上海市臨檢中心 微生物學習班講課稿 臨床病原性真菌檢驗技術及其研究進展-王敬華

深部真菌感染發(fā)病率逐年增加，病原性真菌種類不斷增多–

人口老齡化–

廣譜抗生素廣泛使用–

侵入性醫(yī)療操作增多–

腫瘤、艾滋病、白血病、器官移植免疫力低下人群的數(shù)量不斷擴大?

感染早期–

缺乏特征性的臨床癥狀，難以獲得病原學診斷?

常規(guī)方法獲得診斷后–

真菌感染已經(jīng)擴散到多個器官，錯過搶救最佳時機?

耐藥性存在?部分真菌、尤其絲狀真菌天然耐藥近十年臨床確診肺真菌病的多中心回顧性調(diào)查20039%34%1501005016%5%0肺曲霉病

肺念珠菌病

肺隱球菌病

肺孢子菌病劉又寧，等.

近十年臨床確診肺真菌病的多中心回顧性調(diào)查.

中華結(jié)核和呼吸雜志.

2011,(2)2006年美國四大醫(yī)療中心做的一項回顧性研究延遲診斷時間與患者高死亡率密切相關45414035302520153624延遲1天延遲2天延遲3天及以上Garey

KW

et

al.

Clin

Infect

Dis

2006,

43:25–31

.?

侵襲性曲霉臨床感染死亡率更高?

未能診斷，未治療－－－－100％?

?病程10天以上－－

－－90％?

?經(jīng)驗性早期診治

－－－－40％?Lancet

355:423,2000,CID23:608,1996,Eur

J

Clin

Micro

Inf

Dis18:42,1999?

臨床實踐要求–

早期診斷–藥敏試驗及時治療臨床念珠菌引起的感染念珠菌感染的各種表現(xiàn)：如口腔黏膜、指濮、陰道、陰莖、頭皮、指甲、皮膚等處念珠菌引起的臨床深部感染皮膚病變深部侵襲播

散粘

膜脈絡膜視網(wǎng)膜炎曲霉菌引起變應性支氣管肺曲霉?。ˋBPA）曲霉性支氣管炎S.

Tasci,

Univ.

BonnInst.

of

Pathology,

Univ.

Bonn曲霉菌引起支氣管擴張（ABPA）?

43歲男性哮喘病人

薄層CT掃描?2個月后CT囊狀支氣管擴張肺曲霉球圖5.

曲霉球??71歲男性

有陳舊性肺結(jié)核雙側(cè)上葉空洞內(nèi)有大小不一的真菌球肺曲霉球???43歲男性，在肺囊腫的基礎上形成曲霉球纖支鏡檢查發(fā)現(xiàn)煙曲霉改變體位時曲霉球移動圖7.

曲霉球肺曲霉球形成過程CT特征胸部CT表現(xiàn)的演變暈輪征實變新月征D0-5D5-10D10-20Caillotetal.JClinOncol2001;19:253-9侵入性肺曲霉?。↖PA）?

病理特征：血栓、壞死、出血性梗死隱球菌感染可怕嗎？細若游絲、美如水墨——免疫力低下者的冷酷殺手真菌基礎知識真菌的特點?

真菌（Fungi）：真核細胞型微生物–

具有典型的細胞核及完善的細胞器–

不含葉綠素，無根、莖、葉的分化–

寄生或腐生方式生存，能進行無性或有性繁殖–

大多數(shù)為多細胞，少數(shù)為單細胞真菌的形態(tài)學?

單細胞和多細胞–

單細胞：?

圓形或卵圓形，直徑3μm

～15μm，以出芽方式繁殖，成熟后脫落成獨立的個體?

新生隱球菌和白念珠菌等–

多細胞：?

由菌絲（hypha）和孢子（spore）組成，菌絲與孢子交織在一起?

各種霉菌的菌絲和孢子形態(tài)不同，是鑒別真菌的重要標志細胞壁?

