ELISA、WesternBlot、免疫組化的具體區(qū)別

ELISA、WesternBlot 、免疫組化的具體區(qū)別免疫組化：是融合了免疫學(xué)原理（抗原抗體特異性結(jié)合）和組織學(xué)技術(shù)（組織的取材、固定、包埋、切片、脫蠟、水化等），通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色，來(lái)對(duì)組織（細(xì)胞）內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究(主要是定位)。樣本是細(xì)胞或組織，要在顯微鏡下觀察結(jié)果，可能出現(xiàn)膜陽(yáng)性、質(zhì)陽(yáng)性和核陽(yáng)性。elisa（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）：用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測(cè)的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒(méi)有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開(kāi)始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面， 從而使后來(lái)形成的抗原抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。免疫組化和elisa 所用到的原理 大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測(cè)的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。 Elisa 多用于定量分析，其靈敏度非常高。westernbolt ：先要進(jìn)行SDS，然后將分離開(kāi)的蛋白質(zhì)樣品用電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)移到固相載體上，而后利用抗原-抗體-標(biāo)記物顯色來(lái)檢測(cè)樣品，可以用于定性和半定量。1/3學(xué)習(xí)交流文檔免疫學(xué)三大工具，免疫組化、 Western、ELISA，分別用于定位，定性和定量。以下western和Elisa 的區(qū)別不是原創(chuàng)，是找的資料。westernblotting 可以看到特異性的條帶，但是定量比較煩elisa 可以直接讀出濃度，但是如果抗體有非特異性結(jié)合，那得到的數(shù)值就不可信。WB只能半定量,但是可以檢測(cè)細(xì)胞膜蛋白 ,這點(diǎn)ELISA做不到ELISA可用定量方法檢測(cè)蛋白 ,也就是說(shuō)可以觀察不同濃度刺激物對(duì)目的蛋白的影響WB所檢測(cè)的一般是抗原，而 Elisa 抗原抗體都可以檢測(cè)。WB所檢測(cè)的抗原可以知道其分子量的大小，或是否是多聚體、降解產(chǎn)物等，一句話，WB可以確定所用抗體是與那種蛋白起作用的；而Elisa無(wú)能為力，一鍋端了。WB所適用的一抗一般是線性位點(diǎn)的， ELISA線性或構(gòu)象型抗體都可以使用。從另一個(gè)意義上講， WB可以做抗體是線性位點(diǎn)還是構(gòu)象型位點(diǎn)的補(bǔ)充判定，而 Elisa 不行。WB一次處理量就是一塊膠版， 10-20個(gè)樣品最多了。Elisa 一塊96孔板一次可以處理 96個(gè)樣本，可以設(shè)置多個(gè)復(fù)孔、對(duì)照、梯度樣等來(lái)提高檢測(cè)的可信度。2/3學(xué)習(xí)交流文檔WB操作常見(jiàn)的非特異性條帶，膜本底差，顯色不好等等缺點(diǎn)在 Elisa上表現(xiàn)得要好得多