甲肝疫苗研制與應(yīng)用(187)

一、甲型肝炎及甲型肝炎病毒二、甲肝疫苗的研制三、甲肝疫苗的應(yīng)用四、甲肝疫苗的研究趨勢(shì)和展望目前一頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)甲型肝炎(簡(jiǎn)稱甲肝)是一種人類普遍易感的高發(fā)病率的腸道傳染病，由于其流行的普遍性和嚴(yán)重性，已成為一個(gè)世界性公共衛(wèi)生問(wèn)題。在病毒性肝炎中發(fā)病率及感染率最高。即使在低發(fā)區(qū)和非流行時(shí)，一般都占急性病毒性肝炎的50％左右。甲肝的流行時(shí)有發(fā)生。甲型肝炎嚴(yán)重危害人類健康。一、甲型肝炎及甲型肝炎病毒目前二頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)20世紀(jì)90年代以前，全國(guó)各地甲肝大小流行不斷，年發(fā)病人數(shù)逾百萬(wàn)，農(nóng)村中成年人85%以上受感染，1988年上海發(fā)生的甲肝大流行發(fā)病人數(shù)達(dá)32萬(wàn)，我國(guó)是世界上甲肝流行最嚴(yán)重的國(guó)家之一，嚴(yán)重危害人民健康。預(yù)防和控制甲肝最有力的手段---研究甲肝疫苗。目前三頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)（一）、甲肝流行病學(xué)1、傳染源傳染源主要為病人和病毒攜帶者的糞便。1)、病人甲肝潛伏期為28天（15-50天）。病人潛伏期和發(fā)病后2-3周內(nèi)的糞便和血液有傳染性。發(fā)病前4天至發(fā)病后4-6天傳染性最強(qiáng)。2)、病毒攜帶者甲肝亞臨床或隱性感染者作為傳染源在流行病學(xué)上很有意義。目前四頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)2、傳播途徑甲肝病毒的傳播主要是通過(guò)糞--口途徑的人人傳播。受感染者的糞便直接或間接的污染水源或食物在傳播中起主要作用。也可經(jīng)血液（注射或輸血)途徑傳播。甲肝的流行通常發(fā)生在幼兒園、學(xué)校、監(jiān)獄和其他人口密度較高的群體。目前五頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

3、易感人群人群對(duì)HAV有普遍的易感性，感染后可產(chǎn)生穩(wěn)固而持久的免疫力。在發(fā)展中國(guó)家，兒童期已大部分獲得感染。發(fā)達(dá)國(guó)家，由于衛(wèi)生條件及其它措施的改善，發(fā)病率逐漸降低，發(fā)病高峰后移至青壯年。由此也導(dǎo)致了人群抗-HAV水平的下降和易感人群的增加。目前六頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

4.流行特征甲肝可呈集體暴發(fā)流行(通常發(fā)生在幼兒園、學(xué)校、監(jiān)獄和其他人口密度較高的群體)。多發(fā)生于秋冬季。發(fā)達(dá)國(guó)家季節(jié)性消失，呈常年散在發(fā)生。國(guó)內(nèi)外曾多次報(bào)道，污染水源或水產(chǎn)品而引起甲肝暴發(fā)流行。目前七頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

5、感染類型感染甲肝后患者可表現(xiàn)為三種不同感染類型1)顯性肝炎2)亞臨床型肝炎3)隱性感染甲型肝炎其隱性感染者較多，呈急性發(fā)病者較多，伴有黃疸癥狀和全身癥狀明顯。亞臨床感染和隱性感染是造成甲肝流行的一個(gè)必要條件。目前八頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)（二）、甲肝實(shí)驗(yàn)室診斷1、肝功能改變2、血漿白蛋白降低3、免疫學(xué)檢測(cè)1)、在糞便、肝組織、膽汁、血液中能直接證明有HAV。2)、檢測(cè)甲肝IgM抗體，診斷是否甲型肝炎的感染。目前九頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

