【幽門螺桿菌免疫學(xué)抗體檢測方法研究綜述4500字（論文）】

幽門螺桿菌免疫學(xué)抗體檢測方法研究綜述目錄TOC\o"1-2"\h\u13739幽門螺桿菌免疫學(xué)抗體檢測方法研究綜述 17772摘要 1154001引言 1112852免疫學(xué)抗體檢測方法 2198502.1免疫印跡技術(shù) 2281392.2膠乳免疫比濁法 3136302.3膠體金法 34642.4酶免疫法 383552.5臨床應(yīng)用 4128033小結(jié) 5522參考文獻(xiàn) 6摘要幽門螺桿菌（helicobacterpylori，HP）是慢性胃炎，胃癌等的主要致病病因，HP感染是常見的一種全球性和廣泛傳播的疾病，我國一直都是幽門螺桿菌的高感染和胃癌的高發(fā)國家，其感染造成了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，WHO已經(jīng)將HP列為胃癌的頭號致癌因子。因此選擇合理的檢查方法，給患者提供可靠的檢查結(jié)果，進(jìn)行有效的治療，阻斷炎癥，潰瘍進(jìn)一步向惡性腫瘤發(fā)展，具有臨床價(jià)值。本文就HP免疫學(xué)抗體檢測的方法、應(yīng)用和優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行綜述。關(guān)鍵詞：幽門螺桿菌；臨床價(jià)值；免疫學(xué)抗體檢測1引言幽門螺桿菌（helicobacterpylori，HP）是人類胃部疾病的重要致病菌之一，與胃潰瘍、慢性胃炎、胃癌及十二指腸潰瘍的關(guān)系較為密切[1]，幽門螺桿菌是一種革蘭陰性致病菌，全球有超過50%的人感染了H.pylori，在一些社會經(jīng)濟(jì)不發(fā)達(dá)的地區(qū)，感染率已超過總?cè)藬?shù)的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[2]。胃內(nèi)局部pH值可達(dá)到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：幽門螺桿菌產(chǎn)生尿素酶（Urease），分解尿素產(chǎn)生氨氣能夠中和胃的酸性環(huán)境ADDINNE.Ref.{705235D9-2BB9-4FD7-A8A0-FD28A72AC6C5}[3]；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻擊，或者阻礙了先天性免疫功能和適應(yīng)性免疫ADDINNE.Ref.{C9F21090-5AFD-48D2-9D24-A2DF13AADCCC}[4-6]應(yīng)答NE.Cms_Insert；另外，細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白A(cytotoxin-associatedgeneA，CagA)、空泡毒素A(vacuolationassociatedgeneA，VacA)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-glutamyltranspeptidase，GGT）還可以誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞發(fā)生免疫耐受，抑制T細(xì)胞的增殖和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，使H.pylori免受T細(xì)胞的攻擊ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[7]。幽門螺桿菌感染導(dǎo)致人體胃消化不良，患萎縮性胃炎、腸化生、消化性潰瘍，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[8，9]。除了胃內(nèi)消化性疾病之外，H.pylori還會導(dǎo)致一些胃外疾病，比如神經(jīng)疾病阿爾茨海默癥ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[10]、血液疾病免疫性血小板減少癥ADDINNE.Ref.{AAD2EFEA-EB28-42B3-AC0E-9204260E07E5}[11]、肝膽疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[12]等。因此，根除H.pylori對于治療胃部疾病和其他與H.pylori相關(guān)疾病十分重要。目前臨床治療中H.pylori抗生素耐藥性不斷提高，甲硝唑、克拉霉素的耐藥性在亞洲高達(dá)99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[13，14]。