細(xì)菌的遺傳分析打印演示文稿

細(xì)菌的遺傳分析打印演示文稿目前一頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)（優(yōu)選）細(xì)菌的遺傳分析打印目前二頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)(一)細(xì)胞計(jì)數(shù)(培養(yǎng)物細(xì)胞濃度)培養(yǎng)物中微生物計(jì)數(shù)方法是微生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)，其基本思路是：對(duì)原培養(yǎng)物進(jìn)行連續(xù)稀釋；進(jìn)行平板涂布（或混合倒平板）培養(yǎng)；由于每個(gè)細(xì)胞形成一個(gè)菌落，計(jì)數(shù)菌落數(shù)；根據(jù)稀釋倍數(shù)計(jì)算原培養(yǎng)物中的細(xì)胞濃度。目前三頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)(二)建立純系的方法——純培養(yǎng)目前四頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)(三)選擇培養(yǎng)法鑒定突變型與重組型許多細(xì)菌的突變都與培養(yǎng)基營養(yǎng)成分及培養(yǎng)條件有關(guān)。營養(yǎng)缺陷型的篩選、鑒定：選擇培養(yǎng)法是根據(jù)菌株在基本培養(yǎng)基和營養(yǎng)培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)表現(xiàn)將菌株分為原養(yǎng)型(也稱為原生營養(yǎng)型)與營養(yǎng)缺陷型(在基本培養(yǎng)基上不能正常生長(zhǎng)，只能在相應(yīng)的營養(yǎng)培養(yǎng)基上生長(zhǎng))。其它突變類型的篩選、鑒定：對(duì)于其它的突變類型(如溫度敏感型)，也可以通過培養(yǎng)條件的選擇培養(yǎng)來篩選與鑒定。目前五頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)(四)突變型與重組型的批量篩選方法選擇培養(yǎng)法一次可鑒定、篩選一種突變型，但要檢測(cè)分離含有多種突變型的混和菌株，僅采用選擇培養(yǎng)法要進(jìn)行多次試驗(yàn)才能夠達(dá)到目的、效率太低。為高效檢測(cè)、分離混和群體中不同突變型，黎德伯格夫婦設(shè)計(jì)了影印培養(yǎng)法。該方法原理與選擇培養(yǎng)法一致，但是采用影印法將在完全培養(yǎng)基上單菌落同時(shí)接種到不同選擇培養(yǎng)基上同時(shí)對(duì)所有菌落進(jìn)行選擇培養(yǎng)，鑒定效率大大提高。目前六頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)細(xì)菌的基因組nucleoid(+plasmid)1結(jié)構(gòu):P107環(huán)狀雙鏈DNA，單倍性，以折疊或螺旋狀態(tài)存在；2大?。洪L(zhǎng)約250~35000m(未螺旋)；3復(fù)制方式：著膜式復(fù)制。分裂特點(diǎn)：均等分裂，無基因重組。目前七頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)Plasmidp108-109目前八頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)圖7-3大腸桿菌染色體的基本結(jié)構(gòu)圖解目前九頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)細(xì)菌的突變型(一)合成代謝功能的突變型anabolicfunctionalmutants:營養(yǎng)缺陷型，auxotroph,X-(二)分解代謝功能的突變型：catabolicfunctionalmutants:

lac-等(三)抗性突變型resistant

mutants1抗藥性突變型:

青霉素:penr,

pens

鏈霉素:strr,strs

penicillinStreptomycin抗性:resistance敏感:sensitive，susceptive

2抗噬菌體突變型

T1噬菌體Tonr

Tons

T2噬菌體Ttor

TtosT6噬菌體Tsxr

Tsxs目前十頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)突變型的篩選例如：營養(yǎng)缺陷型的篩選:u.v

野生型細(xì)菌完全培養(yǎng)基：影印培養(yǎng)基本培養(yǎng)基：補(bǔ)充培養(yǎng)基：氨基酸類維生素類系列氨基酸補(bǔ)充培養(yǎng)基：賴氨酸脯氨酸精氨酸….CMMMSM影印實(shí)驗(yàn)（replicaplating）JoshuaLederberg

&

EstherLederberg（1952）目前十一頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)在細(xì)菌中遺傳物質(zhì)有三種轉(zhuǎn)移的形式。轉(zhuǎn)化（transformation）接合（conjugation）轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）其共同特點(diǎn)是：（1）單方向轉(zhuǎn)移；（2）都產(chǎn)生部分二倍體；（3）外源基因只有整合到環(huán)狀染色體上才能穩(wěn)定地遺傳。

