全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座

美國雅培i化學(xué)發(fā)光免疫分析儀吉林市中心醫(yī)院滕彥玲全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第1頁化學(xué)發(fā)光基本原理

反應(yīng)體系中某種物質(zhì)分子(反應(yīng)物、產(chǎn)物、中間體或熒光物質(zhì))吸收了反應(yīng)所釋放能量而由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，然后再從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)，同時(shí)將能量以光輻射形式釋放出來，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光.將化學(xué)發(fā)光反應(yīng)應(yīng)用于分析化學(xué)，依據(jù)某一時(shí)刻發(fā)光強(qiáng)度或反應(yīng)發(fā)光總量來確定體系對(duì)應(yīng)組分含量分析方法叫化學(xué)發(fā)光分析法.

全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第2頁化學(xué)發(fā)光反應(yīng)必須具備兩個(gè)條件一、是該反應(yīng)能釋放出一定能量，且釋放出能量能夠被某種反應(yīng)產(chǎn)物或中間體所吸收，使之處于激發(fā)態(tài)；二、是這種激發(fā)態(tài)產(chǎn)物應(yīng)含有一定化學(xué)發(fā)光量子產(chǎn)率，或者能夠?qū)⑵淠芰坑行У剞D(zhuǎn)移給某種熒光物質(zhì)，產(chǎn)生光輻射.基于此，并不是任何化學(xué)反應(yīng)都能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，所以，假如測(cè)量條件適當(dāng)，化學(xué)發(fā)光分析會(huì)有足夠選擇性.

全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第3頁化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象發(fā)覺最早發(fā)覺化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象發(fā)生在生物體內(nèi)，即熒火蟲，現(xiàn)在稱之為生物發(fā)光(Bioluminescence).到了十九世紀(jì)后期人們發(fā)覺簡(jiǎn)單非生物有機(jī)化合物也能產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光.1877年，發(fā)覺洛汾堿(2，4，5-三苯基咪唑)在堿性介質(zhì)中被過氧化氫等試劑氧化時(shí)發(fā)出綠色光.1928年，觀察到魯米諾(3-氨基苯二甲酰肼)在堿性介質(zhì)中化學(xué)發(fā)光行為.1935年，第一個(gè)匯報(bào)了光澤精(N,N-二甲基二吖啶硝酸鹽)與過氧化氫反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光.到現(xiàn)在吖啶酯、三聯(lián)吡啶釕等發(fā)光標(biāo)識(shí)物應(yīng)用技術(shù)成熟。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第4頁化學(xué)發(fā)光分析法特點(diǎn)因?yàn)榛瘜W(xué)發(fā)光分析不使用任何光源，防止了背景光和雜散光干擾，降低了噪聲，大大提升了信噪比，因而，化學(xué)發(fā)光分析法普通都有很高靈敏度，通?？蓽y(cè)定納克級(jí)或皮克級(jí)化學(xué)成份.測(cè)量化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，多采取光電轉(zhuǎn)換裝置，用函數(shù)統(tǒng)計(jì)儀或數(shù)顯裝置，統(tǒng)計(jì)化學(xué)發(fā)光相對(duì)強(qiáng)度.以最大發(fā)光強(qiáng)度(曲線峰高)定量被測(cè)組分濃度.因?yàn)榱鲃?dòng)注射分析(FIA)技術(shù)發(fā)展，流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光儀也廣泛使用.配置微機(jī)系統(tǒng)，自動(dòng)進(jìn)樣，儲(chǔ)存統(tǒng)計(jì)，打印結(jié)果，使化學(xué)發(fā)光分析速度更加快.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第5頁化學(xué)發(fā)光分類化學(xué)發(fā)光反應(yīng)參加免疫測(cè)定分為二種類型。第一個(gè)是以發(fā)光劑作為酶免疫測(cè)定底物，經(jīng)過發(fā)光反應(yīng)增強(qiáng)測(cè)定敏感性。如：化學(xué)發(fā)光酶免疫測(cè)定（CLEIA，與酶標(biāo)ELISA法類似，即最終一步酶反應(yīng)所用底物為發(fā)光劑）第二種是以發(fā)光劑作為抗體或抗原標(biāo)識(shí)物，直接經(jīng)過發(fā)光反應(yīng)檢測(cè)標(biāo)本中抗原或抗體含量。如：化學(xué)發(fā)光標(biāo)識(shí)免疫測(cè)定亦稱化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（ECLI）

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SR結(jié)構(gòu)1.i

SR?processingmodule2.RSH(retestsamplehandler)3.SCC(systemcontrolcenter)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第7頁全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第8頁

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SR結(jié)構(gòu)1.Frontprocessingcentercover2.Processingmodulekeypad3.Supplyandwastecenterdoor4.Cardcagedoor全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第9頁1.Rearprocessingcentercover2.Rearprocessingcenteraccesspanel3.Powersupplypanel4.PumpbaypanelABBOTT

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SR結(jié)構(gòu)全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第10頁Samplehardwarecomponents:Providesampleaspirationanddispense.2.Reagenthardwarecomponents:Providereagentaspirationanddispense.3.Processpathhardwarecomponents:PositiontheRVsforsampleandreagentaspiration,mixing,washing,andCMIAprocessing全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第11頁1.SamplepipettorSTATpipettor全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第12頁SampleandSTATpipettors(SandST):2.SampleandSTATsyringes(SSandSTS):3.SampleandSTATwashstations(SWandSTW):全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第13頁Reagentcarousel2.Reagentbarcodereader3.Reagentpipettors4.Reagentsyringes

