分光光度計使用方法新

分光光度計的使用方法發(fā)布時間：11-10-07來源：陜西凱利化玻儀器有限公司點擊量：11232字段選擇：大中小7200型分光光度計儀器結(jié)構(gòu)7200型光柵分光光度計由光源,單色器，試樣室,光電管，線性運算放大器，對數(shù)運算放大器及數(shù)字顯示器等部件組成,基本結(jié)構(gòu)如下所示.光源；2.單色器;3.試樣室;4.光電管;5.線性運算放大器;6.對數(shù)運算放大器;7.數(shù)字顯示器7200型分光光度計工作原理7200型光柵分光光度計光學(xué)系統(tǒng)1.光源燈;2.濾光片;3.球面反射鏡;4.入射狹縫;5.保護(hù)玻璃;6.平面反射鏡;7.準(zhǔn)直鏡;8.光柵;9.保護(hù)玻璃;10.出射狹縫；11.聚光鏡;12.試樣室；13.光門;14.光電管；7200型分光光度計工作原理(文)由光源燈(1)發(fā)出連續(xù)輻射光線，經(jīng)濾光片(2)和球面反射鏡(3)至單色器的入射狹縫(4)聚焦成像，光束通過入射狹縫(4)經(jīng)平面反射鏡(6)到準(zhǔn)直鏡(7)產(chǎn)生平行光，射至光柵(8)上色散后又以準(zhǔn)直鏡(7)聚焦在出射狹縫(10)上形成一連續(xù)光譜，由出射狹縫選擇射出一定波長的單色光，經(jīng)聚光鏡(11)聚光后，通過試樣室(12)中的測試溶液部分吸收后，光經(jīng)光門(13)再照射到光電管(14)上.調(diào)整儀器，使透光度為100%,再移動試樣架拉手，使同一單色光通過測試溶液后照射到光電管上.如果被測樣品有光吸收現(xiàn)象，光量減弱，由光電轉(zhuǎn)換元件將變化的光信號轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?，?jīng)線性運算放大器和對數(shù)運算放大器處理，將光能的變化程度通過數(shù)字顯示器顯示出來.可根據(jù)需要直接在數(shù)字顯示器上讀取透光度(T),吸光度(A)或濃度(C).1.1.3特點具有低雜色光，高分辯率的單光束光路結(jié)構(gòu)的單色器；具有良好的穩(wěn)定性,重現(xiàn)性和精確的測量讀數(shù)；明亮清晰的數(shù)字顯示器可顯示透射比，吸光度,濃度和所設(shè)置的波長，提高了儀器的讀數(shù)準(zhǔn)確性；采用最新微機(jī)處理技術(shù)，儀器具有自動設(shè)置0%T和100%等控制功能；儀器配有標(biāo)準(zhǔn)的RS-232雙向通訊接口，不僅可向計算機(jī)發(fā)送測試參數(shù)，還可接收計算機(jī)發(fā)出的指令.在已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度前提下，測定未知樣品濃度；在已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度斜率前提下，測定未知樣品濃度.7200型分光光度計使用方法(基本操作1)1.2.1基本操作通電---儀器自檢----預(yù)熱20min;用鍵設(shè)置測試方式:透射比(T),吸光度(A),已知標(biāo)樣濃度方式(C)和已知標(biāo)樣濃度斜率(K)方式；波長選擇:用波長調(diào)節(jié)旋鈕設(shè)置所需的單色光波長；放樣順序:打開樣品室蓋在1~4號放置比色皿槽中,依次放入％丁校具(黑體)，參比液,樣品液1和樣品液2.校具(黑體)?！?.000”:將％丁校具(黑體)置入光路，在T方式下按"％T"鍵，此時儀器自動校正后顯示”0.000”⑹參比液校”100”％T或”0.000”A:將參比液拉入光路中，按”0A/100%T”鍵調(diào)0A/100%T,此時儀器顯示”BLA”,表示儀器正在自動校正，校正完畢后顯示”100”％T或'0.000HA后,表示校正完畢，可以進(jìn)行樣品測定.(7)樣品測定:將兩樣品液分別拉入光路中，此時若在”T”方式下則可依次顯示樣品的透射比(透光度)若在”A”方式下，則顯示測得的樣品吸光度.7200型分光光度計使用方法(濃度測定)7200型分光光度儀不僅可以測定未知樣品的透射比(T)和吸光度(A)這兩項基本操作，還可進(jìn)行未知樣品濃度測定.在已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度前提下，測定未知樣品濃度.