微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座

課題1我們學(xué)習(xí)了培養(yǎng)基配制以及微生物培養(yǎng)（接種技術(shù)）。下面我們來學(xué)習(xí)怎樣進(jìn)行細(xì)菌分離，取得所需要目標(biāo)微生物，并對目標(biāo)微生物進(jìn)行培養(yǎng)計(jì)數(shù)。微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第1頁一、研究思緒篩選菌株自然界篩選：依據(jù)它對生存環(huán)境要求，到對應(yīng)環(huán)境中去尋找。試驗(yàn)室篩選：人為提供有利于目標(biāo)菌株生長條件（包含營養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其它微生物生長。選擇培養(yǎng)基：在微生物學(xué)中，將允許特定種類微生物生長，同時(shí)抑制或阻止其它種類微生物生長培養(yǎng)基。目標(biāo)是從眾多微生物中分離所需要微生物。微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第2頁測定微生物數(shù)量方法：1、直接計(jì)數(shù)法：最慣用顯微鏡直接計(jì)數(shù)。先將待測樣品制成懸液，然后取一定量懸液放在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)。依據(jù)在顯微鏡下觀察到微生物數(shù)目來計(jì)算出單位體積內(nèi)微生物總數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備簡單、能觀察微生物形態(tài)特征。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌和活菌；難以計(jì)數(shù)微小細(xì)菌。普通用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第3頁

2、間接計(jì)數(shù)法：最慣用稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法

應(yīng)用：統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目

原理：當(dāng)樣品稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長一個(gè)菌落，起源于樣品稀釋液中一個(gè)活菌，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)平板上菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。

（注意）：普通選擇菌落數(shù)在30-300平板進(jìn)行記數(shù)。稀釋度很主要，普通選擇三個(gè)稀釋度中第二稀釋度到平板所出現(xiàn)平均菌落數(shù)在50個(gè)左右為最好。微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第4頁操作：設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)試驗(yàn)說服力和準(zhǔn)確性。將待測樣品經(jīng)過一系列稀釋，然后選擇三個(gè)稀釋度菌液均勻涂布在平板上，然后培養(yǎng)。（注意）：為了結(jié)果靠近真實(shí)值，可將同一稀釋度菌液涂布到3個(gè)或3個(gè)以上平板上，經(jīng)培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。

對照標(biāo)準(zhǔn)：判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，將未接種培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。判斷選擇培養(yǎng)基是否含有篩選作用，對照培養(yǎng)基接種后培養(yǎng)觀察菌落數(shù)目。

計(jì)算公式：每克樣品中菌株數(shù)=（C/V）*M微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第5頁（1）原理：尿素是一個(gè)主要農(nóng)業(yè)氮肥，只有當(dāng)土壤中細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。尿素細(xì)菌能合成脲酶，在脲酶作用下尿素被分解成氨。CO(NH2)2+H2OCO2+2NH3二、試驗(yàn)設(shè)計(jì)微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第6頁（2）試驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容包含試驗(yàn)方案、材料用具、實(shí)施步驟和時(shí)間安排等。（3）試驗(yàn)流程：

土壤取樣

樣品系列稀釋

涂布平板與培養(yǎng)

觀察并統(tǒng)計(jì)結(jié)果

菌落計(jì)數(shù)微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第7頁

1、土壤微生物主要分布在距地表3～8cm近中性土壤中，約70％～80％為細(xì)菌。2、分離不一樣微生物采取不一樣稀釋度，其原因是不一樣微生物在土壤中含量不一樣，其目標(biāo)是確保取得菌落數(shù)在30～300之間、適于計(jì)數(shù)平板。細(xì)菌稀釋度為104、105、106，放線菌稀釋度為103、104、105，真菌稀釋度為102、103、104。3、培養(yǎng)不一樣微生物往往需要不一樣培養(yǎng)溫度。細(xì)菌普通在30～37℃培養(yǎng)1～2d，放線菌普通在25～28℃培養(yǎng)5～7d，霉菌普通在25～28℃溫度下培養(yǎng)3～4d。4、在菌落計(jì)數(shù)時(shí)，每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)統(tǒng)計(jì)作為結(jié)果，以預(yù)防因培養(yǎng)時(shí)間不足而造成遺漏菌落數(shù)目。點(diǎn)評(píng)：菌種中有些菌體增殖快，有些菌體增值慢，所以培養(yǎng)時(shí)間要充分，使得每個(gè)菌體都能形成肉眼可觀察到菌落。5、菌落特征包含形狀、大小、隆起程度、顏色等方面。閱讀思考微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第8頁三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)（1）對分離菌種作深入判定，還需要借助

生物化學(xué)

方法。(2)在細(xì)菌分解尿素化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成脲酶將尿素分解成了氨。氨會(huì)使培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，PH升高。所以，我們能夠經(jīng)過檢測培養(yǎng)基pH改變來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。(3)在以尿素為唯一氮源培養(yǎng)基中加入

酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，假如PH升高，指示劑將變紅

，說明該細(xì)菌能夠

分解尿素

。[思索10]測定飲水中大腸桿菌數(shù)量方法是將一定體積水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落展現(xiàn)黑色，經(jīng)過記述得出水樣中大腸桿菌數(shù)量。你認(rèn)為在該試驗(yàn)中最少應(yīng)取三個(gè)水樣。微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第9頁四、課堂總結(jié)、點(diǎn)評(píng)試驗(yàn)方案土壤中尿素分解菌分離與計(jì)數(shù)分離篩選微生物原理有利于目標(biāo)菌株生長抑制或阻止其它微生物生長人為條件微生物計(jì)數(shù)方法與原理稀釋涂布平板法顯微鏡直接計(jì)數(shù)法對照設(shè)置與重復(fù)設(shè)置試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)操作結(jié)果與分析微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第10頁五、課余作業(yè)

活菌計(jì)數(shù)技術(shù)廣泛應(yīng)用于土壤含菌量測、食品衛(wèi)生和水源污染度檢測。選做：1、空氣中微生物總數(shù)檢測2、水中細(xì)菌總數(shù)檢測3、牛奶中細(xì)菌分離與計(jì)數(shù)4、土壤中真菌（或放線菌）分離與技術(shù)微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第11頁

練一練

用稀釋涂布平板法來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值相比（）

A.比實(shí)際值高

B.比實(shí)際值低

C.和實(shí)際值一致

D.比實(shí)際值可能高也可能低B微生物的分離和計(jì)數(shù)專家講座第12頁有些細(xì)菌含有尿素分解酶，能將尿素瓊脂培養(yǎng)基中尿素分解生成氨，氨溶于水變成氫氧化銨，造成培養(yǎng)基變成堿性，使酚紅指示劑展現(xiàn)紅色。以下能選擇出分解尿素細(xì)菌培養(yǎng)基是()

A.

KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂、水B.

KH2PO4、NA2HPO4、MgSO4.7