第八章電泳分離技術演示文稿

第八章電泳分離技術演示文稿目前一頁\總數七十六頁\編于九點優(yōu)選第八章電泳分離技術目前二頁\總數七十六頁\編于九點1.1電泳的基本概念電泳：帶電物質在電場中向相反電極移動的現(xiàn)象。電泳遷移率：在單位電位梯度的作用下，單位時間內質點所移動的距離。電泳分離技術：利用帶電物質在電場中泳動速度的差別而進行分離的方法。目前三頁\總數七十六頁\編于九點1.2電泳的理論基礎目前四頁\總數七十六頁\編于九點1.2.1影響電泳速度的因素①電場強度：泳動速度與電場強度成正比；②溶液的pH值：pH距待分離物質的pI越遠，泳動速度越大；③溶液離子強度：離子強度越小,電動勢越大,泳動速度越快；④溶液的黏度：泳動速度與溶液的黏度成反比；⑤電滲現(xiàn)象：在電場中，液體對于固體支持物的相對移動。⑥顆粒的性質：一般所帶電荷量越大、直徑越小或其形狀越接近于球形，遷移率就越大。目前五頁\總數七十六頁\編于九點1.2.2兩種離子型物質A和B的混合物的分離和目前六頁\總數七十六頁\編于九點1.3電泳技術分類淀粉凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳瓊脂糖凝膠電泳紙電泳

醋酸纖維薄膜電泳薄層電泳凝膠支持物區(qū)帶電泳非凝膠支持物電泳顯微電泳等電聚焦電泳等速電泳不用支持物電泳用支持物區(qū)帶電泳是否用支持物目前七頁\總數七十六頁\編于九點薄層電泳板電泳柱電泳。根據支持介質形狀不同電泳系統(tǒng)的連續(xù)性連續(xù)電泳不連續(xù)電泳分析電泳制備電泳定量、免疫電泳。用途不同電泳的方向不同水平電泳垂直電泳目前八頁\總數七十六頁\編于九點第二節(jié)聚丙烯酰胺凝膠電泳

聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，PAGE）是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質的一種電泳方法。聚丙烯酰胺凝膠具有機械強度好，有彈性，透明，化學性質穩(wěn)定，對pH和溫度變化小，沒有吸附和電滲作用小的特點，是一種很好的電泳支持介質。PAGE按凝膠的形狀可分為：圓盤狀電泳垂直或平板狀電泳

目前九頁\總數七十六頁\編于九點CH2=CHC=ONH2CH2=CH

C=ONHCH2NHC=OCH2=CH丙烯酰胺(Acr)N,N’-甲叉雙丙烯酰胺(Bis)-CH2-CH-[CH2-CH-]nCH2-CH-C=OC=ONH2NHCH2NHC=O-CH2-CH-[CH2-CH-]nCH2-CH-C=OC=ONHNH2聚丙烯酰胺目前十頁\總數七十六頁\編于九點2.1基本原理2.1.1聚丙烯酰胺凝膠的聚合1)化學聚合

化學聚合的催化劑通常采用過硫酸銨，此外還需要加速劑TEMED（N，N，N’，N’-四甲基乙二胺），它能以自由基的形式存在。微量TEMED的加入，可使過硫酸銨形成自由基：

S2O82-2SO4-

這些自由基的產生可引發(fā)丙烯酰胺與甲叉雙丙烯酰胺的聚合、交聯(lián)反應，形成有一定平均孔徑的聚丙烯酰胺。.目前十一頁\總數七十六頁\編于九點

2)光聚合

光聚合通常用核黃素為催化劑，核黃素經光照形成無色基，再被痕量氧氧化形成自由基，引發(fā)聚合反應。TEMED的存在，可以加速聚合。上述聚合反應受許多因素的影響：（1）大氣氧能淬滅自由基，阻止多聚體鏈長的增加。在進行化學聚合前，一般用減壓抽氣的辦法除去溶液中溶解的空氣。在膠液表面，往往覆蓋一層水或溶液，隔絕空氣，可加速聚合。（2）低溫、低pH都會減慢聚合反應速度。（3）有些材料如聚丙烯酸甲酯有機玻璃，一些金屬等可抑制聚合反應。目前十二頁\總數七十六頁\編于九點2.1.2凝膠用量計算聚丙烯酰胺凝膠孔徑的大小取決于凝膠總濃度（T%）和交聯(lián)度（C%）。