骨架：以幾丁質(zhì)（Chitin）和葡聚糖為主–

絲狀菌骨架組成以幾丁質(zhì)的含量最高，其作用與菌絲生長和芽管形成有關–

酵母菌的骨架組成則以葡聚糖的含量最高，是維持真菌細胞外形堅固性的分子基礎mannoproteinsβ1,3β1,6glucansPPLβ1,3

glucanchitinergosterolbilayersynthase?

基質(zhì)：由多糖、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)及無機鹽組成–

多糖種類：葡聚糖、葡糖胺、葡萄糖、幾丁質(zhì)和半乳糖等?

含量在同一真菌細胞壁的不同發(fā)育階段明顯不同，直接影響真菌的形態(tài)變化–

蛋白質(zhì)：可單獨或與多糖組成糖蛋白存在，糖蛋白也是細胞壁抗原的分子基礎?

具酶活性，水解酶居多，可分解基質(zhì)，使營養(yǎng)物質(zhì)易進入胞內(nèi)?

甘露聚糖蛋白含量最高–

脂質(zhì)：以磷質(zhì)為主，脂質(zhì)的存在可保持水分不被蒸發(fā)–

無機鹽：磷為主，另含少量鈣和鎂元素菌絲?

菌絲（Hypha）–

管狀，直徑2μm～10μm，長度隨生長條件而異–

是孢子以出芽方式繁殖時形成的，適宜的環(huán)境條件下由孢子長出芽管，逐漸延長成菌絲?

菌絲體（mycelium）–

菌絲可長出許多分枝，并交織成團，成為菌絲體孢子?

孢子(Spore)–

真菌繁殖體：有性孢子和無性孢子–

主要分為分生孢子、葉狀孢子和孢子囊孢子分生孢子（conidium）：由生殖菌絲末端的細胞分裂或收縮形成，也可由菌絲側(cè)面出芽形成–

大分生孢子，

由多個細胞組成，體積較大，多呈梭狀、棒狀或梨狀，鑒定意義大–

小分生孢子，

僅由一個細胞構(gòu)成，體積小孢子囊孢子（sporangiospore）：?

菌絲末端膨大形成孢子囊，內(nèi)含許多孢子，孢子成熟后則破囊而出?

如毛霉、根霉等形成孢子囊孢子葉狀孢子(Thallospore)：由菌絲內(nèi)細胞直接形成?

芽生孢子（Blastospore）：由細胞出芽生成，多數(shù)芽生孢子生長到一定大小即與母體脫離–

不脫離，形成菌絲狀，被稱為假菌絲(pseudohypha)–

隱球菌和念珠菌等是以芽生孢子的方式繁殖，念珠菌菌易形成假菌絲?

厚壁孢子（Clamydospore）：由菌絲內(nèi)胞漿濃縮、胞壁增厚形成–

是真菌抵抗不利環(huán)境而形成的一種孢子形式，其代謝降低，抵抗力增強，在適宜的條件下又可出芽繁殖?

關節(jié)孢子（Arthrospore）：由菌絲細胞壁變厚并分隔成長方形的節(jié)段而形成，多出現(xiàn)于陳舊的培養(yǎng)物中常見真菌孢子大分生孢子

芽生孢子和假菌絲

厚壁孢子

關節(jié)孢子

孢子囊孢子

小分生孢子（小孢子菌）

（念珠菌）

（念珠菌）（球孢子菌）

（毛霉）（曲霉）真菌病原學分類真菌門分類真菌門鞭毛菌

接合菌亞門

亞門子囊菌亞門擔子菌亞門壺

絲菌

殼綱

菌接

毛

半

外

核

盤

蟲

腔

真冬

層

腹孢

菌

菌菌

綱

綱卵菌綱腔孢菌合

菌菌

綱囊菌菌

菌

囊

菌綱

綱

菌

綱囊菌綱囊菌綱真菌的臨床病原學分類?

酵母樣真菌：念珠菌、隱球菌、馬拉色菌、酵母、紅酵母、毛孢子菌等?

絲狀真菌：曲霉、青霉、毛霉、皮膚癬菌、帚霉、支孢、瓶霉…?

雙相真菌：組織胞漿菌、球孢子菌、副球孢子菌、北美芽生菌、孢子絲菌、馬內(nèi)菲青霉念珠菌屬?

