基因工程的基本操作程序第步

基因工程的基本操作程序第步第1頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一復(fù)習(xí)提問(wèn)1.基因工程的基本操作程序的四個(gè)步驟2.目的基因主要指什么?也可以是什么?3.獲得目的基因常用的方法。4.基因文庫(kù)主要包括哪兩種?5.PCR技術(shù)的原理、條件6.PCR與DNA復(fù)制的區(qū)別（表格）第2頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一PCR技術(shù)—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

原理：條件：PCR擴(kuò)增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理四種脫氧核苷酸一對(duì)引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）DNA的兩條鏈為模板溫度控制第3頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一PCR技術(shù)與DNA復(fù)制的比較DNA復(fù)制PCR技術(shù)解旋酶催化DNA在高溫作用下變性解旋細(xì)胞內(nèi)（主要在細(xì)胞核內(nèi)）細(xì)胞外（主要在PCR擴(kuò)增儀內(nèi)）DNA解旋酶、普通的DNA聚合酶等耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）細(xì)胞內(nèi)溫和條件需控制溫度，在較高溫度下進(jìn)行區(qū)別解旋方式場(chǎng)所酶溫度條件前提有一段已知的目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物聯(lián)系①模板：均需要脫氧核苷酸鏈作為模板進(jìn)行物質(zhì)合成②原料：均為四種脫氧核苷酸第4頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一PCR技術(shù)擴(kuò)增過(guò)程a、DNA變性（90℃-95℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，

斷裂，形成_______

b、復(fù)性（55℃-60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與DNA模板結(jié)合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，從引物的5′端→3′端延伸，合成與模板互補(bǔ)的________。氫鍵單鏈DNA雙鏈DNA鏈第5頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1.用一定的_________切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個(gè)切口，露出____________。2.用_____________切斷目的基因，使其產(chǎn)生_________________?！?/p>

核心3.將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的______處，再加入適量___________，形成了一個(gè)重組

DNA分子（重組質(zhì)粒）限制酶黏性末端同一種限制酶的黏性末端切口DNA連接酶相同(二)基因表達(dá)載體的構(gòu)建第6頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一基因表達(dá)載體的構(gòu)建——核心質(zhì)粒DNA分子一個(gè)切口兩個(gè)黏性末端兩個(gè)切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子（重組質(zhì)粒）同一種限制酶

目的基因與運(yùn)載體的結(jié)合過(guò)程，實(shí)際上是不同來(lái)源的基因重組的過(guò)程。第7頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

科學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，經(jīng)過(guò)了許多復(fù)雜的過(guò)程和不懈的努力，才獲得成功。起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)沒(méi)有表達(dá)。然后在插入抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入啟動(dòng)子(抗蟲(chóng)基因首端)，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還是沒(méi)有抗蟲(chóng)能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入終止子(抗蟲(chóng)基因末端)，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲(chóng)能力。資料:第8頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一基因表達(dá)載體的組成：目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。a、目的基因b、啟動(dòng)子c、終止子d、標(biāo)記基因等第9頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞借鑒細(xì)菌或病毒侵染細(xì)胞的途徑。轉(zhuǎn)化——目的基因進(jìn)入_________內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持_____和_____的過(guò)程受體細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)第10頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一方法導(dǎo)入植物細(xì)胞導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞導(dǎo)入微生物細(xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法花粉管通道法——顯微注射法——Ca離子處理法(三)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞第11頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上農(nóng)桿菌導(dǎo)入植物細(xì)胞整合到受體細(xì)胞的染色體上目的基因的遺傳特性得以維持穩(wěn)定和表達(dá)1.農(nóng)桿菌特點(diǎn)：易感染雙子葉植物和裸子植物。Ti質(zhì)粒的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的染色體上2.轉(zhuǎn)化第12頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一1.下表關(guān)于基因工程中有關(guān)基因操作的名詞及對(duì)應(yīng)的內(nèi)容，正確的組合是 2、下列屬于獲取目的基因的方法的是()①利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成②從基因組文庫(kù)中提?、蹚氖荏w細(xì)胞中提取④利用PCR技術(shù)⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥第13頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一3.細(xì)菌的質(zhì)粒分子帶有一個(gè)抗菌素抗性基因，該抗性基因在基因工程中的主要作用是

A．提高受體細(xì)胞在自然環(huán)境中的耐藥性B．有利于對(duì)目的基因是否導(dǎo)入進(jìn)行檢測(cè)C．增加質(zhì)粒分子的分子量D．便于與外源基因連接4.

有關(guān)基因工程的敘述正確的是A．限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用B．重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的C．質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體D．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料第14頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一5.哪項(xiàng)不是基因表達(dá)載體的組成部分()A.啟動(dòng)子B.終止密碼

C.標(biāo)記基因D.目的基因6.下列哪項(xiàng)不是將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法()A．基因槍法B．顯微注射法

C.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法D．花粉管通道法第15頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一

胰島素是治療糖尿病的特效藥，長(zhǎng)期以來(lái)只能依靠從豬、牛等動(dòng)物的胰腺中提取，100Kg胰腺只能提取4-5g的胰島素，其產(chǎn)量之低和價(jià)格之高可想而知。假如讓你用基因工程的方法使大腸桿菌生產(chǎn)出人的胰島素，想一想，如何設(shè)計(jì)？

嘗試設(shè)計(jì)第16頁(yè)，共17頁(yè)，2023年，2月20日，星期一(四)目的基因的檢測(cè)與鑒定——檢查是否成功檢測(cè)—鑒定—①檢測(cè)轉(zhuǎn)基