hla-b27高分辨基因分型的臨床

hla-b27高分辨基因分型的臨床hla-b27高分辨基因分型的臨床第1頁

HLA-B27分子及其等位基因1

與HLA-B27相關(guān)疾病2

HLA-B27檢測方法3

本企業(yè)試劑盒介紹4hla-b27高分辨基因分型的臨床第2頁

1.HLA-B27抗原分子及其等位基因hla-b27高分辨基因分型的臨床第3頁

HLA-B27抗原分子結(jié)構(gòu)及其特點(diǎn)HLA-B27抗原分子是由位于人類第六號(hào)染色體短臂上B*27等位基因編碼糖蛋白,分子量為56×103U。由兩條多肽鏈組成，一條為α鏈或重鏈，分子量約為44×103U，包含胞外區(qū)，跨膜區(qū)，胞內(nèi)區(qū)三個(gè)結(jié)構(gòu)域，其中胞外區(qū)又分為α1，α2，

α3三個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)；另一條為β鏈或輕鏈即β2微球蛋白，分子量約12×103U，二者結(jié)合共同組成HLA-B27抗原分子。hla-b27高分辨基因分型的臨床第4頁

HLA-B27抗原分子結(jié)構(gòu)hla-b27高分辨基因分型的臨床第5頁

α1區(qū)與α2區(qū)肽鏈折疊后共同組成一個(gè)抗原結(jié)合凹槽，槽內(nèi)形成A,B,C,D,E,F共6個(gè)袋狀結(jié)構(gòu)，其中B袋在HLA-B27分子中是最保守結(jié)構(gòu)。凹槽作用是結(jié)合抗原肽，使抗原肽與HLA-B27分子牢靠結(jié)合。hla-b27高分辨基因分型的臨床第6頁HLA-B*27等位基因結(jié)構(gòu)及其特點(diǎn)年WHO正式命名HLA—B*27等位基因到達(dá)了24個(gè)，其中只有15個(gè)有相對(duì)應(yīng)抗原表示。到年11月WHO正式命名HLA—B*27等位基因到達(dá)59個(gè)(B*2701一B*2759)。HLA—B*27等位基因呈多態(tài)性，主要是因?yàn)閭€(gè)別堿基突變造成，編碼蛋白差異主要集中在αl、α2結(jié)構(gòu)區(qū)內(nèi)。hla-b27高分辨基因分型的臨床第7頁

其中HLA-B*2701與HLA-B*2705編碼蛋白在78-81范圍內(nèi)有2個(gè)氨基酸不一樣；其中HLA-B*2702與HLA-B*2705編碼蛋白在78-81范圍內(nèi)有3個(gè)氨基酸不一樣；其中HLA-B*2703與HLA-B*2705編碼蛋白僅有1個(gè)氨基酸差異，即在59位前者為組氨酸（His），后者為酪氨酸（Tyr）；hla-b27高分辨基因分型的臨床第8頁

HLA-B*2705基因分布最廣，幾乎見于全部些人種。甚至認(rèn)為其它等位基因都是由HLA-B*2705基因發(fā)生突變、移位形成。HLA-B*2705編碼蛋白最為顯著特點(diǎn)就是在B袋上45位發(fā)生氨基酸突變，這一改變直接影響HLA-B27分子在細(xì)胞表面表示，影響HLA-B27分子與抗原肽結(jié)合，同時(shí)影響了HLA-B27分子對(duì)胞內(nèi)外抗原遞呈。hla-b27高分辨基因分型的臨床第9頁

2.與HLA-B27相關(guān)疾病hla-b27高分辨基因分型的臨床第10頁

強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosingspondylitisAS）幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（juvenilerheumatoidarthritisJRA)急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis，AAU)白血病等疾病hla-b27高分辨基因分型的臨床第11頁強(qiáng)直性脊柱炎（AS）1973年Brewerton和schiosstein發(fā)覺強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosingspondylitisAS）與HLA-B27抗原有非常強(qiáng)相關(guān),這是當(dāng)前唯一有臨床價(jià)值血型相關(guān)抗原,這在迄今已知