常見：–

白念–

熱帶–

克柔–

光滑?

少見：–

都柏林–

涎沫–

挪威–

乳酒–

季也蒙–

法氏–

近平滑隱球菌屬?

包括17種和6個變種,代表菌種為新生隱球菌。?

莢膜多糖：主要的致病物質(zhì)，可能與抑制機體免疫功能及增加免疫耐受性有關?

新生隱球菌一般為外源性感染，主要的入侵途徑是肺。大多數(shù)感染者癥狀不明顯，且能自愈?

新生隱球菌也可從肺部經(jīng)血行播散至其它部位，最易侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)，主要引起腦膜的亞急性和慢性感染，死亡率高，尚可播散至皮膚、粘膜、骨和內(nèi)臟器官等曲

霉?

曲霉屬真菌有數(shù)百種，其中能感染人和動物的有20余種?

最常見的是煙曲霉（A.

fumigatus），主要由呼吸道侵入，引起支氣管哮喘和肺部感染，也可侵入血流播散至各器官引起全身性感染?

有些曲霉能產(chǎn)生毒素：黃曲霉（A.

flavus）、赭曲霉（A.ochraceus）、雜色曲霉（A.

versicolor）、煙曲霉（A.fumigatus）和寄生曲霉（A.

parsiticus）等?

黃曲霉產(chǎn)生的黃曲霉毒素（aflatoxin，

AF）具有極強的毒性和致癌性，可引起真菌毒素中毒癥和癌，主要誘發(fā)肝癌毛

霉毛霉目毛霉科小克銀漢霉科瓶霉科枝霉科

共頭霉科毛

根毛

犁頭霉囊托根霉屬霉屬

屬霉

霉屬

屬真菌感染的實驗室檢驗（一）形態(tài)學檢驗直接鏡檢、培養(yǎng)鑒定?直接鏡檢:經(jīng)典的方法，快速、簡便,但陽性率較低菌落觀察：培養(yǎng)后典型菌落觀察?

新生隱球菌：墨汁涂片中可顯厚的透亮的莢膜?

?

念珠菌：假菌絲及芽管?

?

馬拉色菌：短粗如香蕉狀的菌絲和圓形的孢子?

?

著色真菌：金黃色的厚壁孢子?

?

毛霉：粗大而不分隔的菌絲?

?

鼻孢子菌：含大量內(nèi)孢子的孢子囊孢子注

培養(yǎng)鑒定:確定真菌的種類,不能區(qū)分定值與感染，組織病理學檢查是確診真菌臨床感染的唯一金標準)典型的菌落、孢子和菌絲血清芽管試驗陽性(低倍)血清芽管試驗陽性(高倍)隱球菌屬直接鏡檢：墨汁染色涂片鏡檢最常用?

腦脊液標本離心后取沉淀，滲出液和體液可直接涂片用印度墨水染色檢查，對痰液和膿液則需先用10％KOH處理再加墨水染色?

染色后鏡檢，見有圓形或橢圓形的菌體，直徑4μm～20μm，其外有寬厚的莢膜，寬3μm～5μm

，非致病性隱球菌無莢膜?

部分菌體可見出芽，但不形成假菌絲新生隱球菌（墨汁染色）莢膜菌體2013-04-18HuashanHospital175分離培養(yǎng)：SDA，于30℃左右培養(yǎng)最佳?

新隱在25℃和37℃均能生長，非致病性隱球菌37℃不生長?

2～5天即形成典型的隱球菌菌落（？）：表面粘稠，初為乳白色，后轉(zhuǎn)成橘黃色，能分解尿素?

從宿主任何部位分離出新生隱球菌均有意義?

腦脊液培養(yǎng)陽性有確診價值，而呼吸道分泌物培養(yǎng)陽性而又無臨床癥狀者需尋找其它支持證據(jù)?

培養(yǎng)出淺白隱球菌或羅倫隱球菌也需要對臨床情況再次核實并重復鏡檢和培養(yǎng)136新生隱球菌（米粉吐溫80培養(yǎng)基，鏡下）曲

霉?

由有橫隔的分枝菌絲和有特征性的分生孢子構(gòu)成?

