常用幾種蔬菜農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的概述及比較

常用幾種蔬菜農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的概述及比較摘要：著重概述了色譜檢測法、酶抑制檢測法、化學(xué)試劑速測法、酶聯(lián)免疫法等四種常用的蔬菜農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)的原理、檢測方法等，并將幾種檢測方法進(jìn)行了比較。前言目前蔬菜農(nóng)藥殘留的檢測方法有色譜法和速測法兩大類。色譜法是農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留定量、定性精確檢測的方法，一般能檢測到痕量級(10-9-10-12)，用于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全的仲裁和鑒定；速測法主要用于農(nóng)藥殘留的定性分析，一般能檢測到2-5ppm即10-6，可防止農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)殘過高引起急性中毒事故的發(fā)生。每種檢測方法都各有優(yōu)缺點。1色普法1.1測項目與有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)要求色譜檢測法根據(jù)不同檢測類別、檢測項數(shù)、參照標(biāo)準(zhǔn)各不相同。具體如下表：檢測類別檢測項數(shù): 不得檢出項檢測范圍參照標(biāo)準(zhǔn)馬拉硫磷對硫磷甲拌磷甲胺磷久效磷氧化樂果克百威涕滅威W0.05-20.0mg/kgGB18406.1-2001無公害蔬菜41無公害水果 22拉硫磷對硫磷甲拌磷甲胺磷久效磷氧化樂果克百威甲基對硫磷<0.02-2.0mg/kgGB18406.1-2001無公害糧食 8無公害食用菌2殺蟲瞇、、、W0.02-0.5mg/kgDB32T/343.2-1999DB32T/343.2-1999六八八滴滴涕八八八W0.1mg/kg（鮮）八八八W0.2mg/kg（干）滴滴涕＜0.1mg/kg無公害植物油5敵敵畏甲拌磷甲胺磷氧化樂果涕滅威均不得檢出DB32T/343.2-19991.2主要儀器1.2.1氣相色譜儀色譜法是一種分離技術(shù)，原理是將混合物各組分在經(jīng)過一個固定相和流動相兩相組系時，由于各組分在性質(zhì)上的差異，在兩項中具有不同的分配系數(shù)；當(dāng)兩項做相對運動時，各組分隨流動相一起流動，并在兩項中進(jìn)行反復(fù)多次的分配，是各組分最終分離。氣相色譜法是色譜法中的一種，，已被用于許多領(lǐng)域中，成為一種簡易、快速、高效和靈敏的現(xiàn)代分析方法。檢測器是測量氣流中不同組分及其含量的敏感器，待測的各組分通過檢測器按其化學(xué)特征，轉(zhuǎn)換成易于測量的電信號，經(jīng)放大后進(jìn)行定性定量。檢測有機(jī)氯化合物，如ECD主要用于含鹵代烴的農(nóng)藥殘留檢測，檢測器靈敏度為W0.008pg/s的六氯化苯；FPD主要用于含硫、磷的農(nóng)藥殘留檢測，檢測器對硫的靈敏度為W20pg/s的十二烷基硫醇，對磷的靈敏度為W0.9pg/s的磷酸丁酸酯。1.2.2高效液相色譜是近年來發(fā)展起來的一種分離檢測技術(shù)。與氣相色譜法相比，更適用于分析高沸點，難揮發(fā)，熱穩(wěn)定性差，分子量較大的液體化合物。對于呋喃丹、西維因、滅害威等氨基甲酸酯類農(nóng)藥的測定以及利谷隆、滅草隆等取代脲類除草劑的測定用高效液相色譜。2農(nóng)藥殘留速測法2.1酶抑制法2.1.1酶抑制檢測法的原理在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶催化水解的功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。