隨著人們對HP的不斷研究，幽門螺桿菌的檢測方法也在改進(jìn)與創(chuàng)新，并且在臨床上得到廣泛應(yīng)用。根據(jù)HP檢測時(shí)是否需要從胃部取材，可以將檢測分為2類：侵入性檢測和非侵入性檢測[15]。侵入性檢測主要包括病理學(xué)檢測法、病原學(xué)檢測法；非侵入性檢測主要有免疫學(xué)檢測法、尿素呼氣實(shí)驗(yàn)檢測法。從檢驗(yàn)工作者和患者的感受來講，一般認(rèn)為最好的方法是能簡便、快速、無創(chuàng)、還有準(zhǔn)確測試的方法。因此，免疫學(xué)抗體檢測更易接受和采用且更有研究意義。2免疫學(xué)抗體檢測方法2.1免疫印跡技術(shù)免疫印跡技術(shù)（immunoblotting）免疫印跡是一種新的免疫化學(xué)技術(shù)。用聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS–PAGE）將HP中分子量大小不同的蛋白組份分離，得到的不同區(qū)帶與待檢血清中相應(yīng)抗體相結(jié)合，通過顯色來判斷患者的HP感染情況。HP臨床分型一般將其分為兩類:即I型和II型。有研究顯示，HP分型檢測對臨床工作更有指導(dǎo)意義。若為I型感染，主張積極給予抗HP治療，若為II型感染，可不給予治療，隨訪后再觀察，避免了抗生素的濫用。臨床上使用于診斷HP感染的檢測方法很多，而免疫印跡法是非侵入性的診斷檢測方法，還因其具有敏感性高、特異性強(qiáng)、檢測方法簡單、時(shí)間短等優(yōu)勢，免疫印跡法檢測門診消化不良患者的HP感染簡便易行，同時(shí)在臨床上對抗HP的治療中也具有很好的指導(dǎo)意義[16]。免疫印跡法降低對檢查者的創(chuàng)傷，且檢查費(fèi)用較一般常規(guī)方法更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，減輕了經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，使檢測幽門螺桿菌應(yīng)用率提高，從而有效避免其他疾病滋生。并用其他技術(shù)對菌株進(jìn)行特性分析，可控制最佳治療效果及毒副作用，把握治療HP的明確方向?？梢栽鰪?qiáng)診斷效果，為臨床治療感染幽門螺桿菌提供指導(dǎo)方向，值得在臨床推廣[17]。2.2膠乳免疫比濁法膠乳增強(qiáng)免疫比濁法是將一定量的抗原或抗體標(biāo)記到一定顆粒直徑大小的膠乳顆粒上，制備成膠乳溶液，與相應(yīng)的抗體或抗原溶液混合后，會發(fā)生抗原抗體反應(yīng)，形成一定的濁度，通過對濁度變化的檢測來判定抗體或抗原濃度的方法[18]。這是其他方法無法比擬的。有研究用膠乳免疫比濁法檢測HP抗體試劑的性能評價(jià)，得出其可用于全自動生化分析儀，，具有定量檢測、操作簡便、通量大、成本低等優(yōu)勢，適合體檢人群HP感染的篩查和大規(guī)模人群的流行病學(xué)調(diào)查。并且認(rèn)為膠乳比濁法定量檢測血清胃HP抗體的準(zhǔn)確性、線性、精密度、抗干擾等各性能指標(biāo)均可以符合臨床檢測的要求[19]。而另一項(xiàng)試驗(yàn)研究通過膠乳免疫比濁法與金標(biāo)法和14C呼氣試驗(yàn)分別對HP檢測，對其結(jié)果進(jìn)行比對分析得知，乳免疫比濁法的檢測結(jié)果假陽性和假陰性率高，與尿素14C呼氣試驗(yàn)檢測結(jié)果的一致性很不理想。該方法學(xué)敏感性較差，其方法學(xué)還有待改進(jìn)[20]。這點(diǎn)與前一個報(bào)道不一致?？赡苁窃噭┑牟町?。2.3膠體金法膠體金法是檢測幽門螺桿菌抗體的方法，是利用先進(jìn)的金標(biāo)技術(shù)，用膠體金作為顯色劑或示蹤標(biāo)志物，用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。這種方法具有明顯的易操作、無痛并且可在加樣五分鐘內(nèi)顯示結(jié)果的快捷特點(diǎn)[21]。在有做過的試驗(yàn)可以看出，在與胃鏡下的快速尿素酶試驗(yàn)進(jìn)行比較，膠體金法的HP陽性檢出率為65.71%，快速尿素酶試驗(yàn)的HP陽性檢出率為67.14%，相比得到的P>0.05，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而且膠體金法檢測的敏感度為91.24%，特異性為89.76%，都明顯高于胃鏡下快速尿素酶試驗(yàn)，因此膠體金法在檢測HP時(shí)具有很高的可靠性?？傊z體金法檢測HP不僅具有很高的陽性檢出率，而且檢測所需時(shí)間短，操作無需專業(yè)人士，檢測無疼痛，更易于被患者接受，無禁忌使用的患者，具有可高的可靠性，非常適合臨床使用[22]。