T%=

C%=式中a代表單體Arc的重量(g)，b代表交聯(lián)劑Bis的重量(g)，m代表溶液的體積(mL)a+bm×100%aa+b×100%目前十三頁\總數七十六頁\編于九點分子量范圍適宜凝膠濃度T%

<10420~301-4×10415~204104-1×10510~15105-5×1055~10>5×1052~5表分離蛋白質選擇聚丙烯酰胺凝膠濃度參考值在濃度為7.5%的凝膠中，大多數生物體內的蛋白質能得到滿意的分離效果。因此，把濃度為7.5%凝膠稱為標準膠。對于一個未知樣品，常用7.5%的標準膠或4%-10%的凝膠梯度來測試，而后選出適宜的凝膠濃度。目前十四頁\總數七十六頁\編于九點2.1.3分離效應聚丙烯酰胺凝膠電泳分為:連續(xù)性電泳不連續(xù)性電泳:凝膠層的不連續(xù)性緩沖液離子成分的不連續(xù)性pH值的不連續(xù)性電位梯度的不連續(xù)性電泳時產生的3種物理效應:濃縮效應電荷效應分子篩效應目前十五頁\總數七十六頁\編于九點A.樣品的濃縮效應緩沖液成分及pH的不連續(xù)性濃縮膠pH6.7緩沖液濃縮膠Tris-HCl,電極緩沖液Tris-Gly緩沖液樣品濃縮膠分離膠目前十六頁\總數七十六頁\編于九點緩沖液成分及pH的不連續(xù)性導致蛋白質樣品濃縮效應示意圖快離子慢離子蛋白質樣品

解離度：Cl>蛋>

Glymclcl>m蛋蛋>mGlyGly凝膠中Cl－為快離子，Gly－為慢離子，蛋白質樣品被夾在中間。目前十七頁\總數七十六頁\編于九點凝膠層的不連續(xù)性

樣品進入濃縮膠有一個堆積濃縮效應(緩沖液pH8.3)

蛋白質從“－”極向“＋”極移動，從濃縮膠進入分離膠，速度變慢，堆積濃縮。緩沖液樣品濃縮膠分離膠目前十八頁\總數七十六頁\編于九點E：每厘米的電壓降

E＝I(電流強度)/(電導率)E與電泳速度成正比電泳開始后，由于快離子泳動率最大，在快離子后面形成一個離子濃度低的低電導區(qū)，產生較高的電位梯度，使蛋白質和慢離子加速移動，蛋白質樣品被進一步濃縮。電位梯度的不連續(xù)性目前十九頁\總數七十六頁\編于九點B.

電荷效應蛋白質樣品進入分離膠后，pH增大(pH8.9)，Gly－解離度增大，不存在快、慢離子之分，蛋白質樣品在均一電場強度和pH條件下泳動。由于各種蛋白質pI不同，所載有效電荷不同，因此質點的有效遷移率不同，形成不同區(qū)帶。緩沖液濃縮膠分離膠目前二十頁\總數七十六頁\編于九點C.