目前十二頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)目前十三頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)(一)細(xì)菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

(二)轉(zhuǎn)化過程(三)共轉(zhuǎn)化與遺傳圖譜繪制轉(zhuǎn)化一、細(xì)菌的轉(zhuǎn)化與作圖轉(zhuǎn)化(transformation)：指外源DNA片段不經(jīng)中間媒介體直接進(jìn)入感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行基因重組形成重組體的過程。轉(zhuǎn)化子：通過轉(zhuǎn)化而形成的重組體。P99證明DNA是遺傳物質(zhì)的經(jīng)典實(shí)驗(yàn)一：轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)?zāi)壳笆捻揬總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)感受態(tài)與感受態(tài)因子：感受態(tài)指細(xì)菌能夠從周圍環(huán)境中吸收DNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)化的生理狀態(tài)。感受態(tài)主要受一類蛋白質(zhì)(感受態(tài)因子)影響，感受態(tài)因子可以在細(xì)菌間進(jìn)行轉(zhuǎn)移，從感受態(tài)細(xì)菌中傳遞到非感受態(tài)細(xì)菌中，可以使后者變?yōu)楦惺軕B(tài)。一般認(rèn)為感受態(tài)出現(xiàn)在細(xì)菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期，并且某些處理過程可以誘導(dǎo)或加強(qiáng)感受態(tài)，以大腸桿菌為例，用Ca2+(如CaCl2)處理對(duì)數(shù)生長(zhǎng)后期的大腸桿菌可以增強(qiáng)其感受能力。目前十五頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)按照細(xì)菌出現(xiàn)感受態(tài)的方式，可把轉(zhuǎn)化分為三種類型自然轉(zhuǎn)化(naturallyoccuringtransformation)：細(xì)菌自發(fā)地出現(xiàn)感受態(tài)，如肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌，枯草桿菌等。人工誘導(dǎo)的感受態(tài)(artificiallyinducedcompetence)：如Ca2+誘導(dǎo)的大腸桿菌等發(fā)生的轉(zhuǎn)化。原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化(protoplasttransformation)：將DNA分子連同PEG一同加入原生質(zhì)體，造成細(xì)胞攝取DNA。還可以用電穿孔法(electroporation)代替PEG，用高壓脈沖電流在細(xì)胞膜上擊成小孔，使DNA分子通過小孔而導(dǎo)入細(xì)胞，又稱為電轉(zhuǎn)化?？蛇m用于多種細(xì)菌，放線菌和真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)化。2和3：工程轉(zhuǎn)化（engineeredtransformation）

目前十六頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)轉(zhuǎn)化過程目前十七頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)目前十八頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)圖7-13細(xì)菌轉(zhuǎn)化的機(jī)制目前十九頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)通過轉(zhuǎn)化可以測(cè)定基因的連鎖、基因的排列順序以及圖距。原理如下：如果在供體的染色體上有兩個(gè)離得很遠(yuǎn)的基因a＋和b＋，我們將會(huì)發(fā)現(xiàn)它們總是在不同的DNA片段上，這樣如果有一個(gè)a＋b＋供體和ab受體，那共轉(zhuǎn)化（cotransformation）即兩個(gè)基因同時(shí)轉(zhuǎn)化的概率是由兩個(gè)基因單獨(dú)轉(zhuǎn)化的概率的乘積。若每個(gè)基因的轉(zhuǎn)化頻率是10－3的話，那么這兩個(gè)基因同時(shí)被轉(zhuǎn)化的頻率應(yīng)為10－3×10－3＝10－6。如果兩個(gè)基因離得很近，有可能位于同一個(gè)DNA片段上，那么它們共轉(zhuǎn)化的頻率將接近于單個(gè)基因轉(zhuǎn)化的頻率。若共轉(zhuǎn)化的頻率要比兩個(gè)單個(gè)基因轉(zhuǎn)化頻率相乘積高的話，那么這兩個(gè)基因一定是緊密連鎖的。

