutleeetal.JCM2002;40(3):902-907現(xiàn)在是22頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR導致假陰性的原因不同HPV型別擴增效率不同如果L1片段缺失，檢測失敗(整合型HPV)通用引物會和低危型HPV結合，抑制了目標高危型別的擴增內(nèi)指控（Beta-globin）會抑制HPV擴增樣本抑制(有5％的樣品丟失因出現(xiàn)抑制而無法擴増)現(xiàn)在是23頁\一共有39頁\編輯于星期一PCR檢測可能導致假陽性結果檢測與臨床不相關的感染樣本間的污染現(xiàn)在是24頁\一共有39頁\編輯于星期一缺乏統(tǒng)一的判定標準結果受主觀因素影響雜交捕獲PCR經(jīng)臨床驗證的同一判定標準1.0pg/ml儀器判讀、結果客觀可靠統(tǒng)一的判定標準HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是25頁\一共有39頁\編輯于星期一為何要明確“臨床靈敏度和臨床特異度的Cutoff值”？262015

IPV

Conference，Mark.Stoler參考2015年世界IPV大會：理想的臨床靈敏度和特異度的臨界值（Cutoff），即及能夠保證對≥CIN2的病人具有非常高的檢出率的同時，又可以避免因分析敏感度過高而造成的假陽性臨床敏感度與疾病進展風險掛鉤分析敏感度與是否存在病毒感染掛鉤：PCR過于敏感的分析敏感度，會將病毒含量的人判斷為陽性HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是26頁\一共有39頁\編輯于星期一AdaptedfromSnijdersetal.JournalofPathology2003;201:1-6分HPV檢查的最佳方法析敏感度與臨床敏感度雜交捕獲HPVDNA檢測為陰性時并不代表體內(nèi)沒有HPV，表明樣品中HPV含量不足5000拷貝.雜交捕獲HPVDNA檢測為陽性時（高于以上標準）可以預測未來8-10內(nèi)患CIN2/3或者進展為更高級別病變的風險短暫及一過性的感染會通過自身免疫力清除PCR方法檢測HPV的分析敏感度可能<10拷貝現(xiàn)在是27頁\一共有39頁\編輯于星期一區(qū)別：分析敏感度與臨床敏感度分析敏感度PCR方法的分析敏感度達到10個拷貝/ml陽性結果：可能沒有臨床相關性臨床敏感度雜交捕獲的分析閾值經(jīng)臨床驗證為5,000個拷貝/ml經(jīng)臨床證實：高度的陰性預測值樣本中能檢測出的病毒最低水平也被稱作檢測極限(LOD)

統(tǒng)計學意義：檢測結果與零的區(qū)分以臨床病變?yōu)榻K點指征，檢測出高度病變的敏感度(CIN3+/SCC)

初篩時，能夠檢測出CIN2＋或宮頸癌的比例分析閾值必須得到嚴格的驗證現(xiàn)在是28頁\一共有39頁\編輯于星期一HPV檢查的最佳方法

雜交捕獲技術（HPV檢測的金標準）

產(chǎn)品

德國凱杰的：HC2

杭州德同的：DH2、DH329HPV檢查的最佳方法現(xiàn)在是29頁\一共有39頁\編輯于星期一

1、HPV檢測的目的是什么？

2、HPV檢查的最佳方法？

3、德同產(chǎn)品介紹

30主要內(nèi)容現(xiàn)在是30頁\一共有39頁\編輯于星期一杭州德同DH系列產(chǎn)品

利用基因雜交、化學發(fā)光、信號放大的原理在分子水平檢測WHO認可的14種高危型-HPV病毒DNA最新“2+12型”檢測設計(HPV16/18與其他12種型別檢測)德同產(chǎn)品原理-新一代雜交捕獲技術現(xiàn)在是31頁\一共有39頁\編輯于星期一DH產(chǎn)品系列可檢測的高危型HPV型別DH2HPV-16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68DH3HPV-16,18HPV-31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,68

杭州德同DH系列產(chǎn)品具有48T、96T兩種規(guī)格現(xiàn)在是32頁\一共有39頁\編輯于星期一半自動檢測儀器全自動檢測儀器杭州德同DH系列產(chǎn)品檢測儀器現(xiàn)在是33頁\一共有39頁\編輯于星期一DH產(chǎn)品與HC2的臨床比對臨床比對HC2合計Kappa系數(shù)(95%CI)陽性陰性DH2陽性98049840.9864（97.70%-99.58%）陰性4415419合計9844191403陽性符合率（95%CI）99.59%（98.96%-99.89%）陰性符合率（95%CI）99.05%（97.57%-99.74%）總符合率（95%CI）99.43%（98.88%-99.75%）臨床比對HC2合計Kappa系數(shù)(95%CI)陽性陰性DH3陽性97179780.9662（95.14%-98.09%）陰性13413426合計9844201404陽性符合率（95%CI）98.68%（97.75%-99.29%）陰性符合率（95%CI）98.33%（96.60%-99.33%）總符合率（95%CI）98.58%（97.81%-99.13%）現(xiàn)在是34頁\一共有39頁\編輯于星期一孫小偉等，《中華腫瘤防治雜志》

2016年2月第23卷第3期137-140河南新密“兩癌”篩查項目DH2對CIN2+的檢出率顯著高于巴氏涂片和VIA/VILI現(xiàn)在是35頁\一共有39頁\編輯于星期一CobasHPVDH3HPVPvalueCIN2+Sensitivity123/135(91.1%,85.0-95.3)126/135(93.3%,87.7-96.9)0.650Specificity9667/10534(91.8%,91.2-92.3)9604/10534(91.2%,90.6-91.7)0.120PPV123/990(12.4%,10.4-14.6)126/1056(11.9%,10.0-14.0)0.736NPV9667/9679(99.9%,99.8-99.9)9604/9613(99.9%,99.8-100)0.663CIN3+Sensitivity77/83(92.8%,84.9-97.3)81/83(97.6%,91.6-99.7)0.277Specificity9673/10586(91.4%,90.8-91.9)9611/10586(90.8%,90.2-91.3)0.135PPV77/990(7.8%,6.2-9.6)81/1056(7.7%,6.1-9.4)0.934NPV9673/9679(99.9%,99.9-100.0)9611/9613(99.9%,99.9-100)0.175臨床試驗顯示：DH3具有與Cobas相同預測高級別病變的效能浙江龍游10669名健康婦女接受Cobas和DH3篩查結果比對現(xiàn)在是36頁\一共有39頁\編輯于星期一CobasHPVDH3HPVPvalueCIN2+Sensitivity108/135(80.0%,72.3-86.4)114/135(84.4%,77.2-90.1)0.426Specificity10143/10485(96.7