康欣口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)

康欣口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)

【關(guān)鍵詞】康欣口服液；丹參；地骨皮；高效液相法；淫羊藿苷

摘要：目的建立改進(jìn)康欣口服液標(biāo)準(zhǔn)的方法。方法采用薄層色譜法對康欣口服液中的丹參、地骨皮進(jìn)行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定淫羊藿苷的含量。結(jié)果定性鑒別方法專屬性強(qiáng)。在~μg范圍內(nèi)淫羊藿苷峰面積與濃度線性關(guān)系良好，r=8；樣品平均加樣回收率為%(n=9)，RSD為%。結(jié)論該法簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制康欣口服液的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：康欣口服液；丹參；地骨皮；高效液相法；淫羊藿苷

ImprovementoftheQualityStandardofKangxinOralLiquid

Abstract：ObjectiveToimprovethestandardforqualityofKangxinOrallayerchromatography(TLC)wasusedforqualitiveidentificationofSalviamiltiorrrhizaandLyciumicariinwasdeterminedbyTLCidentificationwashighlyicariinareaandcontentshowedagoodlinearrelationshipattherangeof~μgandcorrelationcoeffcientwas8.Theaveragerecoveryoftheaddedsamplewas%(n=9),RSDwas%.ConclusionThemethodissimple,quick,accurateforthequalitycontrolofKangxinOralLiquid.

Keywords：KangxinOral;Salviamiltiorrhiza;Lyciumchinensis;HPLC;Icariin

康欣口服液由何首烏、淫羊藿、丹參、地骨皮、黃芪等13味中藥組成，具有補(bǔ)腎填精、健脾益氣、養(yǎng)血活血、抗老防衰的功能。用于脾腎虛衰，氣血不足，早衰神疲，腰膝酸軟，失眠健忘等癥其療效確切。為了提高產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，保證其臨床療效，在原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上增加了對方中丹參、地骨皮的TLC鑒別，原定量指標(biāo)是測定何首烏中大黃素，我們根據(jù)本品作用和用途，現(xiàn)改為測定淫羊藿中的淫羊藿苷作為定量指標(biāo)，采用HPLC法，并優(yōu)選了提取、測定條件，建立了本品的含量測定方法。

1儀器與試藥1儀器Waters-600高效液相色譜儀；Waters2996DAD檢測器；WatersMillennum32色譜工作站；SartoriusBP211D型電子天平；電熱恒溫干燥箱；KQ-500DE型醫(yī)用數(shù)控超聲清洗儀；TDL-408型臺式離心機(jī)。2試藥薄層色譜用硅膠G、硅膠H、羧甲基纖維素鈉；原兒茶醛對照品；淫羊藿苷對照品；康欣口服液；乙腈；水為重蒸餾水；其它試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

薄層色譜鑒別

丹參取康欣口服液50ml置分液漏斗中，加乙醚萃取3次，20ml/次，合并乙醚取液，水浴蒸干，殘渣用少量甲醇溶解作為供試品溶液。取缺丹參的陰性制劑同法制備陰性對照液，再取原兒茶醛對照品，加甲醇適量制成每毫升含1mg的對照品溶液。照薄層色譜法實驗［1］，吸取供試品溶液和陰性對照液各10μl，對照品溶液2μl分別點于同一硅膠G薄層板上。以苯醋酸乙酯甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%FeCl3乙醇液，于105℃下加熱至斑點清晰。置日光下檢視，供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖1。

地骨皮取康欣口服液50ml分液漏斗中，加乙醚萃取3次，50ml/次，合并乙醚萃取液，水浴蒸干，殘渣用少量甲醇溶解作為為供試品溶液。取缺地骨皮的陰性制劑同法制備陰性對照液，再取地骨皮對照藥材2g，加甲醇50ml提取，制成對照藥材溶液，照薄層色譜法實驗［1］，吸取上述溶液各10μl，分別點于同一硅膠H薄層板上。以苯-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同著色斑點，陰性對照無干擾。結(jié)果見圖2。康欣口服液2.康欣口服液3.康欣口服液4.原兒茶醛對照品5.缺丹參陰性樣品