HLA與疾病關(guān)聯(lián)中是最強(qiáng)和最典型。hla-b27高分辨基因分型的臨床第12頁AS抗原學(xué)檢測【HLA-B27與強(qiáng)直性脊柱炎臨床分析】報(bào)道：HLA-B27抗原陽性率在AS患者高達(dá)96％以上，而正常群體中僅4%-7%,HLA-B27抗原攜帶者發(fā)生AS相對(duì)危險(xiǎn)率高達(dá)70%。hla-b27高分辨基因分型的臨床第13頁與AS相關(guān)B*27等位基因hla-b27高分辨基因分型的臨床第14頁AS基因?qū)W檢測不一樣人群AS患者包括B*27等位基因hla-b27高分辨基因分型的臨床第15頁

與AS相關(guān)B*27等位基因hla-b27高分辨基因分型的臨床第16頁

不一樣人群AS患者中HLA-B*27等位基因頻率

不一樣人群AS患者HLA-B*27等位基因頻率

摘自【HLA—B*27高分辨等位基因在1606例疑似強(qiáng)直性脊柱炎患者中表示】hla-b27高分辨基因分型的臨床第17頁HLA-B27與AS致病機(jī)制研究HLA-B27分子與非折疊蛋白理論假說HLA-B27分子游離重鏈與AS其它hla-b27高分辨基因分型的臨床第18頁HLA-B27分子非折疊蛋白理論假說

HLAI類分子是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)成熟，新合成HLAIα進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔與鈣連蛋白結(jié)合，使I類分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中維持個(gè)別折疊，繼而與新合成β2-微球蛋白組裝成完整I類分子，此時(shí)B27分子才能被認(rèn)為是成熟，轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞表面。研究發(fā)覺，HLA-B27折疊速度較其它HLA分子（非HLA-B27分子）慢。造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中出現(xiàn)大量折疊不良或個(gè)別折疊HLA-B27重鏈個(gè)別，通常情況下，非折疊重鏈在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)能夠被去除，但因?yàn)橐恍┫嚓P(guān)物質(zhì)缺乏或無效，所致非折疊重鏈堆積，形成了非折疊蛋白反應(yīng)。有資料報(bào)道，AS發(fā)生可能與這些HLA-B27分子未折疊相關(guān)。hla-b27高分辨基因分型的臨床第19頁HLA-B27分子游離重鏈與ASHLA-B27分子主要功效是：識(shí)別和處理抗原肽，然后在遞呈給T淋巴細(xì)胞。HLA-B27分子含有特殊生物學(xué)效應(yīng)，它在體外含有形成重鏈二聚體能力，主要是經(jīng)過B27分子第67位氨基酸殘基半氨酸二硫鍵結(jié)合形成穩(wěn)定二聚體。經(jīng)過認(rèn)識(shí)HLA-B27分子結(jié)構(gòu)特異性，主要是深入研究游離重鏈表示是否應(yīng)該認(rèn)為是造成AS發(fā)病原因之一。當(dāng)HLA-B27分子適當(dāng)、正確組裝時(shí)，其遞呈抗原肽通常被CD8CTL識(shí)別；但當(dāng)AS發(fā)生時(shí)，限制性CIMTh細(xì)胞卻能識(shí)別非折疊、空載或缺失B27分子。在這種情況下，就是HLAII類分子遞呈B27重鏈，降解后形成多肽被CD4Th細(xì)胞識(shí)別后造成關(guān)節(jié)炎癥。此研究當(dāng)前還存在爭議。hla-b27高分辨基因分型的臨床第20頁其它HLA-B27可提升致關(guān)節(jié)炎細(xì)菌在胞內(nèi)存活率，從而加劇關(guān)節(jié)炎嚴(yán)重度。B27改變信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)學(xué)說，即HLA-B27經(jīng)過修飾炎癥因子基因相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程而致關(guān)節(jié)炎。HLA-B39,HLA-B60可能對(duì)AS誘發(fā)起到一定作用。hla-b27高分辨基因分型的臨床第21頁幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（JRA）幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（juvenilerheumatoidarthritisJRA)是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病中一個(gè)特殊類型，而HLA-B27抗原陽性幼年類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎又是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎疾病中一個(gè)亞型。幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是兒童時(shí)期較常見結(jié)締組織病，國外報(bào)道發(fā)覺，較多幼年類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者HLA-B27抗原展現(xiàn)陽性，且沒有男女性別差異。hla-b27高分辨基因分型的臨床第22頁

【differentialdiagnosisjuvenileankylosingspondylitisandjuvebilerheumatoidarthritisbysubtypesofHLA-B27alleles】報(bào)道：和該疾病相關(guān)

