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DB51四川省市場監(jiān)督管理局發(fā)布 鱘魚類志賀鄰單胞菌病診斷技術(shù)規(guī)程2規(guī)范性引用文件GB/T4789.28-2013食品安全國家標準食品微生物學檢驗培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量GB/T6682-2008分析實驗室用水規(guī)格和實GB/T18652-2002致病性嗜水氣單胞菌檢驗方法SC/T7013-2008水生動物產(chǎn)地檢SC/T7014-2006水生動物檢鱘魚類志賀鄰單胞菌病Plesiomonasshigelloidesfors檢驗中所需試劑、染色液與培養(yǎng)基的配制按照GB/T4789.28、GB/T18652和SC/T7014規(guī)定執(zhí)4.2水9.1革蘭氏染色9.2生理生化試驗9.2.2氧化酶試驗9.2.3吲哚試驗按SC/T7014表2的吲哚(靛基質(zhì))試驗的規(guī)定執(zhí)行。培養(yǎng)基變紅為陽性;不變紅為將待檢菌穿刺接種于糖、醇類發(fā)酵試驗培養(yǎng)基(A.228℃培養(yǎng)24h后觀察。培養(yǎng)基9.2.5運動性試驗酚氯仿法、高鹽法或采用商用試劑盒提取細菌基因組D29.3.3瓊脂糖凝膠電泳參照物作對照。120V電泳約20min-40min,當溴酚藍到達底部時停止。于紫外光下觀察,并在長波9.3.4PCR擴增產(chǎn)物純化、測序、序列比對9.3.4.1PCR擴增產(chǎn)物純化按每0.1g瓊脂糖凝膠加0.1mL酚,將酚加入9.3.3離心10min,棄上清。將沉淀的DNA溶于適當體積9.3.4.2PCR擴增產(chǎn)物測序與同源性分析+--+++測定的16SrRNA基因序列與附錄B所列的基因序列比較,同源性達A.2糖、醇類發(fā)酵培養(yǎng)基蒸水定容至1L,室溫保存。使用時,配成1×TAE電A.4溴酚藍指示劑溶液6×上樣緩沖液將溴酚藍100mg,加雙蒸水5mL,在室溫下過夜。待溶解后再稱取蔗糖25g,將24體積的氯仿和1體積的異戊AAGTGGTAAGCGCCCTCCCGAAGGTTAAGCTACCTACTTCTTTTGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATTCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCATGGAGTCGAGTTGCAGACTCCAATCCGGACTATACTTTATGGGATTCGCTCACTATCGCTAGCTTGCCGCCCTTTGTATATGCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCTACTCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTATCACCGGCAGTCTCCTTTGAGTTCCCGACCGAATCGCTGGCAACAAAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATTTCACAACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAGAGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCTCTGGATGTCAAGAGTAGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCATCGAATTAAACCACATGCTCCATGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCGATTTAACGCGTTAGCTCCGGAAGCCTCAAGGGCACAACCTCCAAATCGACATCGTTTACAGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCTGAGCGTCAGTCTTTGTCCAGGGGGCCGCCTTCGCCACCGGTATTCCTCCAGATCTCTACGCATTTCACCGCTACACCTGGAATCCCCCTCTACAAGACTCTAGCTTGCCAGTTTCAAATGCAGTTCCCAAGTTGAGCTCGGGGATTTCACATCTGACTTAACAAACCGTGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTCCGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGGAGTTAGCCGGTGCTGCGAGTAACGTCAATGCCACTAGGTATTAACTAGTGACCCTTCCTCCCCGCTGAAAGTGCTTTACAACCCGAAGGCCTTCTTCAGCGGCATGGCTGCATCAGGCTTGCGCCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTGTGACTGGTCATTCTCTCAAACCAGTTAGAGATCGTCGCCTTGGTGAGCCATTACCTCACCAACTAGCTAATCCCACCTGGGTTGATAGCATGAGGTCCGAAGAGCC

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