2.4酶免疫法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是用酶標(biāo)記抗體，并將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相載體表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗滌，用最廣的技術(shù)。ELISA可以采集病人的血液、唾液、尿液及糞便等標(biāo)本檢測抗體。有研究血清HP抗體ELISA檢測法的優(yōu)勢和有效性，通過對200例疑似HP感染患者均進(jìn)行血清HP抗體ELISA檢測、14C-UBT法、嗜銀染色法檢測。其結(jié)果研究顯示，嗜銀染色法的Kappa值為0.915，14C-UBT法的Kappa值為0.853，血清HP抗體ELISA檢測法的Kappa值為0.882；三種檢測方法的特異度無明顯差異(P>0.05)，說明嗜銀染色法診斷HP陽性的一致性比其他兩種方法更佳，但三種檢測方法的一致性都為良好，并且都具有較好的特異度，則表明血清HP抗體ELISA檢測法、14C-UBT法都可以滿足臨床診斷HP陽性的需求。而血清HP抗體ELISA檢測法和14C-UBT法的操作更簡單，檢查費(fèi)用較低，且不具有侵入性，但血清HP抗體ELISA檢測法在適用人群方面比14C-UBT法更好。在此研究中，嗜銀染色法與血清HP抗體ELISA檢測法的靈敏度無明顯差異(P>0.05)；血清HP抗體ELISA檢測法的特異度、靈敏度、準(zhǔn)確度略高于14C-UBT法，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。且較多研究顯示，14C-UBT法中的14C會對人體和環(huán)境造成一定污染傷害，且對孕婦和嬰幼兒不適用，則說明選擇血清HP抗體ELISA檢測法的可行性更高[23]。因此應(yīng)用血清HP抗體ELISA檢測法診斷HP感染具有較好的效果，靈敏度及特異度都較高，而且操作更簡便，無創(chuàng)傷性，患者更易接受。2.5臨床應(yīng)用尿素呼氣試驗(yàn)是目前最常用的HP感染診斷和用于根除效果評價(jià)方法[24]，敏感性、特異性、準(zhǔn)確性高，且操作簡便、快速、無創(chuàng)傷，無交叉感染的風(fēng)險(xiǎn)。最大缺點(diǎn)是檢測費(fèi)用貴，14C有放射性，會受抗生素影響出現(xiàn)假陰性，所以會受到檢測近期藥物影響HP免疫學(xué)抗體檢測因?yàn)榭贵w的持續(xù)存在和產(chǎn)生的時(shí)間，則存在著假陰性，HP抗體測定結(jié)果在治愈后也需半年才能轉(zhuǎn)為陰性，不能準(zhǔn)確反映患者當(dāng)時(shí)的HP感染情況，所以不能用于愈后療效評價(jià)[25]，抗體檢測陽性的不能區(qū)分近期感染或是既往感染。但臨床上可用于大批量人群初篩及流行病學(xué)調(diào)查，初篩陽性再行，呼氣試驗(yàn)。3小結(jié)免疫學(xué)抗體檢測包括免疫印跡分型技術(shù)、膠體金法、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)及膠乳免疫比濁法，檢測的抗體包括細(xì)胞毒抗體、空泡毒抗體和尿素酶亞單位A和B等抗原的抗體[26]，檢測的抗體是IgG，它反映了一段時(shí)間內(nèi)幽門螺桿菌感染的狀況，因?yàn)槟壳霸噭┖袡z測的準(zhǔn)確性差異比較大，而且與其他細(xì)菌抗原有一定的交叉反應(yīng)，所以可以出現(xiàn)幽門螺桿菌感染的假陽性。這些方法均具有較高的特異性和敏感度，無創(chuàng)性，操作簡單且檢測費(fèi)用低，適合大批量檢測。其中免疫印跡法聯(lián)合分型能增強(qiáng)診斷效果；膠乳免疫比濁法能定量檢測，適合體檢初篩；ELISA可以選擇檢測抗體標(biāo)本更多。有研究結(jié)果顯示，以13C-尿素呼氣試驗(yàn)結(jié)果作標(biāo)準(zhǔn)，膠體金法聯(lián)合免疫印跡法評估HP感染的特異性、敏感性和陽性符合率都比單一使用膠體金法、免疫印跡法高，且與13C-尿素呼氣試驗(yàn)結(jié)果的一致性較好[27]。但是在某些方面尚有值得商榷的地方:研究發(fā)現(xiàn)，某些檢測出HPI型抗體陽性的患者，其胃鏡和呼氣試驗(yàn)并不支持患者現(xiàn)在患有慢性胃炎、消化性潰瘍和胃癌等胃腸道疾病。其原因可能是抗體的水平高低與患者本身的免疫力有關(guān)系，或既往感染HP經(jīng)治療后康復(fù)的患者，其體內(nèi)HP抗體仍為陽性，因?yàn)榭贵w含量下降緩慢，存在血液中長達(dá)1a-2a[28]，因此HP的抗體檢測不能作為HP現(xiàn)癥感染或是療效觀察的指標(biāo)，須結(jié)合胃鏡或呼氣試驗(yàn)的結(jié)果來臨床治療及判斷疾病的預(yù)后[29]。