分子篩效應分離膠的孔徑小，各分子由于大小和形狀不同，所受阻力不同，表現(xiàn)出不同的泳動速度，即分子篩作用。分子量小，形狀為球形的泳動速度最快。緩沖液濃縮膠分離膠目前二十一頁\總數七十六頁\編于九點2.2PAGE的優(yōu)點1）聚丙烯酰胺凝膠電滲作用較小；2）聚丙烯酰胺凝膠孔徑可控制；3）聚丙烯酰胺凝膠對熱穩(wěn)定，無色透明；4）丙烯酰胺是比較純的化合物。5）分辨率高，尤其在不連續(xù)凝膠電泳中。目前二十二頁\總數七十六頁\編于九點2.3影響凝膠聚合的因素1）形成凝膠的試劑的純度；2）凝膠濃度；3）溫度和氧氣的影響。目前二十三頁\總數七十六頁\編于九點第三節(jié)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳

加入SDS（十二烷基磺酸鈉）和少量巰基乙醇，則生物大分子的遷移率主要取決于它的分子量，而與原來所帶電荷、分子形狀無關。目前二十四頁\總數七十六頁\編于九點3.1基本原理：

1、由于SDS是陰離子，使多肽表面覆蓋的負電荷遠遠超過蛋白質分子原有的電荷量，消除了原來的電荷差異。2、改變了蛋白質單體分子的構象，不同蛋白質的SDS復合物的短軸長度都相同，長軸長度隨其分子量的大小成正比變化。

3、由于不同蛋白質的SDS復合物具有相同的荷質比，并具有相似的構象，因而有如下公式：

lgM=K1—K2μR（K1、K2為常數，μR為相對遷移率）目前二十五頁\總數七十六頁\編于九點

實際測定時，以幾種標準單體蛋白質分子量的對數值對其μR作圖，根據樣品的μR值，從標準曲線上就可查出其分子量。標準蛋白分子量未知蛋白在一定的凝膠濃度下，多肽鏈分子量的對數與多肽鏈的相對遷移率成線性關系，所以可以通過標準曲線求未知多肽鏈分子量。相對遷移率目前二十六頁\總數七十六頁\編于九點3.2SDS的操作步驟1.安裝膜具（1）（2）目前二十七頁\總數七十六頁\編于九點（3）（4）（5）目前二十八頁\總數七十六頁\編于九點2.配制凝膠溶液3.灌膠

凝膠配方儲存液凝膠終濃度T(C=3%)3%5%10%15%20%單體儲液ml3.45101520濃縮膠緩沖液2.4分離膠緩沖液7.57.57.57.510%SDS0.20.30.30.30.3雙蒸水1417.212.27.22.210%過硫酸銨ul1010101010TEMEDul1010101010目前二十九頁\總數七十六頁\編于九點插入梳子目前三十頁\總數七十六頁\編于九點膠凝后用夾子將玻璃夾出將封膠條輕輕撕掉目前三十一頁\總數七十六頁\編于九點旋轉180度，

凹玻璃向里加緩沖液目前三十二頁\總數七十六頁\編于九點4.樣品制備

將0.5ml樣品液，0.25ml10%SDS和0.25ml1%巰基乙醇于小試管中，置100℃水浴中煮沸3分鐘后，取出冷卻，然后，加入0.25ml上樣緩沖液(0.05%溴酚蘭+40%蔗糖溶液)，混合。取出混合樣品40微升加入樣品槽，每個樣品重復兩個。目前三十三頁\總數七十六頁\編于九點5.加樣目前三十四頁\總數七十六頁\編于九點6.電泳接通電源，電流恒定為80mA，待溴酚蘭指示劑移至離下端0.5cm（約3小時），切斷電源，拔去插頭，倒出電極緩沖液。目前三十五頁\總數七十六頁\編于九點7.剝膠注意保持膠的完整性。目前三十六頁\總數七十六頁\編于九點8染色

1.染色液：考馬思亮藍G-2501.0克甲醇450ml

冰醋酸100ml

加H2O到1000ml9脫色

1.脫色液：甲醇100ml

冰醋酸100ml

加H2O到1000ml目前三十七頁\總數七十六頁\編于九點電泳后的凝膠經考馬斯亮籃染色、脫色后的凝膠照片Mark:Myosin200000wβ-galactosidase116250Phosphorylaseb97400Serumalbumin66200Ovalbumin45000Carbonicanhydrase31000Trysininhibitor21500Lysozyme14400Aprotinin6500目前三十八頁\總數七十六頁\編于九點10凝膠（脫色之后）結果分析