5.Reagentwashstations全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第14頁1.Loaddiverter2.RVaccessdoor3.RVloaderandhopperassembly4.STATdiverter5.Vortexers(Mix)6.Washzonediverter7.Washzonemanifolds(WZ1,WZ2):8.Processpathdrivemotor9.Pre-trigger/triggermanifold10.CMIAreader(CMIA)11.Liquidwastearm12.RVunloader全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第15頁全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第16頁ABBOTT

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SR檢測(cè)原理ArchitectI系統(tǒng)采取化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析技術(shù)（ChemiluminesentMicroparticleImmunoAssay,CMIA）檢測(cè)樣品中抗原，抗體和分析物。即：磁性微粒子包被捕捉分子（抗原，抗體或病毒顆粒）特異與被分析物中抗原、抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，再與吖啶酯標(biāo)識(shí)連接物反應(yīng)形成雙抗體夾心抗原抗體復(fù)合物。吖啶酯在過氧化氫稀堿溶液中發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成10-甲基吖啶酮，當(dāng)它恢復(fù)到基態(tài)時(shí)發(fā)光，依據(jù)發(fā)光強(qiáng)度可計(jì)算出分析物濃度。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第17頁全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第18頁ABBOTT

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SR試劑組成試劑組成中圈（RI）：包被有抗體順磁性微粒子內(nèi)圈（R2）：吖啶酯包被抗體外圈：樣本稀釋液預(yù)激發(fā)液：1.32%過氧化氫激發(fā)液：0.35mol./L氫氧化鈉清洗緩沖液：磷酸鹽緩沖液R1試劑R2試劑全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第19頁ABBOTT

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SR反應(yīng)類型1.雙抗原（抗體）夾心一步法2.雙抗原（抗體）夾心兩步法

AssayprocessingforOnestep25AssayprocessingforTwostep18-4

STATassayprocessingforOnestep11

STATassayprocessingforTwostep4-4全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第20頁AssayprocessingforTwostep18-4(i

System)

1.Atposition1thesamplepipettordispensesthesampleintotheRV(reactionvessel).2.Atposition2theR1pipettordispensesthemicroparticles.3.Atposition3thevortexermixesthesampleandmicroparticles.4.Atpositions4-63thereactionmixtureincubatesfor18minutes.共112個(gè)RV杯空位，每18秒轉(zhuǎn)一個(gè)空位，200T/h。常規(guī)28Min/TEST全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第21頁AssayprocessingforTwostep18-4(i

System)5.Atpositions64-67thewashzone1manifoldwashesthereactionmixtureintheRV,andthenremovesunboundmaterials全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第22頁AssayprocessingforTwostep18-4(i

System)6.Atposition71theR2pipettordispensesacridinium-labeledconjugate.7.Atposition72thevortexermixesthereactionmixture.8.Atpositions73-86thereactionmixtureincubatesfor4minutes.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第23頁AssayprocessingforTwostep18-4(i

System)9.Atpositions87-90thewashzone2manifoldwashesthereactionmixtureintheRV,andthenremovesunboundmaterials.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第24頁AssayprocessingforTwostep18-4(i

System)10.Atposition94thepre-triggernozzledispensesPre-TriggerSolutiontothereactionmixture,andthenmixesusingthevortexer.11.Atposition98theCMIAopticalsystemtakesabackgroundread,thetriggernozzledispensesTriggerSolutiontothereactionmixture,andthentheCMIAopticalsystemtakesanactivatedread.12.Atposition100theliquidwastearmaspiratestheliquidwastefromtheRV.13.Atposition109theRVunloaderremovestheRV全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第25頁AssayprocessingforOnestep25(i

System)

1.Atposition1thesamplepipettordispensesthesampleintotheRV(reactionvessel).2.Atposition2theR1pipettordispensesthemicroparticlesandacridinium-labeledconjugate.NOTE:Foradelayedone-stepassaytheR2pipettoraddstheacridinium-labeledconjugateatposition71andthevortexermixesthereactionmixtureatposition72.3.Atposition3thevortexermixesthesample,microparticles,andconjugate.4.Atpositions4-86thereactionmixtureincubatesfor25minutes.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第26頁AssayprocessingforOnestep25(i

System)5.Atpositions87-90thewashzone2manifoldwashesthereactionmixtureintheRV,andthenremovesunboundmaterials.Nextpositionissametothetwostep18-4.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第27頁STATassayprocessingforOnestep11(i

System)

1.Atposition47theSTATpipettordispensesthesampleintotheRV(reactionvessel).2.Atposition48theR2pipettordispensesthemicroparticlesandacridinium-labeledconjugate.3.Atposition49thevortexermixesthesample,microparticles,andconjugate.4.Atpositions50-86thereactionmixtureincubatesfor11minutes.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第28頁STATassayprocessingforOnestep11(i

System)5.Atpositions87-90thewashzone2manifoldwashesthereactionmixtureintheRV,andthenremovesunboundmaterials.Nextpositionissametothetwostep18-4.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第29頁STATassayprocessingforTwostep4-4(i

System)

1.Atposition47theSTATpipettordispensesthesampleintotheRV(reactionvessel).2.Atposition48theR2pipettordispensesthemicroparticles.3.Atposition49thevortexermixesthesampleandmicroparticles.4.Atpositions50-63thereactionmixtureincubatesfor4minutes.全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀運(yùn)行原理專家講座第30頁STATassayprocessingforTwostep4-4(i

System)5.Atpositions64-67thewashzone1manifoldwashesthereact