(三)共同轉(zhuǎn)化與遺傳圖譜繪制目前二十頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)基因的順序也可以通過共轉(zhuǎn)化的結(jié)果來分析確定，例如p＋和q＋常常共轉(zhuǎn)化，而q＋和o＋也常常共轉(zhuǎn)化，但基因p＋和o＋從未發(fā)生共轉(zhuǎn)化，那么這三個(gè)基因的順序一定是p–q-o。由于轉(zhuǎn)化片段的大小是可以控制的，因此兩個(gè)基因共轉(zhuǎn)化的頻率可以和轉(zhuǎn)化片段的平均大小相等。通過轉(zhuǎn)化片段平均大小相關(guān)的共轉(zhuǎn)化頻率測(cè)定，就可以獲得這些基因的連鎖圖譜。目前二十一頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)利用共同轉(zhuǎn)化繪制細(xì)菌連鎖遺傳圖譜的基本原理：相鄰基因發(fā)生共同轉(zhuǎn)化的概率與兩者的距離間成正向關(guān)系，基因間距離越近，發(fā)生共同轉(zhuǎn)化的頻率越高，反之越低。因此可能通過測(cè)定兩基因共同轉(zhuǎn)化的頻率來指示基因間的相對(duì)距離。2轉(zhuǎn)化基因間重組值的計(jì)算

a、b單個(gè)整合個(gè)體數(shù)

a、b單個(gè)整合+同時(shí)整合總體數(shù)重組值=

=

(+-)+(-+)(++)+(+-)+(-+)

P93q21目前二十二頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)出現(xiàn)野生型菌落的可能原因：回復(fù)突變；轉(zhuǎn)化；互養(yǎng)；細(xì)菌間發(fā)生了基因重組細(xì)菌的接合與染色體作圖目前二十三頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)幾種可能解釋及其分析對(duì)上述試驗(yàn)結(jié)果原養(yǎng)型菌落可能產(chǎn)生于：親本細(xì)菌A或B發(fā)生了回復(fù)突變；兩品系細(xì)胞通過培養(yǎng)基交換養(yǎng)料——互養(yǎng)作用；兩品系間發(fā)生了轉(zhuǎn)化作用；發(fā)生細(xì)胞融合，形成了異核體或雜合二倍體。為了驗(yàn)證這些原養(yǎng)型菌落產(chǎn)生的可能而進(jìn)行的研究最終表明：這些解釋均不成立。目前二十四頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)回復(fù)突變可能的排除Lederberg和Tatum利用的雙營養(yǎng)缺陷型菌株進(jìn)行試驗(yàn)，已基本排除A或B品系發(fā)生回復(fù)突變產(chǎn)生原養(yǎng)型細(xì)菌的可能。單基因回復(fù)突變的頻率約為10-6；雙基因回復(fù)突變的頻率則為10-12，頻率很低。但試驗(yàn)中產(chǎn)生原養(yǎng)型菌落產(chǎn)生的頻率非常高，因此基本可以排除回復(fù)突變的可能。目前二十五頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)互養(yǎng)作用及其排除試驗(yàn)材料：A品系：A-B+T1s(met-bio-thr+leu+T1s)；B品系：A+B-T1r(met+bio+thr-leu-T1r)。試驗(yàn)方法：將A、B品系混合接種在基本培養(yǎng)基表面；短時(shí)間后噴T1殺死A品系，使其不能持續(xù)產(chǎn)生Thr與Leu供B品系持續(xù)生長(zhǎng)。結(jié)果與結(jié)論：仍然出現(xiàn)原養(yǎng)型菌落。從而表明互養(yǎng)并非原養(yǎng)型菌落出現(xiàn)的原因，而可能發(fā)生了遺傳重組。目前二十六頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)轉(zhuǎn)化作用及其排除Lederberg和Tatum曾把品系A(chǔ)的培養(yǎng)液經(jīng)加熱滅菌，加入到B品系的培養(yǎng)物中，未得到原養(yǎng)型菌落；表明原養(yǎng)型菌落可能不是由轉(zhuǎn)化作用產(chǎn)生。戴維斯(Dawis,1950)的U型管試驗(yàn)(結(jié)果沒有得到原養(yǎng)型細(xì)菌)；實(shí)驗(yàn)結(jié)論：細(xì)胞直接接觸是原養(yǎng)型細(xì)菌產(chǎn)生的必要條件。目前二十七頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)異核體和雜合二倍體的可能性出現(xiàn)原養(yǎng)型菌落的另一種可能是細(xì)菌細(xì)胞發(fā)生融合，產(chǎn)生異核體或雙雜合二倍體。這兩種情況類似于二倍體生物的雜合體將產(chǎn)生原養(yǎng)型菌落。異核體指由于細(xì)胞融合而在細(xì)胞內(nèi)含有遺傳組成不同的兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞核。雙雜合二倍體則是異核體進(jìn)一步發(fā)生核融合，形成二倍體細(xì)胞核，核內(nèi)含有兩種遺傳物質(zhì)。但細(xì)菌為單倍配子體生物，異核體和二倍體只能暫存在。培養(yǎng)繁殖過程中必將發(fā)生分離，產(chǎn)生各種缺陷型菌落。對(duì)試驗(yàn)中得到的原養(yǎng)型菌落后代研究表明：后代沒有出現(xiàn)預(yù)期的性狀分離現(xiàn)象。目前二十八頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)經(jīng)過上述分析可以認(rèn)為：在Lederberg和Tatum及其它類似試驗(yàn)中，發(fā)生了一種不同于轉(zhuǎn)化的遺傳重組方式，稱之為接合（conjugation）。由于歷史的局限，從一開始萊德伯格和塔特姆就根據(jù)真核的重組來解釋他們的發(fā)現(xiàn)，認(rèn)為細(xì)菌接合是一個(gè)彼此交換遺傳物質(zhì)的過程。目前二十九頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)F因子及其在雜交中的行為致育因子(fertilityfactor,F因子;sexfactor,性因子)。F因子的化學(xué)本質(zhì)是DNA，可以自主狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中或整合到細(xì)菌的染色體上。F因子可以在細(xì)菌細(xì)胞間進(jìn)行轉(zhuǎn)移并傳遞遺傳物質(zhì)。圖F因子的結(jié)構(gòu)圖F因子的整合目前三十頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)F因子狀態(tài)與遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移特點(diǎn)Ffactor目前三十一頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)F因子狀態(tài)與遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移特點(diǎn)不能進(jìn)行極少轉(zhuǎn)移Ｆ因子,大量轉(zhuǎn)移細(xì)菌基因。轉(zhuǎn)移Ｆ因子，還轉(zhuǎn)移細(xì)菌個(gè)別基因。Ｆ因子狀態(tài)游離整合菌株類型Ｆ+FˊＨfrＦ-