菌絲特化形成厚壁而膨大的足細胞，在其垂直方向生出直立的分生孢子梗，在其頂部膨大形成頂囊?

頂囊表面生出小梗，自小梗頂端形成具有各種形狀、顏色和紋飾的分生孢子，依據(jù)分生孢子形成的各種特征不同可鑒別各種曲霉?

在SDA上，室溫及37℃～45℃條件下均能生長，形成絨毛狀或絮狀菌落，可呈不同顏色，菌落顏色是曲霉分類的主要特征之一?

（氣味？）煙曲霉煙曲霉煙曲霉感染肺組織內(nèi)45°分枝有隔菌絲（GMS染色）黑曲霉黑曲霉黑曲霉構(gòu)巢曲霉構(gòu)巢曲霉土曲霉土

曲

霉黃曲霉毛

霉孢子囊孢子稻根根霉稻根根霉共頭霉雙相真菌馬內(nèi)菲青霉馬內(nèi)菲青霉SDA25℃培養(yǎng)產(chǎn)生特征性紅色色素馬內(nèi)菲青霉2014/6/19Huashan

Hospital653～7個瓶梗的帚狀枝

分生孢子光滑真菌感染的實驗室檢驗（二）生化及代謝檢驗念珠菌屬?

CHROM培養(yǎng)基：–

白念：藍綠色–

熱帶：藍色–

光滑/克柔：粉紅–

近平滑：淺白自動化鑒定及API系統(tǒng)真菌感染的實驗室檢驗（三）免疫學檢驗免疫檢驗方法針對真菌細胞壁成分、真菌胞內(nèi)酶等抗原物質(zhì)，以及相應的抗體的檢測G試驗GM試驗隱球菌莢膜多糖檢測G和GM試驗被列入真菌診斷和治療指南?

歐洲癌癥治療研究組織(EORTC)?

美國國家過敏癥與傳染病研究所霉菌病研究組(MSG)批準用于真菌診斷。?

中國血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標準與治療原則1-3-β-Dglucan

（葡聚糖）檢測G試驗1,3-β-D葡聚糖檢測方法?

真菌細胞壁成份，占50%以上?

真菌特有，其他微生物、動物及人的細胞不含該成份?

主要用于念珠菌和曲霉菌感染診斷?

不能檢測：–

新型隱球菌(莢膜、α‐葡聚糖）–

結(jié)合菌（毛霉、根霉、犁頭霉等，細胞壁不含葡聚糖）?

目前國內(nèi)G試驗有濁度法和發(fā)色法?

診斷閾值不相同，這也是G試驗面臨的很大問題，需要盡快實現(xiàn)標準化。濁度法原理顯色法原理產(chǎn)生假陽性原因?

污染（無熱源的試管、槍頭和蒸餾水等）?

血液透析、腹膜透析?

紗布或其他醫(yī)療物品（外科手術）?

血液制品（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等）?

抗腫瘤多糖（香菇多糖、裂殖菌多糖）?

疾病導致病人自身丙種球蛋白增高、黃疸、溶血、乳糜血標本?

使用頭孢類藥物、多粘菌素、厄他培南、磺胺藥物等?

某些細菌敗血病患者（尤其是鏈球菌敗血癥）G試驗注意事項?

（1）嚴格按照操作規(guī)程，防止污染，保持環(huán)境潔凈。?

（2）注意每批試劑使用前驗證標準曲線有效性。?

（3）試劑和儀器配套，儀器自檢和定期校準。?

（4）操作人員要經(jīng)過培訓，操作熟練?

（5）開展室內(nèi)質(zhì)控，保證測定的精密度和準確度。半乳甘露聚糖檢測GM試驗?

曲霉菌細胞壁上一種多聚糖抗原?

抗原是β-（1-5）呋喃半乳糖殘基?

菌絲生長時，從菌絲頂端釋放，是最早釋放的真菌抗原?

GM釋放量與菌量成正比，反映感染程度。?

可以用于血清、腦脊液、胸水、BALF標本檢測?

雙抗夾心法、競爭法

敏感性1ng/ml假陽性原因?

（1）半合成青霉素如哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉維酸?

