血球計數(shù)板的學(xué)習(xí)教案

血球計數(shù)板的學(xué)習(xí)教案第1頁/共12頁一、實驗?zāi)康?/p>

了解血球計數(shù)板的結(jié)構(gòu)掌握利用血球計數(shù)板計微生物細(xì)菌數(shù)的原理和方法

第2頁/共12頁二、實驗原理1.血球計數(shù)板計數(shù)原理是什么？如何使用血球計數(shù)板對微生物尺寸大小進(jìn)行測定？第3頁/共12頁第4頁/共12頁第5頁/共12頁2.血球計數(shù)板計算微生物數(shù)量的優(yōu)缺點是什么？血球計數(shù)板與平板稀釋法對細(xì)菌個數(shù)進(jìn)行測定，結(jié)果往往差別很大。分析原因。將細(xì)菌（或其他微生物）

以染料（例如結(jié)晶紫）染色后，直接以顯微鏡觀察的方式計數(shù)，再推算回細(xì)菌數(shù)，所得即為總菌數(shù)，即死菌、活菌一并計算。優(yōu)點：簡單、快速、重復(fù)性高。不足：不能區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞，應(yīng)用范圍較窄；一些小的細(xì)胞在顯微鏡下很難看到；樣品中菌液濃度不能低于106個/mL；不能用于菌絲體或呈鏈狀而不分散的微生物測定第6頁/共12頁三、實驗設(shè)備和儀器

（1）細(xì)菌及培養(yǎng)基：斜面（2）儀器：血球計數(shù)板，顯微鏡。（3）其它：裝有4.5ml無菌水的試管，蓋玻片，無菌平皿，無菌吸管。第7頁/共12頁

1．稀釋（1）取接種成功的斜面一支，加入5ml無菌水，搖晃試管一分鐘，使形成菌液。（有4個接種斜面）（2）將菌液倒入潔凈的150ml錐形瓶中，加結(jié)晶紫三滴，搖晃2分鐘，再加入無菌水至50ml。2．鏡檢計數(shù)室在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進(jìn)行計數(shù)。3．加樣品將清潔干燥的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過多），讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計數(shù)室，一般計數(shù)室均能充滿菌液。注意不可有氣泡產(chǎn)生。四、實驗步驟第8頁/共12頁4．顯微鏡計數(shù)靜止5分鐘后，將血球計數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計數(shù)。在計數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計數(shù)。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5—10個菌體為宜。每個計數(shù)室選5個中格（可選4個角和中央的中格）中的菌體進(jìn)行計數(shù)。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時，即作兩個菌體計數(shù)。計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的值來計算樣品的含菌量。5．清洗血球計數(shù)板使用完畢后，將血球計數(shù)板在水籠頭上用水柱沖洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。第9頁/共12頁實驗注意事項(1)血球計數(shù)板計數(shù)室只能水沖，不得擦拭!第10頁/共12頁六、思考題

1.有人想通過測量菌液濁度來計算細(xì)菌數(shù)量。他的想法可行嗎？試分析。

2.微生物學(xué)在環(huán)境工程學(xué)科的作用如何？請描述。（廣泛、詳細(xì)