在已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度斜率前提下，測定未知樣品濃度.備注:以上兩種濃度測定的方法請大家參照實驗教學(xué)教材課后自學(xué).7200型光柵分光光度計的使用注意事項(1)預(yù)熱是保證儀器準(zhǔn)確穩(wěn)定的重要步驟.比色皿的清潔程度，直接影響實驗結(jié)果.因此，特別要將比色皿清洗干凈.先用自來水將用過的比色皿反復(fù)沖洗，然后用蒸餾水淋洗，倒立于濾紙片上，待干后再收回比色皿盒中.必要時，還要對比色皿進(jìn)行更精細(xì)的處理,如用濃硝酸或鉻酸洗液浸泡，沖洗.比色皿與分光光度計應(yīng)配套使用,否則會引起較大的實驗誤差.比色皿不能單個調(diào)換7200型光柵分光光度計的使用注意事項(2)比色皿內(nèi)盛液應(yīng)為其容量的2/3,過少會影響實驗結(jié)果，過多易在測量過程中外溢，污染儀器.比色皿中試樣裝入量應(yīng)為2/3~3/4之間拿放比色皿時,應(yīng)持其”毛面”，杜絕接觸光路通過的”光面”.如比色皿外表面有液體，應(yīng)用綢布拭干，以保證光路通過時不受影響.若待測液濃度過大，應(yīng)選用短光徑的比色皿，一般應(yīng)使吸光度讀數(shù)處于0.1~0.8范圍內(nèi)為宜.由于測定空白，標(biāo)準(zhǔn)和待測溶液時使用同樣光徑的比色皿，故不必考慮因光徑變化而引起的影響.UV-754型紫外-可見分光光度計正確使用方法2.1紫外分光光度法概述UV-754型紫外-可見分光光度計結(jié)構(gòu)和工作原理2.1.1儀器結(jié)構(gòu)2.1.2工作原理UV-754型紫外-可見分光光度計使用方法UV-754型紫外-可見分光光度計使用注意事項2.1紫外分光光度計法概述(1)2.1.1定義用紫外光源通過分光光度技術(shù)對物質(zhì)進(jìn)行測定的方法叫作紫外分光光度法.所使用的儀器叫作紫外分光光度計.2.1.2原理因為許多化合物的分子結(jié)構(gòu)中存在共軛雙鍵，在200~400nm的紫外光區(qū)具有吸收光的特性，所以無需進(jìn)行顯色反應(yīng)便能直接測定.2.1.3應(yīng)用常用于對蛋白質(zhì)和核酸進(jìn)行定性，定量測定.蛋白質(zhì)分子中所含酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸等芳香族氨基酸殘基在波長280nm處具有最大吸收峰.故常用波長280nm處的吸光度測定蛋白質(zhì)的濃度.2.1.4特點組成核酸的堿基也含有共軛雙鍵，其最大吸收峰的波長在260nm處.但在280nm處也有一定的光吸收，對蛋白質(zhì)的測定有一定的干擾作用.若分別測定280nm和260nm處的吸光度，可通過經(jīng)驗公式消除核酸對蛋白質(zhì)測定的影響.可對微量蛋白質(zhì)(1~10g/L)不需顯色，進(jìn)行直接定量測定.因此操作簡便，而且可回收樣品.此外，鹽類在280nm處無光吸收，少量鹽類也不會影響測定結(jié)果.紫外分光光度法完全符合Lambert-Beer定律的基本原理.在其它條件保持一致的情況下，被測溶液的吸光度與被測溶液的濃度成正比.UV-754型分光光度計的結(jié)構(gòu)和工作原理2.2.1儀器結(jié)構(gòu)由光源(鎢燈或氚燈),單色器，試樣室,接受器(光電管)，微電流放大器,A/C轉(zhuǎn)換器，打印機(jī)，鍵盤和顯示器等部件組成.微處理機(jī)(CPU)通過輸入，輸出口(I/O)對微電流放大器，顯示器和打印機(jī)等部件進(jìn)行控制，實現(xiàn)儀器的整體功能.2.2.2工作原理UV-754型紫外-可見分光光度計光學(xué)系統(tǒng)1.氚燈;2.鎢燈;3.濾光鏡;4.聚光鏡;5.入射狹縫;6.平面;7.準(zhǔn)直鏡；8.光柵；9.出射狹縫；10.聚光鏡；11.試樣室；12.光門；13.光電管2.2.2工作原理(文)由光源氚燈或鎢燈(1或2)發(fā)出連續(xù)輻射光線經(jīng)濾光鏡(3)和聚光鏡(4)至單色器入射狹縫(5)處聚焦成像，再經(jīng)平面反射鏡(6)反射至準(zhǔn)直鏡(7)產(chǎn)生平行光射至光柵(8)在光柵上色散后又經(jīng)準(zhǔn)直鏡(7)聚焦在出射狹縫(9)上成一連續(xù)光譜，經(jīng)出射狹縫射出的光在聚光鏡(10)聚光后分別通過試樣室(11)中的空白溶液(或?qū)φ杖芤?,標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品溶液，被部分吸收后光經(jīng)光門(12)再照射到光電管(13)上.