婦科五聯(lián)檢技術

關于婦科五聯(lián)檢技術1第1頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月2提綱背景1.陰道微生態(tài)環(huán)境2.常見的陰道疾病3.白帶檢測方法4.方法優(yōu)勢第2頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月3背景女性生殖道感染性疾病是全球重大社會問題和公共衛(wèi)生問題WHO1995年統(tǒng)計全球每年有3.33億可治愈的新病例發(fā)生，主要在發(fā)展中國家。生殖道感染造成不育達20-60%不等，發(fā)達國家36%，不發(fā)達國家達85%中國2011年8月6日公布每年有2億人感染，5%-8%患者一年中有3次以上復發(fā)，治療費達400億人民幣。60%的輸卵管性不育為感染造成。常見病、多發(fā)病導致不孕不育、流產，出生人口素質下降，增加感染HIV的機會，危害女性身心健康，對婚姻質量及家庭穩(wěn)定產生潛在和深遠影響。第3頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月4背景常見疾病發(fā)病率1、念珠菌外陰陰道炎發(fā)病率31.3%2、細菌性陰道病發(fā)病率10.44%3、滴蟲性陰道炎7.44%4、生殖道菌群失調：89.26%《中國實用婦產科雜志》2009年12月第25卷第12期《陰道炎的診治進展》文章，對6982例門診就診女性的統(tǒng)計分析。作者：吳文湘、廖秦平第4頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月52006年3月-2007年10月，對北京大學第一人民醫(yī)院婦產科門診的6982例女性就診者數(shù)據(jù)分析微生態(tài)正常微生態(tài)失調例數(shù)7506232背景第5頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月6背景BVVVCBV+VVC菌群異常pH、清潔度、H2O2功能異常72915279512292652第6頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月7一.陰道微生物群定植于陰道內的微生物主要由：細菌、真菌、原蟲和病毒組成。陰道菌群約有29種，由多種厭氧菌和需氧菌構成。1.革蘭氏陽性需氧菌及兼性厭氧菌：乳酸桿菌、棒狀桿菌、非溶血性鏈球菌、腸球菌及表皮葡萄球菌

2.革蘭氏陰性需氧菌及兼性厭氧菌：加德納菌、大腸埃希菌及摩根菌

3.厭氧菌：消化球菌、消化鏈球菌、類桿菌、動彎桿菌、梭桿菌及普雷沃菌

4.其它條件致病菌：支原體、衣原體、念珠菌第7頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月8陰道微生態(tài)環(huán)境中，保持著協(xié)調平衡的狀態(tài)雖然正常陰道內有很多種細菌存在，但是由于陰道與這些菌群之間形成生態(tài)平衡并不致病，在維持陰道生態(tài)平衡中，雌激素、乳酸桿菌及陰道PH起重要作用。陰道正常酸性環(huán)境（PH≤4.5，多在3.8-4.4）

但是陰道生態(tài)平衡一旦被打破或外源性病原體侵入，即可導致炎癥發(fā)生。若體內雌激素下降或陰道PH升高，如頻繁性交（性交后PH可上升至7.2維持6-8小時）、陰道灌洗等均可使陰道PH升高，不利于乳酸桿菌生長。此外長期應用抗生素抑制乳酸桿菌生長，或機體免疫力低下，均可使其他致病菌成為優(yōu)勢菌，引起炎癥。

第8頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月9陰道優(yōu)勢菌的特點乳酸桿菌：革蘭氏陽性桿菌、無芽孢、鞭毛、莢膜，細長有彎曲或呈球桿狀、桿狀、單個、雙極鏈狀無動力的厭氧或兼性厭氧菌。生長適宜溫度30-40℃，最適PH3.0-4.8陰道內最常見乳桿菌有：

1、嗜酸、卷曲、格氏、詹氏乳桿菌主要產H2O2

2、唾液乳桿菌

3、發(fā)酵乳桿菌等20多種第9頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月10陰道優(yōu)勢菌的作用乳酸桿菌的作用：1、分解糖原，維持陰道酸性環(huán)境2、產生多種抑菌物質：乙酸、H2O2、乳酸菌素、硬脂酸等3、競爭粘附：也稱占位性保護4、競爭營養(yǎng)：大量定制于陰道中的乳酸桿菌營養(yǎng)處于競爭優(yōu)勢狀態(tài)，利用陰道上皮細胞中的糖原，減少其它菌群的碳源供應，通過競爭營養(yǎng)物而干擾其它菌的生長。第10頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月11二.陰道最常見感染常見感染性疾病

1、細菌性陰道?。˙V）細菌性陰道?。˙acteralVaginosis,簡稱BV）它是由于陰道內微生態(tài)平衡失調，對人體有益的優(yōu)勢菌—乳酸桿菌的大量減少或消失，而加特納氏菌、動彎桿菌屬、類桿菌屬、普氏桿菌屬等厭氧菌大量增生所引起的一種無陰道粘膜炎癥性表現(xiàn)的綜合癥。第11頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月12致病機理