菌株性別♂♀雜交類型Ｆ+Ｆ-FˊＦ-ＨfrＦ-Ｆ-Ｆ-

傳遞特點(diǎn)只轉(zhuǎn)移Ｆ因子不轉(zhuǎn)移細(xì)菌基因。目前三十二頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)F+F-(1)F纖毛(Fpili)由纖毛素(pilin)蛋白構(gòu)成，接合管僅使細(xì)胞初步接觸；(2)轉(zhuǎn)移啟動(dòng)轉(zhuǎn)移起始區(qū)(transferorigin,OriT),滾環(huán)復(fù)制；(3)單鏈轉(zhuǎn)移，復(fù)制，或重組。目前三十三頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)HfrF-(1)F整合后呈線狀；(2)轉(zhuǎn)移起點(diǎn)0riT位于中間；(3)先轉(zhuǎn)移F因子的一部分,F的后面部分最后轉(zhuǎn)移。（4）重組子仍為F-高頻重組菌株P(guān)125異源雙鏈目前三十四頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)三細(xì)菌基因重組的特點(diǎn)１部分二倍體:指含有一個(gè)完整基因組和部分基因組的細(xì)胞.(半合子)P85內(nèi)基因子:P85外基因子:P85２細(xì)菌基因重組的特點(diǎn):(1)細(xì)菌基因重組是在部分二倍體中進(jìn)行;(2)只有偶數(shù)交換才產(chǎn)生有活性的重組體;

(3)相反的重組體不出現(xiàn).5-36目前三十五頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)中斷雜交與重組作圖一、中斷雜交實(shí)驗(yàn)原理

1中斷雜交實(shí)驗(yàn)

Hfrthr+leu+azirtonrlac+gal+strs

F-

thr-leu-azistonslac-gal-strr

選擇培養(yǎng)基9′11′18′25′

加str↓↓↓↓

無thr,leu

↓↓↓影印接種aziTonlacgal┆┆┆接合中斷接合殺死Hfr檢查基因作圖目前三十六頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)目前三十七頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)2中斷雜交實(shí)驗(yàn)作圖原理A：

Hfr染色體上的基因是從某一點(diǎn)開始,以線性方式進(jìn)入Ｆ-的,B：離原點(diǎn)愈近的基因進(jìn)入Ｆ-愈早,出現(xiàn)在Ｆ-中的比例愈大,反之,則愈小.