（2）與其他細菌或真菌成分有交叉反應?

（3）腸道中定植曲霉釋放GM進入血液?

（4）谷物食物中存在GM，通過受損腸粘膜進入血液?

（5）接受白蛋白、免疫球蛋白和其他營養(yǎng)液治療?

（6）血液透析?

（7）接受心肺旁路手術?

（8）自身免疫性肝炎等免疫性疾病?

（9）新生兒和兒童（FP

83%，與雙歧桿菌交叉反應）假陰性原因?

（1）抗體低度過高，出現(xiàn)前帶現(xiàn)象?

（2）血中半乳甘露聚糖含量低，很快被清除?

（3）抗真菌藥物使用，抑制菌絲生長從而減少GM分泌?

（4）僅僅局部感染?

（5）菌絲少，侵血管性弱?

（6）患者細胞免疫功能正常隱球菌莢膜多糖抗原GXM檢測?

分為A、B、C、D

、AD五個血清型，在我國大多為A型?

隱球菌乳膠凝集試驗是以乳膠顆粒為載體，將新生隱球菌抗體球蛋白標記在其表面，制成致敏乳膠懸液，用于檢測患者腦脊液或血清標本時，如標本中存在新生隱球菌的莢膜多糖抗原，可產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應。?

ELISA方法(定量)真菌感染的實驗室檢驗研究進展基于核酸和蛋白質(zhì)的快速檢測PCR技術?

巢式?

多重PCR?

RT-PCR?

FRLP?

芯片技術基于蛋白質(zhì)的快速檢測–

抗原抗體檢測–

真菌的生化檢測–

蛋白質(zhì)譜檢測40003000200010000400050006000700080009000100001100012000m/z?

核酸提取–

輔助破壁：液氮研磨、玻璃珠、石英砂，酶解及聯(lián)合–

手工方法：玻璃珠+煮沸,石英砂+

CTAB–

試劑盒?

國產(chǎn)：天根，田恩澤，上海工碩….?

進口：OMEGA

,

Norgen

Biotek

,life自動化核酸提取?

如FastPrep‐24樣品快速制備系統(tǒng)?

PCR擴增–

巢式，多重，RT‐PCR?

檢測–

電泳，測序，熒光信號，溶解

曲線分析，RFLP結(jié)合，芯片技術靶基因選擇備選靶基因?ITS?5.8S?18S?28S?D1?D2…ITS

區(qū)vs

D1

D2區(qū)?

146株絲狀真菌ITS區(qū)擴增與選擇28S亞單位的D1D2區(qū)擴增效果比較?

ITS區(qū)擴增

引物?

ITS

1(5‐TCCGTCGGTGAACCTGCGG‐3)?

ITS

4

(5‐TCCTCCGCT

TAT

TGATATGC‐3)?

D1/D2區(qū)擴增引物?

NL‐1

(5‐GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG‐3)?

NL‐4

(5‐GGTCCGTGTTTCAAGACGG‐3)Kwiatkowski,

N.P.,et

al.

2012J

Mol

Diagn

14:393‐401.對比結(jié)果–

與基因測序法比較：D1/D2擴增符合率97.2%，ITS擴增符合率97.7%–

18株（12.3%）ITS擴增失敗–

不是所有的真菌都適合ITS測序分析–

2種方法聯(lián)合，100%黑曲霉巴西橡膠曲霉Kwiatkowski,

N.P.,et

al.

2012J

Mol

Diagn

14:393‐401.多重PCR技術?

可同時檢測混合感染的多種真菌。?

需合理設計引物，優(yōu)化擴增條件。?

每對引物的靈敏度介于100～1000個DNA分子，相當于使用1～10個細胞的純基因組DNA進行擴增，明顯縮短了檢測時間。C.

glabrata,

C.

tropicalis,

C.

parapsilosisA.

fumigatus,

C.

albicans,

C.

neoformansJ

Clin

Microbiol,

2002,

40(8):

2860‐2865引物結(jié)果酵母菌檢測效果好！J

Clin

Microbiol,

2002,

40(8):

2860‐2865RT-PCR技術?

特異性強?

降低污染?