細菌性陰道病為內源性感染，主要是由于正常陰道菌群（乳酸桿菌)被陰道加特納桿菌、厭氧菌及人型支原體等混合菌群替代所致。促發(fā)陰道正常菌群發(fā)生轉變，發(fā)展成BV的啟動因素和機制尚不清楚。乳酸桿菌對維持正常陰道的生態(tài)內環(huán)境十分關鍵?；糂V時乳酸桿菌減少而其它細菌增多，導致乙酸濃度降低，胺類和氨增加，使陰道分泌物PH值增加，厭氧菌的代謝產物如腐胺、尸胺和三甲胺，使陰道分泌物具有魚腥樣氣味。

BV相關的病原體可產生毒力因子包括細胞毒素、唾液酸酶、粘多糖酶和膠原酶，造成上皮細胞損傷，使液體滲出及陰道鱗狀上皮細胞脫落，產生典型的細菌性陰道病的分泌物。第12頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月13流行病學

細菌性陰道病的患病率隨種族及人群而異。國外資料表明在非選擇性人群中BV的患病率為10%-20%.在性病門診就診婦女中的患病率36-50%.因該病除分泌物異常外，無其它癥狀，患者常不就醫(yī)，因此很難估計人群中的發(fā)病情況。第13頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月142、霉菌性陰道炎(VVC）

主要分為白色念珠菌、光滑念珠菌、熱帶念珠菌、克柔氏念珠菌。對909例培養(yǎng)陽性的VVC進行研究,白念珠菌占77.1%,光滑念珠菌占14.6%,克柔念珠菌占4.0%,熱帶念珠菌占2.3%,近平滑念珠菌占0.6，其它占1.2%。

第14頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月15

3、滴蟲性陰道炎（TV)

一種常見的婦科感染性疾病，1、滴蟲性陰道炎的危害主要主要是會令人難受及疼痛不適；2、滴蟲性陰道炎可并發(fā)滴蟲性尿道炎、膀胱炎、腎盂炎；3、由于滴蟲能吞噬精子，可引起不孕癥，影響生活質量；4、陰道毛滴蟲長期存在于陰道內，消耗或吞噬陰道上皮細胞內的糖原，阻礙乳酸生成，不僅破壞陰道的弱酸性環(huán)境，還有可能引起陰道細胞發(fā)育異常，誘發(fā)癌前期病變

第15頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月16

三.目前常規(guī)檢測方法：

陰道分泌物檢查鏡檢項目：

白細胞（清潔度）念珠菌（霉菌）滴蟲線索細胞（顯微鏡下很難觀察）是判定BV的一個必要條件。第16頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月171.4清潔度判斷標準清潔度白細胞上皮細胞乳酸桿菌雜菌Ⅰ度0-5（-）大量++++大量+++—Ⅱ度5-15（±）中量+++中量++少Ⅲ度(+）15-30（++）少++少+較多

Ⅳ度≥30（+++）少+—大量第17頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月18優(yōu)勢菌及病原體染色圖片優(yōu)勢菌：乳酸桿菌念珠菌白細胞、滴蟲線索細胞第18頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月19目前檢測現(xiàn)狀由于分泌物標本成份復雜，濕片高倍鏡檢下易漏檢、誤判第19頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月20目前白帶常規(guī)鏡檢特點及存在問題：1、鏡檢觀察，檢測標準不統(tǒng)一，操作人員需依賴較強的工作經(jīng)驗，人為因素影響大，主觀性強，稍有疏忽或經(jīng)驗欠缺者，容易漏檢，誤判。2、醫(yī)院標本量大、勞動強度大，易視覺疲勞致漏檢，誤判。3、一般是不進行染色，因此乳酸桿菌不好辨認；4、觀察清潔度容易受到涂片厚薄、均勻與否、細胞破碎的影響，5、觀察念珠菌容易受到雜質粒子干擾；6、觀察滴蟲容易受到溫度的影響或送檢時間及時性的影響；7、線索細胞在鏡下不好觀察，因此不好判定BV第20頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月21四、檢測方法比較細菌性陰道病唾液酸酶檢測

唾液酸酶活性增加的主要病原菌是高濃度加德納菌、普雷沃菌、消化鏈球菌、動彎桿菌等革蘭氏陰性菌和厭氧菌增多的產物。單一檢測有可能漏檢部分加德納菌、動彎桿菌，能通過脯氨酸氨基肽酶活性檢測才能彌補其不足提高BV檢出率。