二、甲肝疫苗的研制甲肝疫苗研究和使用主要依據(jù)有:1、HAV只有一個(gè)血清型。2、感染后可獲得牢固的免疫力。3、HAV可以在細(xì)胞培養(yǎng)繁殖，提供了病毒的來(lái)源。4、有用于檢測(cè)疫苗安全、效力試驗(yàn)及評(píng)價(jià)減毒株減毒水平的動(dòng)物模型。目前十頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)為何研發(fā)減毒活疫苗1、減毒活疫苗的優(yōu)點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)基于免疫學(xué)原理2、部分病毒性傳染病滅活疫苗無(wú)效3、活疫苗的缺點(diǎn)目前十一頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)減毒活疫苗的免疫學(xué)基礎(chǔ)細(xì)胞免疫：直接由細(xì)胞如NK細(xì)胞和T細(xì)胞執(zhí)行效力功能。體液免疫：由體液介導(dǎo)，實(shí)際上包括所有液相分子?？贵w細(xì)胞因子趨化因子補(bǔ)體常被錯(cuò)誤地理解為僅僅是抗體免疫。體液免疫和細(xì)胞免疫兩者是重疊的。目前十二頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)減毒活疫苗和滅活疫苗主要區(qū)別減毒活疫苗MHCI類和MHCII類分子途徑都能提呈抗原，產(chǎn)生體液、細(xì)胞免疫。滅活疫苗主要通過(guò)MHCII類分子途徑產(chǎn)生提呈抗原，產(chǎn)生體液免疫。細(xì)胞外抗原主要刺激CD4分子減毒活疫苗的免疫學(xué)基礎(chǔ)目前十三頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)比較滅活疫苗活疫苗特點(diǎn)用滅活的病原微生物制成在制備過(guò)程中，其滅活步驟可殺滅任何可能污染的其它生物學(xué)因子疫苗中殘存滅活劑、防腐劑不能產(chǎn)生分泌型抗體，可能產(chǎn)生毒性或潛在的有害免疫反應(yīng)免疫缺陷者接種安全用弱毒或無(wú)毒活病原微生物制成無(wú)滅活步驟，疫苗中可能污染危險(xiǎn)因子可采取模擬自然感染的途徑免疫，疫苗進(jìn)入機(jī)體內(nèi)可有一定增殖能產(chǎn)生分泌型抗體疫苗在機(jī)體內(nèi)有毒力恢復(fù)的潛在危險(xiǎn)性有可能形成潛在感染和傳播滅活疫苗與活疫苗的比較目前十四頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)滅活疫苗與活疫苗的比較比較滅活疫苗活疫苗保存接種研制效果成本疫苗較穩(wěn)定，易于保存和運(yùn)輸，有效期較長(zhǎng)需多次免疫，接種劑量大開(kāi)發(fā)周期相對(duì)短，相對(duì)簡(jiǎn)單效果差，維持時(shí)間短，需加入佐劑生產(chǎn)成本高，純化抗原工藝復(fù)雜疫苗不穩(wěn)定，嚴(yán)格冷鏈運(yùn)輸，效期相對(duì)較短一般只需一次免疫，接種劑量小減毒株篩選時(shí)間長(zhǎng)

免疫效果鞏固，維持時(shí)間長(zhǎng)生產(chǎn)成本低，常需制成凍干制劑目前十五頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)滅活疫苗致免疫增強(qiáng)作用接種滅活麻疹疫苗后可預(yù)防疾病，但幾年后接種者感染自然流行的麻疹后會(huì)產(chǎn)生非典型疾病，并伴有增強(qiáng)的全身癥狀和肺炎。原因是：用甲醛滅活麻疹病毒時(shí)破壞了F蛋白(融合蛋白)，從而使F誘生血溶抑制抗體的能力下降，但不破壞H蛋白（血凝素）誘生抗體的能力，當(dāng)血凝素抗體下降到病毒能再感染時(shí)，由于機(jī)體無(wú)抗F蛋白抗體，麻疹病毒的復(fù)制位點(diǎn)發(fā)生改變，引起嚴(yán)重的疾病?，F(xiàn)在麻疹疫苗都使用減毒活疫苗，避免由于滅活疫苗的使用而引起的免疫增強(qiáng)作用。麻疹目前十六頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用呼吸道合胞病毒在60年代，用福爾馬林滅活呼吸道合胞病毒疫苗免疫嬰幼兒，發(fā)現(xiàn)接種者在隨后的呼吸道合胞病毒感染時(shí)發(fā)生嚴(yán)重下呼吸道疾病的機(jī)率大于其他嬰幼兒。原因可能1、是由于該疫苗是肌肉接種，不能對(duì)呼吸道產(chǎn)生足夠的局部IgA抗體，使接種者的免疫系統(tǒng)不同部分之間或內(nèi)部呈現(xiàn)不平衡狀態(tài)，這種不平衡狀態(tài)可能更容易感染病毒，并使疾病加強(qiáng)。目前十七頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)原因可能是2、疫苗接種后誘導(dǎo)高水平的CD4+細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)CD8+細(xì)胞，導(dǎo)致細(xì)胞免疫的不平衡，而且CD4+細(xì)胞中的Th1和Th2亞群比率倒置，使Th2亞群點(diǎn)的炎癥加劇，造成更嚴(yán)重的支氣管炎和肺炎。滅活疫苗的免疫增強(qiáng)作用呼吸道合胞病毒目前十八頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

