反相高效液相色譜法測定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量

反相高效液相色譜法測定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量［摘要］目的：采用反相高效液相色譜法測定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量。方法：色譜柱為phenomenex-Cg18(4.6mmx250mm,5pm)，流動相為甲醇：水:冰乙酸=172:27:1;檢測波長為280nm;流速為2.0mL/min;進樣量lO^L。結果：克林霉素棕櫚酸酯在0.16~3.20mg/ml范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9992,日間、日內RSD均小于1.5%。結論：本方法準確可靠，可用于鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的質量控制。［關鍵詞］鹽酸克林霉素棕櫚酸酯;含量測定;高效液相色譜法RP-HPLCdeterminationofcontentofClindamycinPalmitateHydrochlorideGranulesZhengXi-zi.(DepartmentofPharmacy,People'sHospitalofChangshou,Chongqing,Chongqing401220,China)［Abstract］Objective:Anreversedphasehighperformanceliquidchromatograph(RP-HPLC)methodwasestablishedfordeterminationofcontentofClindamycinPalmitateHydrochlorideGranules.Methods:Thechromatographicanalysiswasperformedonaphenomenex-ODS(4.6mmx250mm,5ym).Themobilephaseconsistedofmethanol,water,andglacialaceticacid(172:27:1).Thedetectionwavelengthwasat280nm.Theflowratewas2.0mL.min-1,withinjectionvolumelO^L.Results:Therewasagoodlinearrelationshipwithintherangeof0.16?3.20mg/mL(r=0.9992).Thereproducibilityandpreciseofmethodwasgood.Conclusion:Thismethodisaccurate,specificandcanbeusedforthequlitycontrolofClindamycinPalmitateHydrochlorideGranules.［Keyword］ClindamycinPalmitateHydrochloride;contentdetermination;RP-HPLC鹽酸克林霉素棕櫚酸酯是克林霉素的衍生物,體外無抗菌活性,在體內經(jīng)酯酶水解形成克林霉素而發(fā)揮抗菌活性。本品對金黃葡萄球菌和表皮葡萄球菌、肺炎鏈球菌、化膿性鏈球菌等均有較好的抗菌作用,對流感嗜血桿菌及淋病奈瑟氏球菌中度敏感。部分耐紅霉素的金黃葡萄球菌、表皮葡萄球菌對本品仍敏感。對革蘭氏陰性和革蘭氏陽性厭氧菌均有較好的抗菌作用［1］。鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒由重慶西南合成制藥股份有限公司研制生產,商品名“可爾生”,在臨床上應用較廣泛,常用于治療兒童上呼吸道和泌尿道感染等。本文考察了鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒含量的HPLC測定方法，為制劑的質量控制提供了方法學依據(jù)。儀器與材料LC-10ATvp高效液相色譜儀(日本島津公司)；克林霉素棕櫚酸酯對照品(購自上海紫爵貿易有限公司，經(jīng)精制后色譜峰為單峰)；鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒(可爾生)購自重慶西南合成制藥股份有限公司(批號070504，規(guī)格為含克林霉素37.5mg)；甲醇為色譜純；其它試劑為分析純。含量測定色譜條件參照文獻［2-3］,選定試驗條件為：色譜柱為phenomenex-C(4.6mmx250mm,5pm)；流動相為18甲醇:水:冰乙酸=172:27:1；檢測波長為280nm；流速為2.0mL/min；進樣量10yL。對照品溶液的制備稱取在60°C減壓干燥16h的對照品適量，精密稱定，置50.0mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為3.20mg/mL的鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對照品溶液，備用。