第21頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月22國外研究情況

美國微生物研究協(xié)會：1991年5月在《臨床微生物研究雜志》上發(fā)表了“5分鐘快速實現(xiàn)白色念珠菌菌落的鑒定方法”均對白色念珠菌特異性酶“L-脯氨酸氨基肽酶”、“乙酰氨基葡萄糖苷酶”快速檢測的研究作了詳細報導。2005年4月在《生物醫(yī)學與藥物療法》上發(fā)表的“陰道毛滴蟲中的N-乙酰-β-D-氨基己糖酶底物特異性和抑制劑活性”說明滴蟲具有乙酰氨基葡萄糖苷酶活性第22頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月23

檢驗結果評估

項目靈敏度特異性總符合率備注乳酸桿菌pH+H2O2

95.7%（1316/1375）86.7%（507/585）93%（1823/1960）與革蘭氏染色鏡檢雙片結果對比白細胞WBC酯酶91.4%（702/768）92.8%（1106/1192）92.9%（1808/1960)與濕片鏡檢三片結果對比BV唾液酸酶+脯氨酸氨肽酶95.9%(470/490)98.1%(1442/1470)97.5%(1912/1960)與染色高倍鏡檢線索細胞≥20%加Nugent評分結果對比念珠菌乙酰氨基葡萄糖苷酶+脯氨酸氨肽酶81.9%(440/537)91.2%(1298/1423)88.7%(1738/1960)與念珠菌培養(yǎng)結果對比滴蟲乙酰氨基葡萄糖苷酶85.7%(90/105)99.1%(1839/1855)98.4%(1929/1960)與滴蟲培養(yǎng)結果對比84.7%11.2%第23頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月24鏡檢與五項聯(lián)檢比較項目顯微鏡常規(guī)鏡檢（形態(tài)學）五項聯(lián)檢（干化學酶法）設備需否需，顯微鏡需，溫育設備需否長期經(jīng)驗累積需長期經(jīng)驗積累不需，只需簡單培訓結果的主客觀性主觀人為因素大,標準不統(tǒng)一客觀，標準統(tǒng)一白細胞檢測問題受細胞破損影響不受細胞破損影響細菌性陰道病檢測檢測線索細胞，理論上存在假陽性，濕片不易觀察，存在假陰性不漏檢滴蟲檢測能檢測，但受溫度和粒子影響能檢測念珠菌檢測能檢測，但受粒子影響能檢測第24頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月25臨床實驗結果項目鏡檢檢出率五聯(lián)檢檢出率提高檢出率備注BV2.4%12.8%10.4%289份標本霉菌11%26%15%212份標本滴蟲9%12%3%180份標本第25頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月26臨床檢測意義1、女性陰道微生態(tài)狀況(清潔度）評估2、女性生殖道感染性疾病的篩查

細胞溶性陰道炎、外陰陰道念珠菌病、細菌性陰道病、滴蟲陰道炎3、輔助診斷宮頸炎、盆腔炎（子宮內膜炎、輸卵管炎）、不孕不育等4、術后感染追蹤5、療效評價

第26頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月27四、婦科聯(lián)檢試劑4.1.通過六項測定1、過氧化氫濃度測定2、白細胞酯酶活性測定3、唾液酸苷酶活性測定4、脯氨酸氨基肽酶活性測定5、氨基葡萄糖苷酶活性測定6、PH值

pH值≥4.8為滴蟲pH值≤4.6為念珠菌可檢測：1、乳酸桿菌2、白細胞（清潔度）3、細菌性陰道病4、念珠菌5、滴蟲第27頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月284.2

檢測原理１.過氧化氫濃度測定

標本中的過氧化氫經(jīng)過氧化物酶作用，釋放出新生態(tài)氧，后者在4-氨基安替比啉存在下，使TOOS氧化呈紅色或紫紅色，呈色深度與H2O2濃度成正比。2.白細胞酯酶活性測定

白細胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸鹽，釋放出溴吲哚基，后者在氧存在的條件下呈藍色，呈色深度與白細胞酯酶活性成正比。3.唾液酸苷酶活性測定

唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酰神經(jīng)氨酸，釋放出溴吲哚基遇重氮鹽起反應呈紅色或紫色，呈色深度與唾液酸苷酶活性成正比。4.脯氨酸氨肽酶活性測定

厭氧生物以及白色念珠菌有很強的脯氨酸氨肽酶活性，水解L-脯氨酸-對硝基苯胺，釋放出黃色的對硝基苯胺，呈色深度與脯氨酸氨肽酶活性成正比。5.氨基葡萄糖苷酶活性測定

白色念珠菌和滴蟲有很強的乙酰氨基葡萄糖苷酶活性，水解對硝基苯-N-乙酰-β-D-乙酰氨基葡萄糖苷，釋放出對硝基苯酚，后者在堿性條件下呈黃色，呈色深度與乙酰氨基葡萄糖苷酶活性成正比。6.pH測定

正常白帶pH為3.8-4.5，BV白帶pH>4.5，滴蟲白帶pH大于5-6，霉菌白帶pH在小于4.7。第28頁，課件共33頁，創(chuàng)作于2023年2月29過氧化氫

用來表