1、甲肝滅活疫苗國(guó)外主要研制和發(fā)展的是滅活疫苗。1995年SmithKline(史克)公司的HM175株和Merck(墨克)公司的CR326F株所制備的甲肝滅活疫苗經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)后，兒童甲肝疫苗策略逐步實(shí)施－最后步驟：全國(guó)兒童甲肝常規(guī)接種，創(chuàng)造最終消滅本土家肝病毒傳播基礎(chǔ)。美國(guó)甲肝流行模式在疫苗使用前和疫苗時(shí)代有顯著的不同。1988年---1994年，年發(fā)病率超過(guò)20/10萬(wàn)。2004年，年發(fā)病率2.7/10萬(wàn)。目前十九頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)法國(guó)巴斯德研究所的GBM株甲肝滅活疫苗和瑞士血清學(xué)研究所的RG-SB毒株，已批準(zhǔn)上市。

我國(guó)唐山怡安生物－北大科興和昆明生物研究所研制的TZ84株、Lu-8株甲肝滅活疫苗，2003年被批準(zhǔn)生產(chǎn)上市。云南沃森、上?；萆㈤L(zhǎng)春百克等公司甲肝滅活疫苗研制處在不同階段。

目前二十頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

2、甲肝減毒活疫苗1）、國(guó)外甲肝減毒活疫苗研究國(guó)外以美國(guó)Merk公司為代表的甲肝減毒活疫苗研究領(lǐng)域，目前仍處于早期實(shí)驗(yàn)室研究及小量人體觀察階段，累計(jì)觀察人數(shù)不足百人。目前二十一頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)ResultsofTrialsofFandF’VaccinesinAdultHumanVolunteers

doseNo.withofvaccinevirusNo.ALTHAVAB

(TCID50)subjectselevationHAVABM

F(105.6) 93/9a9/99/9

F(105.6) 11 2/11b6/118/11F(104.6) 9 3/9c 6/9 6/9 F(103.6) 8 1/8d 2/8 2/8

F’(106.3)11 0/11 6/1110/11

CR326目前二十二頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)2)、國(guó)內(nèi)甲肝減毒活疫苗研制該項(xiàng)目為國(guó)家“七五”、“八五”和“九五”重大科技攻關(guān)項(xiàng)目，具有我國(guó)自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的科技成果。L-A-1株：黑龍江省疾病控制中心上海市疾病控制中心長(zhǎng)春生物制品研究所H2株：浙江醫(yī)學(xué)科學(xué)院昆明生物研究所目前二十三頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)甲型肝炎病毒L-A-1疫苗株選育1、減毒過(guò)程和方法2、減毒株的減毒標(biāo)志3、動(dòng)物模型系列試驗(yàn)4、攻擊保護(hù)試驗(yàn)5、減毒株的傳代及鑒定6、疫苗制備7、血清中和抗體測(cè)定8、實(shí)驗(yàn)性疫苗接種絨猴觀察9、甲肝疫苗保存穩(wěn)定性試驗(yàn)等目前二十四頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)1985年－1991年臨床前研究Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期臨床研究中試和萬(wàn)人臨床觀察和免疫效果研究1992年獲得新藥證書(shū)、試生產(chǎn)文號(hào)1996年獲生產(chǎn)文號(hào)

目前二十五頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)甲型肝炎減毒活疫苗（L-A-1)的臨床

反應(yīng)與免疫效果觀察（萬(wàn)人）

三批疫苗:901,9092,903觀察接種：12000人，二個(gè)月隨訪。接種對(duì)象分布：4--5歲：1054人6－3歲：8216人14－8歲：1084人19歲以上：408人500人精細(xì)觀察

