抗體的應用及選擇

抗體的應用及選擇第1頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一凱基生物是專業(yè)從事生物試劑研發(fā)、生產、銷售和技術服務的國有公司凱基生物現(xiàn)具有四條產品線：生命科學通用工具庫、醫(yī)學研究工具庫、藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)工具庫、核質與核信號研究工具庫，五千余種產品，上萬種品種規(guī)格供客戶選擇第2頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一抗體(Ab):是B細胞受抗原刺激后，分化為漿細胞合成并分泌的一類能與相應抗原特異結合的球蛋白。第3頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一抗體的應用醫(yī)療領域：

診斷：

已知抗體查未知抗原；血型、乙肝、SARS、腫瘤相關抗原等已知抗原查未知抗體；HIV、傷寒、自身免疫病等

預防：

應急預防（破傷風，Rh不合的新生兒溶血等）

治療：

感染、抗移植排斥、抗炎、抗腫瘤科研：

westernblotELISAFACSIHCIP…第4頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一Westernblot

第5頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一Primaryantibody

選擇？第6頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一Secondaryantibody酶標二抗：辣根過氧化酶（HRP)堿性磷酸酶（AP)葡萄糖氧化酶（GOT)種屬性:兔(與一抗來源相同）來源：山羊（不能與抗原來源相同）第7頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一ELISA第8頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一與westernblot不同點二抗：必須能與抗原結合但是不能與一抗（包被抗體）結合抗原：小鼠一抗：兔來源二抗：不能是兔來源的第9頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一第10頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一第11頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一免疫組化第12頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一傳統(tǒng)方法第13頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一即用型快捷免疫組化

聚合物:辣根過氧化物酶標羊抗鼠、兔（一抗）堿性磷酸酶酶標抗鼠、兔（一抗）第14頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一免疫組織化學的應用

1.確定細胞類型2.確定細胞類型3.確定細胞類型4.確定細胞類型5.確定腫瘤分期6.尋找感染病因…..第15頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一FACS液流系統(tǒng)：將細胞單個壓入流動室激光發(fā)射器發(fā)出所需要的波長的激光前向散射光檢測器光學濾鏡側向散射光檢測器第16頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一目前流式儀可以檢測的類別細菌浮游生物紅細胞淋巴細胞中性粒細胞單核細胞DM：1um——15um第17頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一熒光標記法直接染色法：省時，一步染色特異性強可以同時進行多種顏色的染色間接染色法：熒光強度往往比較強熒光顏色可以隨時更換耗時非特異性染色干擾實驗結果，特別是陽性率低的時候。Biotin染色：特異性較強的熒光識別靈活選擇顏色只能使用一種帶生物素的抗體在全血中會有非特異性染色第18頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一熒光抗體的介紹用各種方法將單克隆抗體和流式儀能夠檢測到的熒光蛋白結合在一起就是流式操作中所用的熒光抗體第19頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一流式實驗流程介紹1，將熒光抗體和細胞一起培養(yǎng)2，抗體結合到細胞表面所對應的特殊抗原上3，過流式細胞儀的時候，在激發(fā)光的照射下，抗體的熒光部分發(fā)出熒光4，抗體發(fā)出的發(fā)射光被流式儀所收集第20頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一根據(jù)目前可見的三種激發(fā)光分藍色激發(fā)光405nm綠色激發(fā)光488nm紅色激發(fā)光635nm第21頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一第22頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一細胞結構細胞大小細胞粒度細胞表面面積核漿比例DNA含量與細胞周期RNA含量蛋白質含量染色體分析細胞功能細胞表面/胞漿/核的特異性抗原細胞活性細胞內細胞因子酶活性激素結合位點細胞受體細胞凋亡在上述信號基礎上的細胞分選流式細胞術的細胞學應用第23頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一流式細胞儀的臨床應用HIV免疫分型，CD4絕對計數(shù)白血病和淋巴瘤的免疫分型腫瘤的細胞周期和倍體分析網(wǎng)織紅細胞計數(shù)細胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測干細胞計數(shù)殘量白血病細胞檢查HLA-B27檢查血小板功能及相關疾病第24頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一流式細胞儀的科研應用免疫功能研究癌癥病人的多藥耐藥性細胞動力學功能研究動物性別篩選海洋與環(huán)境微生物分析染色體分選第25頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一AnnexinV-FITC/PI雙染色法第26頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一

B淋巴細胞檢測淋巴細胞B淋巴細胞第27頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一Dynabeads（chipisolationactivation)第28頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一第29頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一第30頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一抗體的選擇一抗：（1）確定抗體的名字，注意中英文名字、它名、亞型等信息（2）確定你的實驗類型，ELISA，WB，IHC，ICC，還是FACS。（3）確定實驗樣本的種屬，Human，Mouse，還是Rat二抗（1）種屬來源（2）標記物的選擇第31頁，共34頁，2023年，2月20日，星期一保存注意事項收到抗體后12000rpm離心3min后再打開管蓋進行分