參考文獻(xiàn)[1]張永芬,昝學(xué)凱.消化系統(tǒng)常見疾病與幽門螺桿菌感染的關(guān)系探討[J].基層醫(yī)學(xué)論壇,2020,24(31):4468-4469.[2]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):221-228.[3]ChristopheB,AnthonyA.EpidemiologyofHelicobacterpyloriinfection[J].Helicobacter.2017,22.[4]FuHY,KawanoS.[AmmoniaandmonochloraminegeneratedbyureaseinHelicobacterpyloricausegastricmucosalinjury][J].NihonRinsho.2002,60Suppl2:119-123.[5]GuH.RoleofFlagellainthePathogenesisofHelicobacterpylori[J].CurrMicrobiol.2017,74(7):863-869.[6]Mejias-LuqueR,GerhardM.ImmuneEvasionStrategiesandPersistenceofHelicobacterpylori[J].CurrTopMicrobiolImmunol.2017,400:53-71.[7]KimJH,NamgungB,JeonYJ,etal.Helicobacterpyloriflagellin:TLR5evasionandfusion-basedconversionintoaTLR5agonist[J].BiochemBiophysResCommun.2018,505(3):872-878.[8]RicciV,GiannouliM,RomanoM,etal.Helicobacterpylorigamma-glutamyltranspeptidaseanditspathogenicrole[J].WorldJGastroenterol.2014,20(3):630-638.[9]YeoSH,YangCH.[PepticUlcerDiseaseAssociatedwithHelicobacterpyloriInfection][J].KoreanJGastroenterol.2016,67(6):289-299.[10]SunaN,EtikD,OcalS,etal.Theeffectofhelicobacterpylorieradicationonatrophicgastritisandintestinalmetaplasia:aretrospectivesinglecenterresearch[J].ActaGastroenterolBelg.2020,83(3):381-384.[11]ZendehdelA,RohamM.RoleofHelicobacterpyloriinfectioninthemanifestationofoldage-relateddiseases[J].MolGenetGenomicMed.2020,8(4):e1157.[12]MichelM,KhellafM,DesforgesL,etal.AutoimmunethrombocytopenicPurpuraandHelicobacterpyloriinfection[J].ArchInternMed.2002,162(9):1033-1036.[13]TangDM,KumarS.TheAssociationBetweenHelicobacterpyloriInfectionandNonalcoholicFattyLiverDisease[J].CurrGastroenterolRep.2017,19(2):5.[14]O'ConnorA,LiouJM,GisbertJP,etal.Review:TreatmentofHelicobacterpyloriInfection2019[J].Helicobacter.2019,24Suppl1:e12640.[15]張志明,溫麗.免疫印跡法檢測幽門螺桿菌及其分型的臨床應(yīng)用價(jià)值探討[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志,2018,5(41):133+136.[16]梁文燕.免疫印跡法檢測門診消化不良患者幽門螺桿菌感染及其分型[J].首都食品與醫(yī)藥,2017,24(10):156-157.[17]馬健.幽門螺桿菌單克隆抗體的制備及其在免疫檢測中的應(yīng)用[D].華南理工大學(xué),2014.[18]趙學(xué)峰,趙敏兒,羅麗貞,區(qū)海萍,李毅堅(jiān),蔡甜.4種幽門螺桿菌抗體檢測試劑盒篩查幽門螺桿菌感染的性能