目前二十六頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)●局部及全身反應(yīng)：弱反應(yīng)：0.94%－2.4%中反應(yīng)：0.95%－1.8%血清肝酶變化：無(wú)肝酶升高現(xiàn)象●疫苗免疫后抗體應(yīng)答：12周：97.5%●受試者糞便HAAg檢測(cè)及HAV分離：HAAg檢測(cè)：陰性HAV增殖試驗(yàn)：陰性病毒擴(kuò)散能力非常有限，對(duì)密切接觸者水平傳播可能性很小?！褚话惴磻?yīng)觀察及流行病學(xué)效果考察二年不同地區(qū)、不同年齡組隨訪觀察，未見(jiàn)甲肝發(fā)病者。目前二十七頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前二十八頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

凍干甲肝減毒活疫苗的研制

液體劑型疫苗因無(wú)有效保護(hù)劑，需－20℃以下低溫凍結(jié)貯存、冷鏈運(yùn)輸，2－8℃有效期僅為3－5個(gè)月，對(duì)疫苗的推廣應(yīng)用和接種效果及開(kāi)發(fā)國(guó)際市場(chǎng)等帶來(lái)了難以克服的困難。甲肝病毒的某些生物學(xué)特性為類似于脊髓灰質(zhì)炎病毒、輪狀病毒等其它腸道病毒屬，皆為無(wú)脂蛋白包膜的微小RNA病毒，長(zhǎng)期以來(lái)，國(guó)內(nèi)外一直未能解決此類病毒冷凍干燥問(wèn)題，冷凍干燥后極易失活。如脊髓灰質(zhì)炎疫苗、輪狀病毒疫苗等至今尚未解決冷凍干燥問(wèn)題。

目前二十九頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)1、首創(chuàng)研制成功凍干甲型肝炎減毒活疫苗及其保護(hù)劑。2、完成凍干甲肝疫苗及其保護(hù)劑工業(yè)化生產(chǎn)工藝研究。３、2001年首家獲國(guó)家藥品監(jiān)督管理局頒發(fā)的新藥證書(shū)及生產(chǎn)文號(hào)。4、獲國(guó)家發(fā)明專利及國(guó)際專利（PCT）。目前三十頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

表1凍干甲肝減毒活疫苗接種后反應(yīng)觀察觀察局部反應(yīng)全身反應(yīng)（%）分組人數(shù)(紅、腫、熱、痛)無(wú)弱中強(qiáng)

A1130 99.11(112)0.88(1)0(0)0(0) B1140 99.12(113)0.87(1)0(0)0(0)C108098.15(106)0.00(0)0(0)0(0) D1160 98.28(114)0.86(1)0(0)0(0) Y113098.23(111)0.88(1)0(0) 0(0) 結(jié)果表明：所有志愿者均無(wú)有關(guān)的局部及全身臨床反應(yīng)。目前三十一頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

表2凍干甲肝減毒活疫苗接種后SGPT變化情況

0月1月2月分組檢查人數(shù)異常人數(shù)檢查人數(shù)異常人數(shù)檢查人數(shù)異常人數(shù)

A 1130113 0 1130 B 114 0 114 0 1140 C 108 0 108 0 1080 D 116 0 116 0 1060

Y 113 0113 0 1000

SGPT采用改良賴氏法檢測(cè),結(jié)果≥25u/ml為異常升高。目前三十二頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)表3凍干甲肝減毒活疫苗一針程序免后的抗體水平免后人數(shù)陽(yáng)性數(shù)陽(yáng)性率抗體水平mIU/ml時(shí)間(%)<200200-1000>1000平均高值低值一月11311198.26029227426719137二月99991004639145054028125目前三十三頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)表4凍干甲肝減毒活疫苗免疫效果及免疫策略研究分組疫苗滴度免疫抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率%(月)抗體水平mIU/ml(月)抗體水平

CCID50/ml程序(月)12671267增長(zhǎng)(倍)Y6.5一針98.297.5742505A6.50,198.2100121345128.5B6.50,6NDND86.610042428236.7C6.00,194.810084215825.7D6.00,6NDND5510032720016.1結(jié)果表明：一針免疫抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)95％以上，二針免疫抗體陽(yáng)率均達(dá)100％