原理結(jié)構(gòu)圖：乙酰膽堿酯酶（AchE）+有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥-酶活性被抑制乙酰膽堿酯酶（AchE）+擬除蟲菊酯類農(nóng)藥-酶活性不被抑制活性被抑制-含有對神經(jīng)有害物質(zhì)乙酰膽堿酯酶（AchE）+樣本活性不被抑制-不含對神經(jīng)有害物質(zhì)2.1.2檢測步驟：取2g樣本，擦去表面泥水，切碎（非葉菜類取4g）I加20ml緩沖液，震蕩2-3分鐘I倒出提取液，靜止5分鐘I于比色杯內(nèi)加入50ul酶3ml樣本提取液50ul顯色劑I混勻后于37-41°C下放置30分鐘I50ul底物，混合后于412nm波長下比色I(xiàn)抑制率（%）=（AAc-AAs）/△AsX100%△Ac:對照組3分鐘后與3分鐘前吸光度之差△As:樣本3分鐘與3分鐘前吸光度之差2.1.3結(jié)果判定抑制率V70%，基本上不存在農(nóng)藥殘留；抑制率370%，肯定存在有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥。抑制率一般在一10%?110%之間，一旦檢測結(jié)果超出此范圍，即說明操作過程中有失誤的地方，需要重新檢測。2.2化學(xué)試劑速測法2.2.1化學(xué)試劑速測法檢測原理本研究成果首先是研制了有強催化作用的金屬離子催化劑，使各類有機(jī)磷農(nóng)藥（磷酸酯、一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酰胺）在催化作用下水解為磷酸與醇。強催化劑有機(jī)磷農(nóng)藥（Ops） 磷酸+醇（硫醇、胺、酚等）（即檢測液B）其二是研究了靈敏度較高的紫色檢測液A，使有機(jī)磷水解產(chǎn)物與檢液A反應(yīng)，使檢測液A的紫紅色褪去變成無色。2.2.2檢測步聚第一步取純凈水（蒸餾水、潔凈水）3-4毫升，約為包裝盒內(nèi)塑料測試盆中1/5處；第二步取需測蔬菜上帶柄舒展葉片2-3片；第三步取吸管吸取盆中水反復(fù)沖洗葉面；第四步用另一吸管吸取三角瓶中紫紅色液體，滴入盆中兩滴，混勻；再將塑料瓶內(nèi)黃色液體滴入盆中四滴，混勻后靜置五到十分鐘，觀察顏色變化。2.2.3結(jié)果判斷如果液體褪色則表示有機(jī)磷農(nóng)藥殘留超量，不能食用。重復(fù)測定2至3次。3酶聯(lián)免疫法（又稱免疫生測法）（英文簡稱ELISA）3.1酶聯(lián)免疫法檢測原理該方法利用化學(xué)物質(zhì)在動物體內(nèi)產(chǎn)生免疫抗體的原理，將小分子農(nóng)藥化合物與大分子生物物質(zhì)結(jié)合成大分子物質(zhì)，并使之在動物體內(nèi)產(chǎn)生抗體，對抗體篩選制成試劑盒，通過抗原、抗體之間發(fā)生的酶聯(lián)免疫反應(yīng)，利用比色來確定農(nóng)藥的殘留量。市場上有據(jù)此原理制成的ELISA試劑盒。3.2酶聯(lián)免疫分析法的操作程序酶聯(lián)免疫法是迄今為止，農(nóng)藥殘留免疫檢測中應(yīng)用最廣泛的一種免疫分析方法。其中基于競爭吸附的ELISA法成為農(nóng)藥殘留檢測中的首選方法。ELISA法有抗體包被直接競爭法（E-H法）、抗原直接競爭法（E-Ab法）和間接競爭抑制法。3.2.1抗體包被直接競爭法（E-H法）是將純化的抗體吸附到酶聯(lián)板上，加入酶標(biāo)記的農(nóng)藥和待測農(nóng)藥樣品，酶標(biāo)記農(nóng)藥和樣品中同一種未標(biāo)記農(nóng)藥與抗體進(jìn)行競爭結(jié)合。通過洗滌去除游離的部分（包括酶標(biāo)記和未標(biāo)記的）后，抗體上結(jié)合的酶標(biāo)記農(nóng)藥量與樣品中待測農(nóng)藥的含量成反比。加入酶的底物，酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)，經(jīng)比色測定對待測農(nóng)藥進(jìn)行定性定量檢測。