供試品溶液的制備取本品10袋，合并內容物，混勻，取混合物適量，精密稱定，加水溶解制成每1mL中約含0.5mg(以克林霉素計算)的溶液。精密量取5mL,置具塞離心試管中，精密加入氯仿5mL,加入碳酸鈉溶液(30—100)1mL，用力振搖具塞離心試管15min,離心10min(轉速為2500r/min)，棄去水層，取氯仿層3mL,用無水碳酸鈉1g干燥。離心，精密量取氯仿液1mL于干燥的小試管中，通氮氣蒸干。精密加入流動相1mL使殘留物溶解，作為供試品溶液。系統(tǒng)適應性試驗精密吸取流動相、“2.2”、“2.3”項下溶液適量，分別按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜，詳見圖1。

由圖1可知，與克林霉素棕櫚酸酯對照品比較，供試品克林霉素棕櫚酸酯色譜峰分離良好，符合高效液相色譜法的要求。B圖1流動相(A)、對照品(B)和供試品(C)色譜圖Fig.1ChromatogramsofMobilephase(A),standard(B)andsample(C)ofClindamycinpalmitate最低檢測限和最低定量限取克林霉素棕櫚酸酯對照品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成供試液，按上述色譜條件取10pL進樣。經(jīng)試驗，當進樣濃度為3.8yg/mL時，信噪比為3:1,即最低檢測限為3.8yg/mLX10yL=38ng；當進樣濃度為13.5yg/mL時，信噪比為10:1，即最低定量限為13.5yg/mLX10yL=135ng。線性范圍考察取對照品儲備液，分別精密吸取0.5、1、2、4、10mL,置10mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，得濃度依次為0.16、0.32、0.64、1.28、3.20mg/mL的系列標準溶液。照上述色譜條件，進樣10“,l記錄色譜圖，以樣品濃度C為橫坐標，峰面積A為縱坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程為：A=94411.2c+305345,r=0.9992,線性范圍為0.16?3.20mg/mL精密度試驗分別取0.16、0.64、3.20mg/mL三種系列濃度的對照品溶液，于1d內分別進樣5次及5d內分別進樣5次；由標準曲線回歸方程分別計算日內、日間相對標準偏差。結果見表1。表1精密度試驗結果Table1Resultsofprecisiontest濃度（日內RSD(%,n=5)日間RSD(%，n=5)0.161.271.350.641.421.143.201.021.222.8樣品溶液穩(wěn)定性試驗取070504批樣品，按2.3項下方法制備供試品溶液，室溫放置，在12h內每隔3h進樣測定1次，測得供試品溶液中克林霉素棕櫚酸酯的濃度RSD為1.46%，結果表明在12h內樣品溶液穩(wěn)定性較好。2.9重復性試驗取070504批樣品，按2.3項下方法平行制備5份供試品溶液，分別進樣，測得濃度RSD為1.29%，表明該法重復性較好。2.10回收率試驗取克林霉素棕櫚酸酯對照品約16mg、20mg和24mg各三份，精密稱定，按處方比例100%,加入輔料適量，按“2.1”項下色譜條件進樣測定含量，計算回收率，結果詳見表2。表2回收率試驗結果Table2Resultsofrecoverytest加入量（mg）測得量（mg）回收率（％）平均值（％）RSD%17.8517.6899.080%17.2217.38100.917.6817.98101.720.3620.59101.1100%19.9820.15100.9100.51.0920.4020.58100.924.7624.5699.2120%25.4225.86101.725.1824.9699.1含量測定取批號為070504樣品，按2.3項下方法制備供試品溶液，依法測定，計算含量，樣品含量測定結果為103.02%。4討論鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒國家標準中的含量測定方法采用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；氣溶膠-醋酸銨-醋酸-水-甲醇（1：0.77：1：20：480）為流動相；檢測器為折光檢測器4-5］，流動相較復雜，儀器要求較高。本作者采用美國藥典25版中的高效液相含量測定方法［3］，采用三元流動相和紫外檢測器，降低了對試劑和儀器的要求，可以在廣大實驗室中推廣使用。流動相采用等度洗脫系統(tǒng)，用二極管陣列檢測器測定克林霉素棕櫚酸酯對照品的峰純度大于99.8%，表明主峰為單一峰，在210?400nm波長掃描，未露檢雜質峰。本方法靈敏度高、方法準確、重復性好?？肆置顾刈貦八狨舛仍冢?16?3.20mg/