HLA-B*27等位基因包括B*2705,B*2704,B*2707,B*2702基因。在HLA-B27抗原陽性JRA患者中，B*2705基因占60.7%，B*2704基因占28.57%，B*2702基因占3.57%，B*2707基因占7.14%。hla-b27高分辨基因分型的臨床第23頁HLA-B27與JRA致病機(jī)制研究以各種感染性微生物作為外來抗原（HLA-B27分子與其結(jié)構(gòu)有相同性），激活免疫細(xì)胞，經(jīng)過損傷或分泌細(xì)胞因子觸發(fā)異常免疫反應(yīng)，引發(fā)本身組織損害和變性。尤其是細(xì)菌、病毒特殊成份作為超抗原，其結(jié)構(gòu)與人類MHC抗原有同源性，不需抗原呈遞細(xì)胞加工處理，即可直接與T細(xì)胞受體直接結(jié)合（HLA-B27充當(dāng)細(xì)胞表面受體），激活T細(xì)胞。hla-b27高分辨基因分型的臨床第24頁急性前葡萄膜炎（AAU)急性前葡萄膜炎(acuteanterioruveitis，AAU)是一類常見本身免疫性致盲眼病，病因復(fù)雜、病程長、易重復(fù)發(fā)作,要確定其發(fā)病原因仍比較困難。自1973年BrewertonDA等人首次報(bào)道HLA—B27抗原與AAU之間相關(guān)性以來，迄今為止，已發(fā)覺2O各種眼病與HLA抗原含有相關(guān)性，其中最主要是HLA—B27抗原與AAU之間相關(guān)性。hla-b27高分辨基因分型的臨床第25頁

【AssociationbetweenHLA-B27antigenandacuteanterioruveitis】指出：我國外報(bào)道有所不一樣，我國報(bào)道37.0％-60％AAU患者HLA-B27抗原呈陽性，國外報(bào)道19％-88％呈陽性,而B*27等位基因與AAU關(guān)系報(bào)道較少。【acuteanterioruveitisandHLA-B27】報(bào)道，在HLA-B27抗原陽性AAU患者中,HLA-B*2704基因占44．7%,B*2705基因占56%。hla-b27高分辨基因分型的臨床第26頁HLA-B27與AAU致病機(jī)制研究葡萄膜炎-受體假說：HLA—B27(+)AAU可能因?yàn)镠LA—B27分子擔(dān)當(dāng)細(xì)胞表面受體，其與微生物結(jié)合，由此引發(fā)葡萄膜炎。分子擬態(tài)假說:HLA—B27分子在結(jié)構(gòu)上與激發(fā)引發(fā)AAU微生物肽序列相同,從而引發(fā)葡萄膜炎。hla-b27高分辨基因分型的臨床第27頁其它疾病【Geneticmarkerslinkedtorheumatoidarthritisarealsostronglyassociatedwitharticularmanifestationsinulcerativecolitispatients】【Flt3一ITDmutationscangenerateleukaemiaspecificneoepitopes：potentialroleforimmunotherapeuticapproaches】【AnkylosingspondylitisislinkedtoKlebsiella—theevidence】

等三篇文件報(bào)道：HLA-B27抗原與白塞氏病也有一定相關(guān)性。hla-b27高分辨基因分型的臨床第28頁

另外，HLA-B27抗原與白血病、心臟疾病、鼻咽癌、銀屑病、關(guān)節(jié)炎型腸炎也有相關(guān)性，但相關(guān)報(bào)道較少。hla-b27高分辨基因分型的臨床第29頁

名稱易感性等位基因強(qiáng)直性脊柱炎B*2701,B*2702,B*2704,B*2705,B*2710類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎B*2702,B*2704,B*2705,B*2713青少年自發(fā)性關(guān)節(jié)炎B*2724脊椎關(guān)節(jié)炎 B*2709，B*2705關(guān)節(jié)炎型炎癥性腸病B*27XX白塞病B*2702銀屑病B*27XX白血病B*27XX銀屑病B*27XX鼻咽癌B*27XX賴姆疏螺旋體病B*27XXHIV-1感染B*27XXhla-b27高分辨基因分型的臨床第30頁

3.HLA-B27檢測方法hla-b27高分辨基因分型的臨床第31頁

微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)（CDC）流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分子生物學(xué)技術(shù)（PCR）

hla-b27高分辨基因分型的臨床第32頁

三種檢測方法對(duì)比

hla-b27高分辨基因分型的臨床第33頁

HLA-B27基因分型檢測方法特異性引物序列聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-SSO）