3.2.2抗原包被直接競爭法（E-Ab法）是將人工抗原包被到酶標(biāo)板上，加入酶標(biāo)記的抗體和待測農(nóng)藥樣品，競爭性結(jié)合反應(yīng)后洗滌，反應(yīng)板上只留下與包被抗原結(jié)合的酶標(biāo)抗體，其結(jié)合量與樣品中同種待測農(nóng)藥量成反比。同樣，加入酶的底物，加入酶的底物，產(chǎn)生有色物質(zhì)經(jīng)比色法對待測農(nóng)藥進(jìn)行定性定量測定。3.2.3間接競爭ELISA法是用人工抗原（包被原）包被酶反應(yīng)板后加入抗血清和待測農(nóng)藥進(jìn)行競爭性結(jié)合反應(yīng)，洗滌反應(yīng)板，板上只留下與包被原結(jié)合的抗體（第一抗體）再加入酶標(biāo)記的第二抗體，與第一抗體進(jìn)行選擇性結(jié)合，洗滌后加入酶的底物。酶催化反應(yīng)的產(chǎn)物量與被結(jié)合的第一抗體和酶標(biāo)第二抗體量成正比，與待測樣品中相應(yīng)的農(nóng)藥量成反比。4幾種農(nóng)藥殘留檢測方法的比較快速檢測的最低檢出濃度、最高允許殘留限量（MRL）、引起中毒的殘留量、氣相色譜等儀器最低檢出濃度之間的關(guān)系可以用一個簡圖來表示

氣相色譜等儀器最低檢出濃度引起中毒的殘留濃度速測法最低檢出濃度國家規(guī)定的殘留限量按照色譜法、酶抑制法、化學(xué)試劑法及酶聯(lián)免疫法四種檢測方法的原理、特點及成本等差異可作如下的比較:氣相色譜等儀器最低檢出濃度引起中毒的殘留濃度速測法最低檢出濃度國家規(guī)定的殘留限量方法 檢測殘留名稱 農(nóng)藥范圍酶 有機(jī)磷、氨方法 檢測殘留名稱 農(nóng)藥范圍酶 有機(jī)磷、氨抑 基甲酸酯類制法化學(xué)試劑速測有機(jī)磷類法（速測靈）對農(nóng)殘定性分析，精確度低葉菜、瓜果類施用檢測一個樣品規(guī)模蔬菜，操作簡便、快速，一名技農(nóng)藥較多的蔬菜、需要1.5—2萬生產(chǎn)基地術(shù)人員30分鐘內(nèi)可檢5-6個水果新產(chǎn)品，可用元，儀器成本農(nóng)貿(mào)交易樣本，但對酶活性要求高于復(fù)檢、混合樣檢測在2萬元左右批發(fā)市場對果蔬等表皮有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行葉菜、瓜果類蔬菜檢測1個樣本需小型農(nóng)貿(mào)定性檢測，結(jié)果不太穩(wěn)定準(zhǔn)確及水果一般可適用于1元左右，一套試交易市場度低，一般需要重復(fù)2-3次，方農(nóng)貿(mào)市場入口處等候劑盒成本在10元市民自備法簡便、快速、成本低 進(jìn)場的產(chǎn)品速測。左右 小規(guī)?；孛嘎?lián) 50種已研制出 對農(nóng)殘定性分析，專業(yè)性、特異免疫法免疫抗體的農(nóng)藥性強，靈敏度較其它速測儀高，適用于果蔬上已知未進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化開大型農(nóng)貿(mào)或指定農(nóng)藥品種的發(fā)，暫無銷售市場及生定性、定量檢測 產(chǎn)基地品種包括有機(jī)磷但具有一定盲目性、局限性類、呋喃丹等適用于果蔬上已知未進(jìn)入產(chǎn)業(yè)化開大型農(nóng)貿(mào)或指定農(nóng)藥品種的發(fā)，暫無銷售市場及生定性、定量檢測 產(chǎn)基地色譜法所有需檢農(nóng)藥對農(nóng)殘定性、定量分析精確度高適用于所有農(nóng)產(chǎn)品中檢測1個蔬菜檢測中心殘留品種 一般最低檢出能達(dá)到1013級農(nóng)藥殘留的仲裁和鑒定樣品2000-5000規(guī)范化固元,儀器設(shè)備配套定的實驗成本最低200萬元室即pg/血但檢測時間長，儀器成檢測本及技術(shù)要求高元,儀器設(shè)備配套定的實驗成本最低200萬元室參考文獻(xiàn)李順，紀(jì)淑娟，孫煥.酶抑制法快速檢測蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的研究現(xiàn)狀及展望[J].食品與藥品，2006，8（07）：29-30.王