1、計算遷移率（Rm值）：相對遷移率=2、繪制標準曲線：以標準蛋白亞基的Rm值為橫坐標，以相應分子量的對數值為縱坐標，即可繪制出測定蛋白質分子量的標準的線圖。3、計算未知蛋白亞基樣品的分子量：根據未知樣品樣的Rm值，從上述標準曲線圖中即可查出其分子量。蛋白樣品距加樣端遷移距離(cm)溴酚藍區(qū)帶中心距加樣端距離(cm)目前三十九頁\總數七十六頁\編于九點3.3注意事項

1．丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經毒性試劑，并對皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸。大量操作時應在通風櫥中進行。2．丙稀酰胺和甲叉雙丙烯酰胺溶液應裝在棕色瓶中，置冰箱內（4℃）保存?？少A存1～2個月。測定pH（4.9～5.2）可檢查其是否失效，失效不能聚合。

3．TEMED要密封保存，過硫酸銨溶液最好當天配制，以防止氧化失效。

4．凝膠的聚合速度與溫度關系很大，溫度低時，聚合速度減慢，必須根據實驗時的溫度調整3號、4號試劑的用量，以使凝膠在30min內聚合。目前四十頁\總數七十六頁\編于九點等電聚焦凝膠電泳是依據蛋白質分子的等電點進行分離的技術，等電聚焦中，蛋白質分子在含有載體兩性電解質形成的一個連續(xù)而穩(wěn)定的線性pH梯度中電泳。載體兩性電解質是脂肪族多氨基多羧酸，在電場中形成正極為酸性，負極為堿性的連續(xù)的pH梯度。蛋白質分子在偏離其等電點的pH條件下帶有電荷，因此可以在電場中移動；當蛋白質遷移至其等電點位置時，其靜電荷數為零，在電場中不再移動，據此將蛋白質分離。第四節(jié)等電聚焦目前四十一頁\總數七十六頁\編于九點兩性電解質載體(carrierampholytes)(1)易溶于水，在pI處應有足夠的緩沖能力，形成穩(wěn)定的pH梯度，不致被蛋白質或其它兩性電解質改變pH梯度。(2)在pI處應有良好的電導及相同的電導系數，以保持均勻的電場。(3)分子量小，可通過透析或分子篩法除去，便于與生物大分子分開。(4)化學性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學反應，也無變性作用，其化學組成不同于蛋白質。目前四十二頁\總數七十六頁\編于九點

利用聚丙烯酰胺凝膠內的緩沖液在電場作用下沿電場方向在凝膠內制造一個pH梯度。每種蛋白質都將遷移至與它的pI相一致的pH處。凝膠中加有兩性電解質溶液（pH9-3）加電場后在凝膠內形成一個穩(wěn)定pH梯度加樣品，然后繼續(xù)電泳凝膠染色表明樣品按照各自pI值沿著pH梯度分布目前四十三頁\總數七十六頁\編于九點等電聚焦電泳進行過程中等電聚焦電泳結束后（＋）（＋）（－）（－）低pH低pH高pH高pH目前四十四頁\總數七十六頁\編于九點試劑與器材試劑：兩性電解質載體pH3-10、10%四甲基乙二胺、10%過硫酸銨、5%H3PO4、2%NaOH、40%蔗糖、0.04％考馬斯亮蘭R250、7%醋酸器材：圓盤電泳槽、穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀、脫色搖床目前四十五頁\總數七十六頁\編于九點操作方法1.凝膠柱的制備（1）玻璃管的一端插在橡皮帽中(與橡皮接觸的部分凝膠不易聚合，可在橡皮帽中先加一滴40%的蔗糖)（2）配膠表10mL7.5%凝膠的配制試劑名稱 體積(mL) 凝膠貯液 2.5 兩性電解質載體 0.5 10%TEMED 0.1 蛋白質混合樣品 0.1 蒸餾水 6.75 混勻后置真空干燥器中抽氣10min 10%過硫酸銨 0.05 目前四十六頁\總數七十六頁\編于九點（3）將配好的凝膠溶液用細長頭滴管加到預先準備好的玻管中，至離上端1cm處，再用注射器緩緩加水3-5mm高。（4）待凝膠聚合2.電泳