自動化程度高?

檢測閾值是500pg～50fg?

較好的試驗設計、合適的引物及探針序列?

提高檢測的敏感性和特異性(Costa

et

al.,

2001;

Loeffler

et

al.,

2000;

Spiess

et

al.,

2003).商品化試劑盒?

LightCycler

?

SeptiFast

Test

MGRADE（羅氏診斷）–

直接檢測–

基于種特異性18S和5.8S

rDNA間隔區(qū)設計–

可檢測5種酵母菌和煙曲霉（白念，光滑念，熱帶念，克柔念，近平滑念）–

利用熒光信號和溶解曲線技術?

MycAssay?

Aspergillus

(Myconostica

Ltd.英國)Mussap,

M.,

et

al.2007.

J

Chemother

19

Suppl

2:31‐34.RFLP方法–

PCR擴增各種真菌標準菌株ITS‐2基因5種核酸內(nèi)切酶–

酶切–

電泳記錄電泳圖譜–

建資料庫

構(gòu)建真菌標準菌株圖譜資料庫–

檢測臨床標本

與標準圖庫進行RFLP并鑒定PFGE原理圖RFLP效果圖基因芯片基本原理技術路線合成、末端氨基化探針制備ITS-2、ERG11設計點樣標準菌株DNA提取化學封閉ITS‐2、ERG11

PCR酶切、電泳RFLP真菌培養(yǎng)基因芯片標本預處理標本鏡檢基因芯片檢測技術?

1.探針制備?

a.鑒定探針設計–

檢索數(shù)據(jù)庫中20種真菌基因序列，進行設計3類探針–

第I類

真菌通用探針，能夠與所有真菌雜交–

第II類

真菌種特異性探針，鑒定到種–

第III類

陽性對照探針，雜交體系有效性和掃描坐標?

b.耐藥基因探針設計–

選擇已證實可導致氟康唑耐藥ERG11基因6種點突變–

人工合成與突變點及其等位基因互補寡核苷酸鏈作探針?

c.探針氨基化修飾–

合成探針進行3

ˊ端氨基化修飾?2.點樣

、化學封閉?–

選擇

CEL公司醛化載玻片，–

Smart

Arrayer

48微陣列芯片點樣系統(tǒng)?

3.基因芯片性能評價與臨床標本檢測–

特異性、靈敏度、重復性進行評價?

基因芯片直接檢測臨床標本?

多重PCR擴增臨床標本ITS‐2、

ERG11靶基因純化并片段化，用TDT熒光素標記?

芯片雜交和檢測?

激光共聚焦掃描儀GenePix4000?

GenePixPro軟件基因芯片檢測效果圖Matrix-assisted

laser

desorptionionization–timeofflightmass

spectrometry

(MALDI‐TOF

MS)Bruker

BiotyperVitek

MS109質(zhì)譜技術基本原理?

化學基質(zhì)包埋細菌或真菌提取物?

激光源激發(fā)待測物質(zhì)離子化?

電場驅(qū)動離子化物質(zhì)朝檢測區(qū)移動?

不同大小的分子飛行的時間不等，轉(zhuǎn)化為可識別的質(zhì)譜峰圖（2-20kDa）?

質(zhì)譜峰和已知的微生物質(zhì)譜峰圖數(shù)據(jù)庫比對，實現(xiàn)準確鑒定?

主要基于核糖體蛋白峰譜基本原理示意圖樣品靶板入口真空系統(tǒng)檢測器飛行管樣品靶板

細菌與基質(zhì)質(zhì)譜圖Vetik-MS上機前預處理1.

用API

菌液培養(yǎng)基濕潤拭子并取適量絲狀真菌(孢子或菌絲)，（應避免取到瓊脂）。2.

將菌絲加入含300μL

API

菌液培養(yǎng)基的2

mlEppendorf

管中。3.

加900μL

99.8%、96%

或無水乙醇。4.

10,000

rpm

離心2

分鐘。5.

用加樣器吸出上清丟棄。6.

加40

μL70%甲酸并渦旋震蕩混合7.

10,000

rpm離心2分鐘8.

取1

μL

上清加在靶板選定的點位，待干燥9.