3中斷雜交作圖:

指在HfrF-雜交中,把接合中的細(xì)菌在不同時(shí)間取樣,攪拌中斷雜交,分析受體菌基因型,以Hfr基因出現(xiàn)在Ｆ-中的先后為順序,以轉(zhuǎn)移的時(shí)間(分鐘)為圖距單位進(jìn)行基因作圖的方法.

4作圖(原點(diǎn))aziTonlacgalF09111825min目前三十八頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)大腸桿菌基因組很大（全部轉(zhuǎn)移需要100分鐘），其遺傳圖譜須用多株F因子整合在不同位置的Hfr菌才能完成。目前三十九頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)1)不同的Hfr品系轉(zhuǎn)移的起始基因是不同的;說明：Ｆ因子可以在不同的位點(diǎn)插入細(xì)菌染色體;2)與同一基因相鄰的基因是相同的;說明：不同品系細(xì)菌的基因順序是相同的;3)Hfr基因可以兩個(gè)不同方向轉(zhuǎn)移基因進(jìn)入Ｆ-;4)一個(gè)Hfr轉(zhuǎn)移的起始基因是另一個(gè)Hfr最后轉(zhuǎn)移的基因說明：細(xì)菌的染色體是環(huán)狀的.P85圖5-35

thr

lachis

galpurthipro2glyHfrH33121目前四十頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)5E.coli的染色體呈環(huán)狀目前四十一頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)三、重組作圖(難點(diǎn))１細(xì)菌的重組作圖的前提(1)

兩個(gè)基因緊密連鎖;(2)兩個(gè)基因進(jìn)入受體菌的先后;

例：已知lac和ade緊密連鎖;lac+比ade+先進(jìn)入Ｆ-;２雜交、選擇、統(tǒng)計(jì)重組體Hfrlac+ade+strs

F-lac-ade-strr

選擇培養(yǎng)基加str,無adeＦ-ade+strr伊紅美蘭培養(yǎng)基

紫紅色菌落ade+lac+粉紅色菌落ade+lac-B:lac+ade+

A:lac+ade+C:lac+ade+

F-lac+ade+親組合52F-lac-ade+重組合15目前四十二頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)3計(jì)算重組體重組值=重組菌落數(shù)/總菌落數(shù)100%=(lac-ade+)/[(lac+ade+)+(lac-ade+)]100%=15/(52+15)100%≈20%已知中斷雜交實(shí)驗(yàn)該兩個(gè)基因相距1分鐘,

重組作圖與中斷雜交作圖的圖距關(guān)系:

1分鐘圖距≈20%重組值4E.coli染色體全長(zhǎng)：100分鐘；含有：4.6106bp20100≈2000cM1cM≈2000bp目前四十三頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)F′因子與性導(dǎo)一F′因子與F′菌株F′因子：指整合態(tài)的F因子從Hfr上錯(cuò)誤切割下來，且?guī)в屑?xì)菌個(gè)別基因的F因子。F′菌株：指帶有F′因子的細(xì)菌。二性導(dǎo):指利用Ｆ因子將供體菌的基因?qū)胧荏w形成部分二倍體的過程。F′

F-→F′+F′

目前四十四頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)圖7-12F′因子的起源和部分二倍體的形成（仿自Griffiths，2005）目前四十五頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)F′和F因子不同：①F′品系轉(zhuǎn)變成Hfr品系的頻率要高于F＋品系②F′變成Hfr時(shí)F′因子整合到同一（所帶基因的同源）位點(diǎn)上，而F＋變成Hfr時(shí)可整合到不同位點(diǎn)；③F′×F－

時(shí)可高頻傳遞特定的基因，形成部分二倍體。而F＋×F－要么產(chǎn)生F＋但不轉(zhuǎn)移任何基因，要么以10－7將宿主的基因按順序轉(zhuǎn)入受體，但受體仍為F－。所轉(zhuǎn)移的基因是不同的。

目前四十六頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)性導(dǎo):指利用Ｆ因子將供體菌的基因?qū)胧荏w形成部分二倍體的過程。F′