小心地拔出玻管，并用蒸餾水洗去蔗糖溶液，把管固定到電泳槽上槽的洞中（安裝時要保證凝膠管垂直且橡膠塞孔密封不漏）在上槽中加入5%磷酸緩沖液，在下槽中裝入2%氫氧化鈉溶液。避免管下有氣泡。上槽接電泳儀的正極，下槽接負極，打開電源，先調電壓至100V，待電壓穩(wěn)定后再升到300V，電泳2h以上至電流降為0，將電壓調至0，關閉電源。目前四十七頁\總數七十六頁\編于九點3．剝膠

電泳結束后，取下凝膠管，用蒸餾水充分洗凈兩端電極液，在凝膠條的正極端插一銅絲為標記。用灌滿水的注射器長針頭插入凝膠與玻管管壁之間，邊壓水邊慢慢轉動玻管，推針前進，同時注入水，靠水流壓力和潤滑力將玻璃管內壁與凝膠分開，凝膠條即可流出。4.固定染色

取其中一條凝膠條放在一塊潔凈的玻板上，用尺量出固定前的凝膠條長度。放入染色液中同時進行固定染色1-2h，用蒸餾水漂洗數次后用脫色液脫色，直至蛋白質區(qū)帶清晰，量出蛋白帶距正極端的距離。目前四十八頁\總數七十六頁\編于九點5.pH梯度的制作

取另一條凝膠條放在玻板上，從凝膠的正極端開始，每隔0.5cm切下一段，依次放入已編好號并裝有1mL蒸餾水的試管中，浸泡過夜。次日用酸度計分別測定每管浸提液的pH值。以凝膠長度為橫坐標，pH值為縱坐標，繪制標準pH梯度曲線。6.蛋白質樣品等電點的計算

求出蛋白質聚焦部位距凝膠條正極端的實際長度為：固定后的蛋白區(qū)帶中心距凝膠條正極端的距離

固定染色前凝膠條長度固定染色后凝膠條長度 計算出蛋白質聚焦部位距凝膠條正極端的實際長度后，直接從pH梯度曲線上求出該蛋白質等電點。目前四十九頁\總數七十六頁\編于九點等電點聚焦的顯著優(yōu)點1.分辨率高2.很稀的樣品都可分離，且重現(xiàn)性好3.可用于測定蛋白質或多肽的等電點等電點聚焦的缺點1.要求使用無鹽溶液，而某些蛋白質在無鹽溶液中溶解度低，可能產生沉淀；2.樣品中各組分都聚焦到其等電點，對一些在等電點不溶解或發(fā)生變性的蛋白質不適用。目前五十頁\總數七十六頁\編于九點注意事項鹽離子可干擾pH梯度形成并使區(qū)帶扭曲。為防止上述影響，進行IEF時，樣品應透析或用SephadexG-25脫鹽，也可將樣品溶解在水或低鹽緩沖液中使其充分溶解，以免不溶小顆粒引起拖尾。加樣量則取決于樣品中蛋白質的種類、數目以及檢測方法的靈敏度。如用考馬斯亮藍R-250染色，加樣量可為50-150g；如用銀染色，加樣量可減少到1g。一般樣品濃度以0.5-3mg/mL為宜，最適當加樣體積為10-30l。目前五十一頁\總數七十六頁\編于九點第五節(jié)雙向凝膠電泳雙向凝膠是一種由任意兩個凝膠電泳組合而成的，即在第一向電泳后再在與第一向垂直的方向上進行第二向電泳。其基本原理一般與組成它的兩個單向電泳基本原理相同。目前五十二頁\總數七十六頁\編于九點第一向：等電聚焦電泳第二向：SDS