聚合酶鏈反應(yīng)-直接測序分型（PCR-SBT）

hla-b27高分辨基因分型的臨床第34頁

PCR-SSP:針對(duì)HLA-B*27基因外顯子2序列，合成對(duì)應(yīng)HLA-B*27基因引物，在PCR擴(kuò)增儀上擴(kuò)增即可，這種特異性

PCR擴(kuò)增產(chǎn)物可經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳檢出，凝膠成像系統(tǒng)下觀察結(jié)果。

hla-b27高分辨基因分型的臨床第35頁

血清學(xué)檢測HLA-B27抗原優(yōu)缺點(diǎn)

試驗(yàn)操作方面（1）經(jīng)典血清學(xué)分型技術(shù)因其操作簡便，準(zhǔn)確率尚可且成本較低，曾得到廣泛應(yīng)用。（2）所用標(biāo)本須為新鮮血液標(biāo)本。

（3）受細(xì)胞純度、補(bǔ)體差異、單抗效價(jià)影響，易出現(xiàn)錯(cuò)判漏判，觀察結(jié)果存在主觀原因。臨床應(yīng)用方面：血清學(xué)檢測是蛋白抗原，不能檢測出HLA-B*27等位基因，即血清學(xué)結(jié)果是陰性，只能說明HLA-B27抗原陰性，并不能確定HLA-B*27基因是否存在。當(dāng)前尚無針對(duì)HLA-B*27不一樣等位基因抗體，故不能檢測出對(duì)應(yīng)HLA-B*27等位基因.

hla-b27高分辨基因分型的臨床第36頁

基因?qū)W方法檢測HLA—B*27基因優(yōu)缺點(diǎn)（以PCR-SSP為例）：

試驗(yàn)操作方面（1）只需PCR擴(kuò)增儀和瓊脂糖凝膠電泳設(shè)備；費(fèi)用中等，適合在我國現(xiàn)有條件下開展。（2）標(biāo)本需要量少，取材輕易，提取DNA可長久保留；陳舊血、冷凍血也可用于DNA提取，使留取標(biāo)本不受時(shí)間限制。（3）結(jié)果準(zhǔn)確可靠，分析結(jié)果客觀，依據(jù)內(nèi)對(duì)照及有沒有特異性區(qū)帶來判斷結(jié)果一目了然。（4）PCR時(shí)要在嚴(yán)格試驗(yàn)條件下進(jìn)行，預(yù)防污染。臨床應(yīng)用方面：能直接檢測出HLA-B*27等位基因，且不一樣等位基因與疾病相關(guān)性大相徑庭，不一樣等位基因造成臨床表現(xiàn)各不相同，適于臨床常規(guī)；hla-b27高分辨基因分型的臨床第37頁

檢測結(jié)果不正確主要危害在于：檢測結(jié)果假陰性：使很多病人在判別診療上缺乏依據(jù)；檢測結(jié)果假陽性：使一些病人誤用治療類風(fēng)濕和強(qiáng)直性脊椎炎藥品。HLA-B27高分辨試劑盒能簡單、快捷檢測出HLA-B*27等位基因，有效地防止了血清學(xué)檢測結(jié)果假陰性造成疾病診療漏診；同時(shí)也能有效地防止了檢測結(jié)果假陽性，造成疾病診療誤診；同時(shí)，直接檢測出HLA-B*27等位基因與疾病相關(guān)性各不相同，能有效指導(dǎo)臨床疾病診療。hla-b27高分辨基因分型的臨床第38頁

4.本企業(yè)HLA-B27試劑盒hla-b27高分辨基因分型的臨床第39頁

HLA-B*27篩查試劑盒HLA-B*27驗(yàn)證試劑盒HLA-B*27高分辨試劑盒hla-b27高分辨基因分型的臨床第40頁

本企業(yè)研制HLA-B*27基因高分辨引物板試劑盒，采取PCR-SSP方法檢測HLA-B*27等位基因，能直接檢測出中國人常見HLA—B*2704、2705、2702、2706、2701、2708、2710等基因，用于AS和其它相關(guān)疾病輔助診療。hla-b27高分辨基因分型的臨床第41頁

標(biāo)本要求：標(biāo)本需要量少（只需6ulDNA即可，DNA最正確濃度為30-50ng/μl，且A260/A280值