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關(guān)于免疫學(xué)技術(shù)原理第1頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月(一)抗原抗體反應(yīng)的原理
抗原抗體反應(yīng):指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。
抗原表位與抗體高變區(qū)間的互補(bǔ)結(jié)合抗原表位與抗體高變區(qū)的溝槽分子表面的結(jié)合抗原抗體之間的結(jié)合力
親水膠體轉(zhuǎn)化為疏水膠體
物質(zhì)基礎(chǔ):第2頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月體內(nèi):表現(xiàn)為溶菌、殺菌、促進(jìn)吞噬或中和毒素或引起免疫病理的損傷體外:凝集、沉淀、細(xì)胞溶解和補(bǔ)體結(jié)合等反應(yīng)第3頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月(二)抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性可逆性比例性階段性第4頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月特異性:抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性抗原抗體反應(yīng)特異性示意圖分子基礎(chǔ):抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間空間構(gòu)型的互補(bǔ)性(1)特異性第5頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月兩種不同的抗原分子具有部分相同或類似結(jié)構(gòu)的抗原表位,可與彼此相應(yīng)的抗血清發(fā)生反應(yīng)交叉反應(yīng)(crossreactions)抗原抗體交叉反應(yīng)示意圖AgB第6頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月(2)可逆性可逆性:抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后,在一定條件下又可解離為游離抗原與抗體的特性影響因素:
抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力-親合力越高,結(jié)合越牢固,越不易解離環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響-pH、離子強(qiáng)度
第7頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月前帶(prezone):抗體過量后帶(postzone):抗原過量等價(jià)帶(equivalencezone):
抗原抗體比例合適
抗原抗體反應(yīng)比例性示意圖比例性:抗原與抗體發(fā)生可見反應(yīng)需遵循一定的量比關(guān)系(3)比例性第8頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月第一階段:特異性結(jié)合階段,反應(yīng)快,不可見第二階段:反應(yīng)可見階段,反應(yīng)慢,出現(xiàn)凝集、沉淀和細(xì)胞溶解等現(xiàn)象(4)階段性第9頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月A.抗原、抗體反應(yīng)物的自身因素環(huán)境因素(三)影響抗原抗體反應(yīng)的因素抗原:理化性狀、表位種類和數(shù)目抗體:來源、特異性、親和性、效價(jià)第10頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月B.環(huán)境因素電解質(zhì):生理鹽水或緩沖液酸堿度:pH6~pH9溫度:15℃~40℃,37℃最適第11頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷凝集反應(yīng)直接凝集試驗(yàn)觀察凝集現(xiàn)象間接凝集試驗(yàn)同上抗球蛋白試驗(yàn)同上沉淀反應(yīng)液相沉淀試驗(yàn)觀察沉淀,檢測(cè)濁度免疫電泳技術(shù)觀察掃描沉淀峰、沉淀弧補(bǔ)體參與的反應(yīng)補(bǔ)體溶血試驗(yàn)觀察測(cè)定溶血現(xiàn)象補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)同上(四)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的類型第12頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月反應(yīng)類型實(shí)驗(yàn)技術(shù)結(jié)果判斷中和反應(yīng)病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)病毒感染性毒素中和試驗(yàn)檢測(cè)外毒素毒性標(biāo)記免疫反應(yīng)熒光免疫技術(shù)檢測(cè)熒光現(xiàn)象放射免疫技術(shù)檢測(cè)放射性強(qiáng)度酶免疫技術(shù)檢測(cè)酶底物顯色發(fā)光免疫技術(shù)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度金免疫技術(shù)檢測(cè)金顆粒沉淀第13頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月按實(shí)際用途分為:e①免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistrytechniqu,IHCT)②免疫測(cè)定(immunoassay)標(biāo)記免疫技術(shù):用熒光物質(zhì)、放射性核素、酶或化學(xué)發(fā)光物質(zhì)等標(biāo)記抗原或抗體,進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)后,通過檢測(cè)標(biāo)記物對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定位或定量分析第14頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月按測(cè)定反應(yīng)體系的物理狀態(tài)分為:①均相免疫測(cè)定(homogenousimmunoassay)②非均相免疫測(cè)定(heterogenousimmunoassay)
按檢測(cè)現(xiàn)象分為:
①放射免疫技術(shù)②熒光免疫技術(shù)③酶免疫技術(shù)④化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)⑤金免疫技術(shù)第15頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月1.什么是抗原抗體反應(yīng)?抗原抗體反應(yīng)的原理是什么?2.抗原抗體反應(yīng)有哪些特點(diǎn)?3.如何理解抗原抗體反應(yīng)的特異性?4.什么是抗原抗體反應(yīng)的可逆性?有何應(yīng)用?5.抗原抗體反應(yīng)體系中為何要確定抗原、抗體的最適比例?6.抗原抗體反應(yīng)有哪些影響因素?7.基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)有哪些?思考題第16頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月小結(jié)
抗原抗體反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)抗體之間所發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。
抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)是特異性、可逆性、比例性和階段性。
第17頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月
影響抗原抗體反應(yīng)的因素包括反應(yīng)物的自身因素和環(huán)境因素。免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng),免疫學(xué)技術(shù)有凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體參與的反應(yīng)、中和反應(yīng)和標(biāo)記免疫反應(yīng)五種類型。
第18頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月抗原抗原排斥抗原抗體Y抗原抗原抗原YYYYYYYYYYYYYYYYY
顆粒性抗原(細(xì)菌、紅細(xì)胞等)與相應(yīng)抗體結(jié)合,在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象,稱為凝集反應(yīng)。第二節(jié)凝集反應(yīng)第19頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月分類直接凝集反應(yīng)--
顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合,在電解質(zhì)的作用下,出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。細(xì)胞性抗原:細(xì)菌和紅細(xì)胞第20頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月凝集原(agglutinogen):凝集反應(yīng)中的抗原。凝集素(agglutinin):凝集參與反應(yīng)的抗體第21頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月顆粒性抗原凝集素
直接凝集反應(yīng)第22頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月1、玻片凝集反應(yīng):
已知抗原+未知抗體凝集團(tuán)塊混濁?2、試管凝集反應(yīng):定量抗原+系列稀釋抗體不同程度的凝集反應(yīng)YESNO確定抗體的滴度第23頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月
在試管內(nèi)顆粒性抗原直接與抗體結(jié)合,在電解質(zhì)的作用下,出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。試管凝集試驗(yàn)第24頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月第25頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月鮮血者紅細(xì)胞受血者血清O型(抗A、抗B)A型(抗B)B型(抗A)AB型(無)O型----A型+-+-B型++--AB型+++-注:“+”表示有凝集反應(yīng),“-”表示無凝集反應(yīng)第26頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月間接凝集反應(yīng)(indirectagglutination):
將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面,然后與相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng),在電解質(zhì)的作用下,出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.第27頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月載體可溶性抗原致敏致敏顆粒NS凝集顆粒
間接凝集試驗(yàn)示意圖第28頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月
載體種類及其處理方法紅細(xì)胞:
新鮮紅細(xì)胞吸附蛋白質(zhì)的能力差。一般先醛化后應(yīng)用。聚苯乙烯膠乳顆粒:
可物理吸附蛋白質(zhì);常制備帶有化學(xué)活性基團(tuán)的顆粒第29頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月1.正向間接凝集試驗(yàn)2.反向間接凝集試驗(yàn)3.間接凝集抑制試驗(yàn)間接凝集反應(yīng)的類型第30頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月用抗原致敏載體--檢測(cè)抗體正向間接凝集試驗(yàn)第31頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月反向間接凝集試驗(yàn)用抗體致敏載體----檢測(cè)抗原第32頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月間接凝集抑制試驗(yàn)用抗原致敏載體--檢測(cè)抗原第33頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月間接血凝試驗(yàn)第34頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月間接乳膠凝集試驗(yàn)概念金黃色葡萄球菌協(xié)同凝集試驗(yàn)第35頁,課件共38頁,創(chuàng)作于2023年2月間接凝集反應(yīng)的應(yīng)用抗原的檢測(cè)
反向間接凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)病原體的可溶性抗原,也可用于檢測(cè)各種蛋白質(zhì)成分??贵w的檢測(cè)
檢測(cè)細(xì)菌、病毒、寄生蟲等感染
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