雙向電泳后的凝膠經染色后蛋白呈現(xiàn)二維分布圖：水平方向反映出蛋白在pI上的差異，垂直方向反映出它們在分子量上的差別。第一向電泳：等電聚焦電泳聚焦后凝膠放置在SDS凝膠上，進行第二向電泳第二向電泳：SDS分子量大分子量小pH9pH3pH9pH3目前五十三頁\總數七十六頁\編于九點目前五十四頁\總數七十六頁\編于九點操作步驟：

蛋白樣品的制備↓等電聚焦凝膠溶液的配制↓灌注毛細管凝膠↓組裝第一向電泳槽↓聚焦電泳↓停止電泳↓取出毛細管膠↓毛細管膠置平衡液中平衡目前五十五頁\總數七十六頁\編于九點↓組裝第二向電泳槽↓配制SDS-丙烯胺凝膠溶液↓灌裝SDS-電泳膠↓第一向凝膠與第二向凝膠拼接↓接通電源進行SDS-電泳↓停止電泳取膠↓凝膠置固定液中固定↓銀染法顯色↓結果分析目前五十六頁\總數七十六頁\編于九點大腸桿菌全蛋白提取液雙向電泳凝膠染色后照片目前五十七頁\總數七十六頁\編于九點樣品的溶解是2-DE成功分離蛋白質的最關鍵因素之一。溶解的目標：1、樣品中非共價結合的蛋白質復合物和聚積體完全破壞，從而形成各個多肽的溶解液（否則樣品中結合牢固的蛋白復合物可能使2-DE中出現(xiàn)新的蛋白點，相應的表示單個多肽的點的強度會下降）；2、溶解方法必須允許可能干擾2-DE分離的鹽、脂類、多糖和核酸等物質的去除；3、溶解方法要保證樣品在電泳過程中保持溶解狀態(tài)。目前五十八頁\總數七十六頁\編于九點增加樣品溶解性的手段變性劑：通過改變溶液中的氫鍵結構使蛋白質充分伸展，將其疏水中心完全暴露，降低接近疏水殘基的能量域。其典型代表是尿素和硫尿。表面活性劑：經過變性劑處理而暴露蛋白質的疏水基團后，還常需至少一種表面活性劑來溶解疏水基團。常用的表面活性劑有離子去污劑SDS、非離子去污劑TritonX-100和NP-40、兩性離子去污劑CHAPS、OBG等。其中CHAPS和SB3-10最好。還原劑：在變性劑和表面活性劑聯(lián)用條件下，加用還原劑可使已變性的蛋白質展開更完全，溶解更徹底。常用含自由巰基的DTT或-巰基乙醇，以及不帶電荷的三丁基膦（TBP）進行還原。目前五十九頁\總數七十六頁\編于九點起載體作用的兩性電解質：即便在變性劑和表面活性劑存在的情況下，某些蛋白質也需要在鹽離子的作用下才能保持其處于溶解狀態(tài)，否則這些蛋白質在其處于pI點時會發(fā)生沉淀。Carrierampholytes的作用在于捕獲樣品中的少量鹽分，從而保證蛋白質的溶解性。應用時，兩性電解質的濃度應小于0.2％（w/v)。濃度過高會使IEF的速度降低。另外，為了保證實驗的精確性，在選擇不同pH范圍的IPG膠條時，也應使兩性電解質的pH值與之相符合。目前六十頁\總數七十六頁\編于九點非變性2D：兩向均在非變性條件下進行，這樣分離的蛋白質點的等電點和表觀分子量同生理條件下獲得的這些蛋白的值是一樣的；非變性/SDS-2D：第一向采用非變性IEF，之后在2%SDS溶液中平衡；第二向也在SDS存在的條件下進行。適于分析非共價鍵連接的蛋白－蛋白間的相互作用。非變性/還原/SDS-2D：非變性條件下IEF聚焦，之后用8M尿素＋5%β-ME＋2%SDS進行平衡，再進行第二向SDS-PAG電泳。此時分離的蛋白質點可進行點的切取、蛋白酶消化、MALDI-TOF-MS分析鑒定，提供關于斷裂二硫鍵連接的多肽的信息。變性2D：樣品先用2%SDS＋5%β-ME＋95℃變性5min，IEF在8M尿素＋1%NP-40條件下進行，之后膠條用2%SDS＋5%β-ME平衡，然后進行SDS。該技術適于DNA序列和多肽結構的分析，或分析被碳氫鍵連接和其它翻譯后修飾所引起的多肽結構微異質性，但此方式顯示的大于100Kd的蛋白質點少于第三種方式雙向電泳的分類目前六十一頁\總數七十六頁\編于九點第六節(jié)毛細管電泳