目前三十四頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

凍干甲肝減毒活疫苗與液體甲肝減毒活疫苗穩(wěn)定性的比較溫度穩(wěn)定性凍干甲肝疫苗液體甲肝疫苗2-8℃18個(gè)月3－5個(gè)月22－25℃18周1周37℃21天2天－20℃以下26個(gè)月12個(gè)月目前三十五頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前三十六頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)目前三十七頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)2006年開(kāi)始規(guī)模生產(chǎn)凍干甲肝減毒活疫苗生產(chǎn)情況及國(guó)家批簽發(fā)情況2006年2007年批簽發(fā)２３批25批合格證２３批25批疫苗生產(chǎn)周期6個(gè)月目前三十八頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)長(zhǎng)春所甲肝疫苗生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)單一品種國(guó)內(nèi)外最大甲肝疫苗研發(fā)和生產(chǎn)基地，生產(chǎn)用設(shè)施、設(shè)備技術(shù)含量高，適宜規(guī)?；?、工業(yè)化生產(chǎn)、疫苗生產(chǎn)過(guò)程可控性強(qiáng)、生產(chǎn)穩(wěn)定。疫苗品質(zhì)優(yōu)勢(shì)采用獨(dú)特生產(chǎn)工藝和獨(dú)家使用的疫苗穩(wěn)定劑，獲國(guó)家技術(shù)發(fā)明二等獎(jiǎng)、國(guó)家發(fā)明專利、美國(guó)、歐盟專利，疫苗的安全性高。20097年7月17日國(guó)家藥典委員會(huì)病毒專業(yè)委員會(huì)企業(yè)注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)會(huì)，中檢所報(bào)告的結(jié)果證明了長(zhǎng)春所疫苗的優(yōu)勢(shì)。目前三十九頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)三、甲肝減毒活疫苗的應(yīng)用自1992年甲肝減毒活疫苗在全國(guó)范圍內(nèi)逐步推廣應(yīng)用，結(jié)果表明：甲肝減毒活疫苗具有非常良好的安全性、免疫原性和顯著的流行病學(xué)保護(hù)效果。目前四十頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)甲肝減毒活疫苗（L-A-1株）免疫持久性●免后６周抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率及GMT：陽(yáng)轉(zhuǎn)率：97.2%GMT:5.1±2.3●免后２－５年抗體陽(yáng)性率：抗體陽(yáng)性率%GMT２年93.3３年88.82.4±2.1４年82.8５年80.71.8±2.1目前四十一頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)HBsAg陽(yáng)性者接種甲肝減毒活疫苗

的反應(yīng)及免疫效果●局部及全身反應(yīng)除個(gè)別由弱中反應(yīng)外，無(wú)其他不良反應(yīng)?！窀蚊窼GPT檢查對(duì)照組無(wú)一肝酶升高，觀察組肝酶值與免前相比，無(wú)有臨床意的改變?！窨贵w應(yīng)答抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率(W％)GMT(W)24848觀察組：181人44.584.293.04.9±2.15.8±2.5對(duì)照組：163人43.083.794.75.0±2.45.8±2.9目前四十二頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)

兒童中進(jìn)行隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，各組20余萬(wàn)人。接種一劑規(guī)范化滴度疫苗。第一年觀察中：對(duì)照組發(fā)病38例，接種組未發(fā)現(xiàn)一例。三年觀察期滿：對(duì)照組發(fā)病115例，接種組發(fā)病３例，保護(hù)效果達(dá)97％。

目前四十三頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)H2與L-A-1兩組保護(hù)率一致，可見(jiàn)兩株活疫苗預(yù)防效果極佳。史克公司甲肝滅活疫苗在泰國(guó)４萬(wàn)名小學(xué)生進(jìn)行研究，有效率為92%。我國(guó)研制的甲肝活疫苗同國(guó)外報(bào)道的史克滅活疫苗相比，預(yù)防效果毫無(wú)遜色。目前四十四頁(yè)\總數(shù)四十八頁(yè)\編于十六點(diǎn)甲型肝炎減毒活疫苗接種后抗體水平疫苗株劑量接種三個(gè)月接種六個(gè)月TCID50檢測(cè)