F-→F′+F′

1性導(dǎo)的特點(diǎn):只能轉(zhuǎn)移Ｆ因子插入位點(diǎn)附近的基因。2性導(dǎo)在遺傳分析中的應(yīng)用：(1)F′因子可自主復(fù)制；(2)性導(dǎo)所形成的部分二倍體可用作測(cè)定兩突變形間的互補(bǔ)試驗(yàn)；(3)確定部分二倍體中兩基因的顯隱系；(4)利用兩基因的共性導(dǎo)率作圖.P88：四種菌株總結(jié)雜交關(guān)系目前四十七頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)Donorrecipient

defectivephageGeneralizedtransductionRestrictedtransduction轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）與作圖目前四十八頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)LerderbergandZinderLT22（P22溶原）phe-trp-tyr-his

+

LT2（P22敏感）phe+trp+tyr+his–結(jié)果：在MM上以10-5頻率出現(xiàn)原養(yǎng)型菌株。兩親本菌株分別置于U型管的兩臂時(shí)，在LT22的一邊出現(xiàn)了原養(yǎng)型菌株（與接合不同）。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明在兩個(gè)菌株間傳遞遺傳物質(zhì)的是沙門菌的一種溫和噬菌體P22。LT2LT22prototroph目前四十九頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體的形成噬菌體的頭部誤包裝了細(xì)菌的染色體片段（大小相似的），形成轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體，即：噬菌體頭部+供體菌的染色體片段或稱為：完全缺陷噬菌體，假噬菌體。P1包裝不嚴(yán)格，其中約有1/100的宿主片段可能會(huì)被錯(cuò)誤地包裝到噬菌體中，稱為“偷渡”。目前五十頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)圖7-15普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)病毒顆粒的形成與受體細(xì)菌被轉(zhuǎn)導(dǎo)的結(jié)果目前五十一頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)Generlizedtransduction目前五十二頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)Abortivetransduction目前五十三頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)普遍性轉(zhuǎn)導(dǎo)作圖(1)

作圖原理:兩基因的共轉(zhuǎn)率愈大相距愈近，反之則愈遠(yuǎn)(2）雙因子轉(zhuǎn)導(dǎo)作圖

例如：確定abc三個(gè)基因在染色體上的順序分別測(cè)定a-b、a-c、b-c的共轉(zhuǎn)導(dǎo)率；如果：a-b的共導(dǎo)率最大，a-c較大，而b-c的最小，則順序?yàn)椋篵ac目前五十四頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)兩點(diǎn)法基因順序的確定雜交測(cè)定三個(gè)共轉(zhuǎn)率:例：P1→供體thr+leu+azir

受體thr-leu-azis轉(zhuǎn)導(dǎo)子基因型共轉(zhuǎn)率leu+

azir50%leu+

thr+2%thr+

leu+3%thr+

azir0%

基因可能順序

thrazileu或

thrleuazi基因順序是:thrleuazi

2）三因子轉(zhuǎn)導(dǎo)作圖選擇thr+轉(zhuǎn)導(dǎo)子選擇leu+轉(zhuǎn)導(dǎo)子目前五十五頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)(2)中間位點(diǎn)法

供體菌：supC+trpA+pyrF+

受體菌：supC-trpA-pyrF-↓

基因順序是:supCtrpApyrF

轉(zhuǎn)導(dǎo)子（1）supC+trpA+pyrF+36（雙交換）（2）supC+trpA+pyrF-114（雙交換）（3）supC+trpA-pyrF+0（四交換）（4）supC+trpA-pyrF-453（雙交換）目前五十六頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)圖轉(zhuǎn)導(dǎo)噬菌體與受體染色體之間重組四交換形成轉(zhuǎn)導(dǎo)子頻率最低目前五十七頁\總數(shù)六十六頁\編于二十點(diǎn)3）共轉(zhuǎn)率與圖距關(guān)系公式:

d(圖距)=L(1-√x)L：轉(zhuǎn)導(dǎo)DNA的平均長(zhǎng)度X:兩個(gè)基因的共轉(zhuǎn)導(dǎo)頻率3當(dāng)產(chǎn)生轉(zhuǎn)導(dǎo)子是概率很低的隨機(jī)事件，加上噬菌體能攜帶細(xì)菌的DNA的總量受其頭部的大小容量限制，所以無論