醌類實訓大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識

中藥化學技術醌類化合物

實訓：大黃中游離蒽醌的提取分離與檢識任務導入大黃系蓼科多年生草本植物掌葉大黃、唐古特大黃或藥用大黃的干燥根及根莖，其主要成分為蒽醌類化合物。

1.用索氏提取器提取大黃中的總蒽醌類化合物。2.配制不同pH的緩沖溶液，用pH梯度萃取法分離大黃提取液中不同酸性的游離蒽醌。3.用堿液、醋酸鎂、Molish反應分別檢識大黃提取物。4.用薄層色譜技術檢識提取物。實訓操作實訓操作步驟

（一）提取與分離1.水解藥材稱取大黃粗粉30g，加20%H2SO4水溶液100mL左右，在水浴上100℃加熱3～4h，抽濾，濾餅水洗至近中性，抽干，分散，于70℃左右干燥。2.提取總游離蒽醌成分干燥后的藥渣，粉碎，裝入濾紙筒，密封，放入索氏提取器中，加入乙醚80～100mL，連續(xù)回流提取3～4h，得乙醚提取液。乙醚提取液用5%NaOH溶液萃取3～5次（注意萃取振搖一次必須放氣），最后一次堿水層為淡紅色（乙醚與堿水比例1︰1、1︰0.5、1︰0.5、…。），合并堿水層，用濃HCl調pH2～3，靜置，析出蒽醌總苷元結晶，放置1～2h。將蒽醌總苷元結晶抽濾，80℃烘干。稱重，計算產率%。（產率%=蒽醌總苷元結晶g/大黃藥材g×100%）。實訓操作步驟3.pH梯度萃取法分離苷元（1）配制緩沖溶液配制pH8和pH9.9的緩沖液（2）大黃酸的分離：蒽醌總苷元加50～100ml乙酸乙酯溶解，置500mL分液漏斗中，加入pH8的緩沖液溶液萃取，萃取液用濃HCl調pH2～3，靜置，析出大黃酸結晶，抽濾，5ml蒸餾水洗滌，抽干，即得。（3）大黃素的分離：分離大黃酸后的乙酸乙酯液，以pH9.9的緩沖液溶液萃取，操作同上。（4）蘆薈大黃素的分離：分離大黃素后的乙酸乙酯液，再以5%NaOH溶液振搖萃取，操作同大黃酸的分離。（5）大黃素甲醚和大黃酚的分離：分離蘆薈大黃素后的乙酸乙酯液，再以5%NaOH溶液振搖萃取至淡紅色（乙酸乙酯與堿水比例1︰1、1︰0.5、1︰0.5、…），合并堿水層，同上操作。實訓操作步驟（二）提取物的鑒別1.堿液試驗取各大黃提取物結晶少許，置試管中，加1ml乙醇使溶解，加數(shù)滴10％氫氧化鈉試劑，羥基蒽醌應顯紅色。2.醋酸鎂試驗取各大黃提取物結晶少許，置試管中，加1ml乙醇使溶解，加數(shù)滴0.5％醋酸鎂乙醇試劑，羥基蒽醌應顯橙、紅、紫等顏色。3.Molish反應取水解液用20％氫氧化鈉中和為pH7，分置于試管中，加10％α-萘酚乙醇溶液1ml，振搖后傾斜試管45°，沿管壁滴加2ml濃硫酸，勿振搖，觀察兩液面交界處顏色變化。同時可用大黃酚和大黃素甲醚等作對照。實訓操作步驟（二）提取物的鑒別4.薄層色譜檢識吸附劑：硅膠CMC-Na板（10×20cm）。100℃活化1h后使用。試液：分別自制大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素的乙醇溶液（每1ml含1mg）。對照品：以上各成分對照品乙醇混合溶液（每1ml各含1mg）。展開劑：石油醚（30℃～60℃）-乙酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）。顯色劑：在可見光下觀察，記錄黃色斑點出現(xiàn)的位置，然后再用濃氨水熏蒸或噴霧5%醋酸鎂甲醇溶液，斑點應顯紅色。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。實訓思考1.pH梯度萃取法的原理是什么？適用于哪些天然藥物中成分的分離？2.大黃中羥基蒽醌化合物的極性、酸性與結