促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座

Gonadotropin-InhibitoryHormoneInhibitsGonadal

DevelopmentandMaintenancebyDecreasing

GonadotropinSynthesisandReleaseinMaleQuail雄性鵪鶉中促性腺激素抑制激素經(jīng)過降低促性腺激素合成和釋放來抑制性腺發(fā)育和維護夏佳豪促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第1頁作者：TakayoshiUbuka,KazuyoshiUkena,PeterJ.Sharp,GeorgeE.Bentley,andKazuyoshiTsutsui通訊地址：KazuyoshiTsutsui，腦科學試驗室，廣島大學綜合藝術(shù)與科學學院，739-8521，東廣島，日本促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第2頁1.研究背景 任何相關(guān)神經(jīng)肽能夠抑制促性腺激素分泌說法沒有得到證實，他們最近證實了在鵪鶉中一個新型下丘腦十二肽能直接抑制促性縣激素釋放，并命名它為GnIH,抑制促性腺激素釋放作用是以鵪鶉下丘腦中一個新型G蛋白偶聯(lián)受體為媒介。這個新促性腺激素抑制系統(tǒng)被看作是鳥類普遍特征，以一個完全新奇觀點，提供了一個前所未有機遇來研究鳥類繁殖調(diào)控。為了了解GnIH在家禽生殖方面作用，他們調(diào)查了GnIH在性腺發(fā)育和維護作用。經(jīng)過滲透泵給成熟鳥類連續(xù)施加兩周GnIH,降低了促性腺激素共同α，LHβ亞基mRNA表示。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第3頁 PlasmaLH和睪酮濃度也降低。另外，給成熟鳥類施加GnIH會誘發(fā)睪丸中睪丸細胞凋亡和降低生精活性。對不成熟鳥類兩周天天施加GnIH會抑制正常睪丸細胞生長和血漿睪酮濃度升高。幼年時蛻毛抑制也在給予GnIH后發(fā)生，這些結(jié)果暗示GnIH經(jīng)過降低促性腺激素合成和釋放來抑制性腺發(fā)育和維護。GnIH可能能夠解釋在鵪鶉中下丘腦GnRH可觀察到降低之前光照能夠誘發(fā)性腺回歸現(xiàn)象。據(jù)他們所知，GnIH是首種被證實能抑制任何脊椎動物生殖功效一個下丘腦神經(jīng)肽。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第4頁2.目標及意義

●為了闡示GnIH作用模式。 ●GnIH功效性意義和它作為一個包括到家禽生殖關(guān)鍵神經(jīng)肽潛在功效。 ●為了調(diào)查GnIH是否抑制睪丸細胞發(fā)育與維護。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第5頁3.材料和方法動物：成熟和未成熟雄性日本鵪鶉。新孵出鵪鶉被放置在一個溫度控制室(35±2℃)日常16小時光照和8小時黑暗(開燈700小時)育雛第一周。溫度以每七天下降3.5℃梯度到第四面，將鵪鶉分離到單獨籠子。全部鳥類提供鵪鶉食物和自來水。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第6頁 試驗計劃:為了確定GnIH合成和分泌影響，利用小型滲透泵把GnIH施加給三個月大成熟個體，用三個不用劑量(0.03,0.3,3微克GnIH在0.5微升0.9%生理鹽水中/h,每組七只），對照組用相同滲透泵攝入生理鹽水。每個滲透泵在戊巴比妥鈉（40mg/kg)下植入ip（趨化因子干擾素誘導(dǎo)蛋白），在連續(xù)兩周施加GnIH后，全部鳥類在1400至1600小時之間經(jīng)過去頭終止生命活動，血液搜集在肝素化中并在4℃離心20min，血漿保留在20℃，馬上搜集血液后去除垂體，將其速凍，保留在-80℃中。促性性腺激素commonα，LHβ和FSHβ亞基mRNA在垂體表示用競爭性PCR量化。PlasmaLH和睪酮濃度用RIA量化。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第7頁為了調(diào)查GnIH在睪丸發(fā)育方面影響，向不成熟鵪鶉（每組8只)注射三種不一樣劑量GnIH，從8-20日齡開始在1400-1600小時之間天天一次，因為不成熟鵪鶉體型較小，注射用小型滲透泵。它們在試驗過程中，平均體重由17.1g增至56.8g。將GnIH劑量由5.8ng天天降至1.8ng天天/g（體重）。對照組僅提供生理鹽水。全部鵪鶉在1400-1600小時之間，在第二十一天時候經(jīng)過去頭搜集血液和睪丸，血液搜集后，移除睪丸，稱重，浸泡在Bouin氏固定液里兩天。隨即脫水嵌入石蠟，切成6微米小段蘇木-伊紅染色用于組織學檢驗，血漿睪酮濃度用RIA量化。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第8頁為了調(diào)查GnIH睪丸細胞凋亡和生精活動影響，用滲透泵給成熟鳥類施加GnIH(0.3微克/h)兩周。在1400-1600小時之間將其麻醉而且在用完4%多聚醛固定液后用PBS灌流。去除睪丸存于固定液兩天，然后脫水嵌入石蠟。切成6微米小段，經(jīng)過末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)缺口末端標識檢測凋亡細胞，睪丸形態(tài)經(jīng)過蘇木-伊紅染色調(diào)查。最終為了了解GnIH家禽生殖生理作用，我們分析了GnIH在幼年蛻毛到成熟時成年蛻毛影響，GnIH被注射入未成熟鳥類，以三種不一樣劑量（0.01,0.1,1微克在100微升0.9%生理鹽水中）天天一次，每組8只，8-20日齡，1400-1600小時之間，對照組僅提供生理鹽水。促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第9頁4.結(jié)果分析成年時GnIH對促性腺激素合成和釋放作用圖一促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第10頁成年時GnIH對血漿睪酮濃度，睪丸凋亡細胞，生精活動作用。圖二促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第11頁圖三促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第12頁圖四促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第13頁發(fā)育時期GnIH對睪丸生長，生精活動以及血漿睪酮濃度作用圖五圖六圖七促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第14頁發(fā)育時期GnIH對幼年蛻毛進入成年影響促性腺激素抑制激素對性腺垂體的發(fā)育和維護專家講座第15頁5.討論試驗數(shù)據(jù)表明，GnIH直接作用于垂體GnIH受體，造成促性腺激素合成和釋放降低，抑制睪丸發(fā)育和維護，但不能排除GnIH對睪丸直接作用，然而，體外促黃體激素直接抑制