細(xì)胞工程控制培養(yǎng)技術(shù)

種子生產(chǎn)與經(jīng)營專業(yè)《作物育種技術(shù)》細(xì)胞工程控制培養(yǎng)技術(shù)教學(xué)目標(biāo)（一）固體培養(yǎng)用含瓊脂的固體培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料的方式。雖是目前最常用的培養(yǎng)方法，但培養(yǎng)物與培養(yǎng)基接觸面積小，造成培養(yǎng)基中養(yǎng)分分布不勻，營養(yǎng)不能完全利用，而且基部易積累代謝廢物，影響培養(yǎng)物的正常生長。一、常見培養(yǎng)方式（二）液體培養(yǎng)用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料的方式。包括懸浮靜止培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)和紙橋培養(yǎng)等方法。該方式培養(yǎng)物與培養(yǎng)基接觸面大，能充分利用養(yǎng)分，材料生長速度快，如細(xì)胞懸浮培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)等。但液體培養(yǎng)需要通過攪動或振動培養(yǎng)液的方法以確保氧氣的供給，需要購置搖床或發(fā)酵罐。一、常見培養(yǎng)方式（一）溫度1.最適溫度恒溫，大多植物，25℃±2℃，＜15℃或>35℃，危害2.溫度處理低溫處理，高溫處理3.調(diào)控空調(diào)器二、培養(yǎng)條件（二）光照1.光照強(qiáng)度1000～5000lx2.光質(zhì)白光，紅光，不同波長的光3.光照時間12～16h,光周期，誘導(dǎo)開花4.調(diào)控日光燈，人工/定時器暗培養(yǎng)不需要光照。二、培養(yǎng)條件（三）空氣濕度1.容器內(nèi)幾乎達(dá)100%。2.環(huán)境70%～80%，過低，過高，問題3.調(diào)控空調(diào)器除濕模式/除濕機(jī)/灑水二、培養(yǎng)條件（四）氣體植物細(xì)胞、組織培養(yǎng)中，培養(yǎng)材料的呼吸需要氧氣。封口所用材料要透氣性好，并能過濾微生物。剛剛切割后的外植體也會產(chǎn)生乙烯，引起材料的衰老，從而影響生長和分化。另外，培養(yǎng)物產(chǎn)生CO2，當(dāng)濃度過高時，也會阻礙培養(yǎng)物的生長和分化。因此，在固體培養(yǎng)中不要將培養(yǎng)物全部埋入培養(yǎng)基中，以避免窒息死亡；而在液體培養(yǎng)中，通過振蕩或淺層培養(yǎng)來保證培養(yǎng)材料有足夠的氧氣供應(yīng)。二、培養(yǎng)條件（五）pH1.范圍最適pH5.6～5.8，大于7，或小于4均不行。2.高溫高壓滅菌會使pH下降0.2～0.8，故調(diào)時高于目標(biāo)0.5。3.調(diào)節(jié)

0.1-1mol/LNaOH/HCl調(diào)節(jié)4.pH影響瓊脂的凝固能力大于6.0變硬，小于5.0不能很好凝固二、培養(yǎng)條件（六）滲透壓培養(yǎng)基的滲透壓影響植物的生長，通常為1～2個大氣壓時可促進(jìn)外植體的生長，但不同的外植體對培養(yǎng)基的滲透壓要求不同。影響滲透壓的物質(zhì)主要是無機(jī)鹽類和糖類。培養(yǎng)基中通常使用糖類來調(diào)節(jié)滲透壓，最常用的糖類為蔗糖，蔗糖使用濃度一般在2%～5%，但在幼胚培養(yǎng)、花藥培養(yǎng)和原生質(zhì)體培養(yǎng)時，蔗糖濃度一般需10%左右或更高。二、培養(yǎng)條件（一）材料初代培養(yǎng)對外植體進(jìn)行的第一次培養(yǎng)稱為初代培養(yǎng)。目的是建立無菌培養(yǎng)物，通常是誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織、不定芽、原球莖，或直接誘導(dǎo)腋芽、頂芽萌發(fā)，這是植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)中比較困難的階段，也稱為誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)過程中，要定期觀察與記錄，及時處理雜菌污染問題，獲得無菌、生活的培養(yǎng)物后，按時進(jìn)行繼代培養(yǎng)。三、外植體培養(yǎng)（二）材料繼代培養(yǎng)將培養(yǎng)一段時間后的外植體或產(chǎn)生的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過程稱為繼代培養(yǎng)。目的是為了防止培養(yǎng)材料老化，或培養(yǎng)基養(yǎng)分耗盡而造成營養(yǎng)不良，以及代謝物過多積累而產(chǎn)生毒害的影響，使培養(yǎng)物能夠得到大量繁殖，并順利地生長、分化長成完整