被光電管接收的光信號再被轉(zhuǎn)換成電信號，后者通過輸入，輸出口(I/O).進(jìn)入微處理機(jī)進(jìn)行調(diào)零，變換對數(shù),濃度計算以及打印數(shù)據(jù)等處理，將檢測結(jié)果通過顯示器和打印系統(tǒng)顯示出來.UV-754型分光光度計使用方法(外型)UV-754型紫外可見分光光度計1.試樣架拉手;2.鍵盤部分;3.數(shù)據(jù)打印;4.波長刻度盤；5.波長手輪;6.電源汗關(guān);7.氚燈觸發(fā)按鈕;8.光源室.UV-754型分光光度計使用方法(鍵盤)UV-754型紫外-可見分光光度計鍵盤詳細(xì)內(nèi)容說明如下：UV-754型分光光度計使用方法(鍵盤內(nèi)容1)功能鍵：F1~F8,暫無功能，備擴(kuò)展使用.T鍵：具有三種透光度狀態(tài)調(diào)節(jié)功能.A/C鍵:吸光度/濃度轉(zhuǎn)換鍵，按此鍵可分別表示”吸光度0~3A","吸光度0~0.lA”,”吸光度0~0.1A"和”濃度”四種狀態(tài).送入鍵:只在"A/C鍵”處于”濃度”狀態(tài)時才起作用.打印鍵:手動方式時有效，每按一次，便打印一次數(shù)據(jù).控制鍵:在分別使用”設(shè)定+","設(shè)定一”,”倍率”,”顯示方式”和”打印方式”各鍵時，需與控制鍵分別聯(lián)合使用才起作用.設(shè)定+鍵:在"A/C鍵”處于”濃度”狀態(tài)時才能設(shè)定”標(biāo)準(zhǔn)濃度值”,”斜率K值”或”斜率B值”等數(shù)據(jù).其功能是將設(shè)定數(shù)值增加.UV-754型分光光度計使用方法(鍵盤內(nèi)容2)設(shè)定-鍵:是使設(shè)定數(shù)值減小,操作與”設(shè)定+鍵”類同.倍率鍵:用來設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的放大倍數(shù).有”1”,”0.1”和”0.01”三檔，與”控制鍵”同時按下，倍率便發(fā)生相應(yīng)的變化.顯示方式鍵:可表示”積分”,”濃度”和”樣品號”三種狀態(tài).打印方式鍵:存在”自動”(每移動一次試樣架，儀器自動打印一次數(shù)據(jù)),”方式1”(手動方式，每按一次此鍵,儀器打印一次數(shù)據(jù))和”方式2"(每分鐘定時打印一次數(shù)據(jù))三種狀態(tài).每與”控制鍵”同時按一次此鍵便改變一個狀態(tài).送紙鍵:每按一次此鍵，儀器移動一次打印紙.TAC:數(shù)字顯示器顯示測定結(jié)果或輸入的數(shù)據(jù).UV-754型紫外可見分光光度計使用方法(1)測試準(zhǔn)備將盛有”空白”或”對照”溶液的比色皿處于試樣室光路位置；選擇波長旋動波長手輪選定所需波長；確定光源波長在200~290nm時，選擇氚燈為光源;波長在290~360nm時，同時以氚燈和鎢燈為光源;波長在360~850nm時，選擇鎢燈為光源;若使用氚燈，需按氚燈觸發(fā)按鈕啟動；儀器自檢顯示器顯示”754”后,數(shù)字顯示出現(xiàn)”100.0”,表明儀器通過自檢程序，此時儀器進(jìn)入"0~100%”,”連續(xù)”和”自動”狀態(tài)(打印系統(tǒng)處于自動打印狀態(tài))儀器預(yù)熱30min后方可進(jìn)行測試.UV-754型紫外可見分光光度計使用方法(2)測試過程數(shù)字顯示透光度”100.0”(或吸光度”0.00”)2~3s后將盛有標(biāo)準(zhǔn)溶液的比色皿移至光路,打印系統(tǒng)便自動打印出所得數(shù)據(jù)；將盛有樣品溶液的比色皿移至光路，打印系統(tǒng)即自動打印出該樣品的數(shù)據(jù).待第一個樣品數(shù)據(jù)打印完畢后，將第二個樣品置于試樣室光路，若有多個樣品，操作以此類推.打印方式采用”自動”方式打印，依所選定表達(dá)方式可打印出以下數(shù)據(jù):No(編號)%T(a光度)或ABS(吸光度)或CONC(濃度)UV—754型紫