又稱高效毛細管電泳(HPCE),是指離子或帶電粒子以毛細管為分離室,以高壓直流電場為驅動力,依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離的液相分離分析技術。目前六十二頁\總數七十六頁\編于九點

一、高效毛細管電泳基本原理

在電解質溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象，稱之為電泳。由于不同離子所帶電荷及性質的不同，遷移速率不同可實現(xiàn)分離。1.經典電泳分離法的不足

所用分離柱的柱徑大，柱較短，分離效率不高（遠低于HPLC），溫度影響大。高效毛細管電泳在技術上采取了兩項重要改進。目前六十三頁\總數七十六頁\編于九點2.高效毛細管電泳技術上的重要突破高效毛細管電泳在技術上采取了兩項重要改進：一是采用了0.05mm內徑的毛細管；二是采用了高達數千伏的電壓。毛細管的采用使產生的熱量能夠較快散發(fā)，大大減小了溫度效應，使電場電壓可以很高。電壓升高，電場推動力大，又可進一步使柱徑變小，柱長增加，高效毛細管電泳的柱效遠高于高效液相色譜，理論塔板數高達幾十萬塊/米，特殊柱子可以達到數百萬。目前六十四頁\總數七十六頁\編于九點3.基本概念有效長度(Ld,cm):毛細管的入口端到檢測器窗口的距離；

遷移時間(tmmin):帶電粒子在電場作用下做定向移動的時間；電泳速度(Uecm/s):在單位時間內，帶電粒子在毛細管中定向移動的距離；電場強度(EV/cm):

在給定長度毛細管的兩端施加一個電場后所形成的電效應的強度；電泳淌度(μepcm2/(V.s)):帶電粒子在毛細管中定向移動的速度與所在電場強度之比；目前六十五頁\總數七十六頁\編于九點電滲流：毛細管內壁表面的電荷所引起的管內液體的整體流動，源于外加電場對管壁溶液雙電層的作用；１.使液體沿毛細管壁均勻移動；２.使攜帶不同電性的分子均向負極移動，中性分子也隨著電滲流一起移動。樣品分子泳動方向電滲流方向目前六十六頁\總數七十六頁\編于九點4.分離過程

電場作用下，柱中出現(xiàn)：電泳現(xiàn)象和電滲流現(xiàn)象。帶電粒子的遷移速度=電泳和電滲流兩種速度的矢量和正離子：兩種效應的運動方向一致，在負極最先流出中性粒子無電泳現(xiàn)象，受電滲流影響，在陽離子后流出陰離子：兩種效應的運動方向相反，ν電滲流>ν電泳時,陰離子在負極最后流出,在這種情況下,不但可以按類分離,除中性粒子外,同種類離子由于受到的電場力大小不一樣也同時被相互分離。目前六十七頁\總數七十六頁\編于九點二毛細管電泳儀系統(tǒng)電泳儀進樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數據處理系統(tǒng)目前六十八頁\總數七十六頁\編于九點進樣系統(tǒng)

靜壓力進樣和電動進樣進樣體積一