加1

μL

CHCA

基質(zhì)，待干燥后上機檢測Vetik-MS上機檢測流程與已知微生物標準菌株峰圖比較2.4

報告模式酵母菌鑒定應用評價Vitek

MS

system

(bioMerieux，Vitek

MS

v2.0

database）收集酵母菌852株20個屬，31個種823

株

(96.6%)

鑒定到屬819

株

(96.1%)

鑒定到種24株(2.8%)

鑒定失敗5株(0.6%)

鑒定錯誤

（包括1株白念）評價：優(yōu)于現(xiàn)有鑒定手段.Westblade,

L.F.

et

al.

2013.

J

Clin

Microbiol

51:2267‐2272絲狀真菌鑒定應用評價傳統(tǒng)鑒定VS

MS絲狀真菌625株(58個種)正確率：傳統(tǒng)法80%

(501/625)質(zhì)譜法

89%

(556/625)非曲霉

正確率高于傳統(tǒng)方法（61%

：31%）注：驗證方法：二者結(jié)果不一致，對ITS測序評價：1）能提高絲狀真菌鑒定水平，但重復性差（？）2）參考菌庫有待完善和優(yōu)化3）鑒定酵母菌的效果優(yōu)于絲狀真菌Ranque,

S.,

et

al.

2013.

Mycoses快速鑒定陽性血培養(yǎng)?

采用MALDI-TOF系統(tǒng)對BDBACTEC?

陽性血培養(yǎng)瓶進行細菌鑒定。通過BrukerSepsistyper操作，數(shù)分鐘內(nèi)即可獲得鑒定結(jié)果.操作簡便-

僅需Eppendorf管-

僅需2次離心步驟檢測時間：5min正確鑒定率:

>80%Schubertetal.,ECCMID2010性價比分析Time/

test(hour)FTECost/test*SupplyCost/testTotalCostRapidBiochemicals0.100.14$4.14$5.79$0.29$4.43AutomatedBiochemicals$9.59$15.38Long

BiochemicalsSequencing0.330.730.05$13.65$30.19$2.07$5.32$20.02$0.24$18.97$50.21$2.31MassSpectrometrySlide

courtesy

of

Robin

Patel,

MD

122真菌質(zhì)譜檢驗技術發(fā)展趨勢完善資料

標準菌株質(zhì)譜峰圖庫建立體系

檢測方法多中心價值標

準

化

標本前處理操作的標準化快速檢驗

臨床標本直接鑒定技術開發(fā)功能

研究用于藥敏試驗的質(zhì)譜技術降低成本

儀器生產(chǎn)和使用成本真菌藥敏試驗指南CLSIEUCAST?

M27‐A3酵母菌肉湯稀釋法?

E.DEF

7.2

酵母菌肉湯稀釋法–

M27‐S4

QC

&

BPs?

M38‐A2絲狀真菌肉湯稀釋法?

E.DEF

9.1

產(chǎn)孢絲狀真菌肉湯稀釋法?

M44‐A2酵母菌紙片擴散法?

真菌臨床折點V6.1–

M44‐S3

QC

&

BPs?

M51‐A絲狀真菌紙片擴散法–

M51‐S1

QC

&

ECVsPUMCH

W.Yao124CLSI和EUCAST酵母菌肉湯稀釋法方法學比較D

r.

Nelesh

GovenderPUMCH

W.Yao125念珠菌屬唑類藥物臨床折點CLSI

M27‐S3S≤8;SDD=16;CLSI

M27‐S4EUCAST

V6.1藥物cal,

ctr,

cpa,

clu:S≤2;

SDD=4;

R≥8cal,

ctr,

cpa:

S≤2;

R>4氟康唑R≥32cgl:

SDD≤32,

R≥64cgl:

S≤0.002,

R>32>6mg/kg/dayckr:

天然耐藥S≤0.125;SDD=0.25‐0.5;

SDD=0.25‐0.5;ckr:

天然耐藥S≤0.125;/伊曲康唑伏立康唑R≥1R≥1S≤1;SDD=2;R≥4cal,

ctr,

cpa:

S≤0.125;I=0.25‐