枸杞多糖的提取與含量測定課件

枸杞多糖的提取與含量測定實驗目的1、掌握提取多糖的原理和方法；2、掌握多糖的純化原理及方法；3、掌握多糖含量測定的原理及方法。實驗原理多糖的提取方法生物活性多糖主要有真菌多糖、植物多糖、動物多糖等等3大類。多糖的提取首先要根據多糖的存在形式及提取部位，決定在提取之前是否要做預處理。動物多糖和微生物多糖多有脂質包圍，一般提取時需要加入丙酮、乙醚、乙醇或是乙酸乙酯的混合液進行回流脫脂，釋放多糖。植物多糖提取時應該注意一些含脂較高的根、莖、葉、花、果及種子類，在提取前應先用低極性的有機溶劑對原料進行脫脂預處理，目前多糖的提取方法主要有溶劑提取法、生物提取法、強化提取法等等。實驗原理

多糖的提取液一般濃度較低，需在提取后對提取液進行濃縮。濃縮的方法可根據性質確定，如對熱比較穩(wěn)定的多糖，可用加熱蒸發(fā)或減壓蒸出水分法；對于相對分子質量大的多糖可用超濾法。向多糖溶液中加入一定量的與水混溶的有機溶劑（如乙醇）可得到粗多糖的沉淀物。Sevag法Sevag法是自多糖中去除蛋白質的最緩和的方法，原理是利用蛋白質變性沉淀而多糖不沉淀出去蛋白質。將樣品提取液與Sevag試劑按照5:1的比例混合，劇烈震蕩后離心除去變性的蛋白質，反復多次至蛋白質除盡為止。該方法較為溫和，配合蛋白質水解酶消化法使用效果更佳。實驗原理蒽酮-硫酸比色法進行多糖的含量測定糖類在較高溫度下可被硫酸作用而脫水生成糠醛或羥甲基糠醛后，與蒽酮（C14H100）脫水縮合，形成糠醛的衍生物，成藍綠色。該物質在620nm處有最大吸收，在150ug/ml范圍內，其顏色深淺可與可溶性糖含量成正比。這一方法有很高的靈敏度，糖含量30ug左右就可進行測定，所以可作為微量測糖含量只用。一般樣品少的情況下，采用這一方法比較合適。實驗試劑儀器實驗試劑干燥枸杞子、葡萄糖標準溶液、蒽酮、濃硫酸、95%乙醇、無水乙醇、三氯甲烷‐正丁醇（4:1）。實驗儀器分析天平、托盤天平、離心機（大）、離心機（?。⑺″?、電爐、漩渦震蕩儀、真空烘箱、分光光度計、800ml燒杯、100ml燒杯、離心管、分液漏斗、50ml容量瓶、玻璃棒、量筒、加蓋試管若干。實驗內容標準曲線的繪制

取干燥試管6支，按下表數據配置一系列不同濃度的葡萄糖溶液。在620nm波長下以第一管為空白試驗，迅速測量吸光值，以葡萄糖含量（mg）為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪出標準曲線。實驗內容枸杞多糖的含量測定

精密稱定20mg多糖粗品，溶于50ml蒸餾水中，制成樣品液。

分別吸取0.5ml，1ml多糖溶液至試管中，加蒸餾水至總體積為1ml。冰浴中冷卻，再加入4ml蒽酮試劑，沸水浴中煮沸10min，取出后自來水冷卻，620nm比色，其他條件與作標準曲線同。測得吸光度值由標準曲線查出樣品液的糖含量。實驗數據記錄與處理標準曲線的繪制以下表格是不同濃度的標準葡萄糖溶液吸光度的實驗數據。即可得到如下標準曲線。實驗數據記錄與處理枸杞多糖的含量測定根據標準曲線可以查得枸杞多糖樣液吸光度的數值。樣液1含0.02367mg枸杞多糖，樣液2含0.04735mg枸杞多糖。實驗數據記錄與處理枸杞多糖的含量計算根據已經查得的數值，可以進行一下計算c（樣品1）=（0.02367mg/0.5ml）*50ml/21.4mg*100%

=11.06%c（樣品2）=（0.04735mg/1.0ml）*50ml/21.4mg*100%

=11.06%注意事項蒽酮-濃硫酸比色法的注意事項：該法的特點是幾乎可以測定所有的碳水化合物，所以蒽酮法測出的碳水化合物的含量，實際上是溶液中可溶性碳水化合物的總量。不同的糖類和蒽酮試劑顯色的深度不同，果糖最深，葡萄糖、半乳糖、甘露糖和五碳糖依次降低，因此測定糖的混合物的時候，常常因不同糖類的比例不同造成誤差，但是測定單一糖類則可以避免