圖1康欣口服液中丹參的TLC康欣口服液2.康欣口服液3.康欣口服液4.地骨皮對照藥材5.缺地骨皮的陰性樣品

圖2康欣口服液中地骨皮的TLC

含量測定

對照品溶液的制備精密稱取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每毫升含8mg的溶液，作為對照品溶液。

供試品溶液的制備精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加稀乙醇超聲提取3次，20min/次，乙醇加入量分別為10，10，5ml，濾過，濾液定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得。

提取時間的考察精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加稀乙醇超聲提取不同時間，放冷后濾過，濾注定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過，注入高效液相色譜儀測定其含量。結(jié)果見表1。

表1不同時間超聲處理的比較

以上結(jié)果表明，超聲20min含量不再增加，為提取完全，故確定超聲處理時間為20min。

提取方法考察精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，加稀乙醇分別用不同的提取方法提取20min，放冷后濾過，濾液定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過，注入高效液相色譜儀測定其含量。結(jié)果見表2。

表2不同提取方法的比較

以上結(jié)果表明，超聲提取含量的同時超聲簡便，故確定提取方法為超聲提取。

提取溶劑的考察精密吸取本品ml，置蒸發(fā)皿中，加不同溶劑20ml，用超聲提取3次，20min/次，放冷后濾過，濾液定容至25ml量瓶中，搖勻，用微孔濾膜濾過，注入高效液相色譜儀測定其含量。結(jié)果見表3。

表3不同溶劑提取的比較

以上結(jié)果表明，50%乙醇提取最完全，故確定提取溶劑為50%乙醇。

空白對照溶液的制備取按處方量及制法工藝要求制成的不含羊藿的陰性對照品，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。

色譜條件色譜柱為DiamonsilC18(mm×250mm,μm)柱；檢測波長270nm；流動相為乙腈-水；流速ml/min；進(jìn)樣量20μl。按上述條件，吸取供試品溶液、對照品溶液、空白對照溶液各20μl，分別注入液相色譜儀測定，測定結(jié)果見圖3、圖4、圖5。從色譜圖可見，其他成分對淫羊藿苷的測定無干擾，符合測定要求。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備分別精密吸取對照品溶液，，，，，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。各進(jìn)樣20μl，以峰面積Y與濃度X進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=98，r=8。以上結(jié)果表明：在~μg/ml范圍內(nèi)淫羊藿苷峰面積與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表4。

圖3淫羊藿苷對照品色譜圖

圖4康欣口服液樣品色譜圖

圖5空白對照色譜圖

表4淫羊藿苷對照品測定結(jié)果

精密度實驗精密吸取上述對照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，淫羊藿苷峰面積的RSD為%。

穩(wěn)定性實驗取供試品溶液在0，4，8，12，16h，分別進(jìn)樣20μl，測得樣品中淫羊藿苷峰面積的RSD為%。

重現(xiàn)性實驗按擬定的含量測定方法，對同一批樣品分別制備5份供試品溶液，測得峰面積并計算含量，RSD為%。

回收率實驗采用加樣回收法，取同一批號樣品9份，每份ml，分別按樣品中淫羊藿苷含量的80%，100%，120%加入淫羊藿苷對照品，按供試品溶液的制備方法制備，按上述色譜條件測定。結(jié)果見表5。

表5回收率實驗結(jié)果

n=6，實驗結(jié)果表明，此方法可靠性良好。

樣品測定分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，按上述色譜條件測定(n=3)。結(jié)果見表6。

表6樣品測定結(jié)果

3討論

在鑒別丹參時，供試液的制備方法，曾比較了加醋酸乙酯和乙醚萃取，相比較乙醚萃取提取效率較高；在選擇展開劑時，比較了文獻(xiàn)報道的十幾種展開系統(tǒng)并改變相應(yīng)的比例［2，3］，發(fā)現(xiàn)以苯-醋酸乙酯-甲酸為展開系統(tǒng)適合本方鑒別。

在鑒別地骨皮時，曾用環(huán)已烷醋酸乙酯冰醋酸、環(huán)已烷醋酸乙酯冰醋酸、苯-醋酸乙酯冰醋酸、環(huán)已烷丙酮、環(huán)已烷氯仿醋酸乙酯甲酸為展開劑［3］，分離效果不理想，且陰性有干擾；經(jīng)不斷調(diào)整后改為以環(huán)已烷醋酸乙酯甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色斑點，陰性對照色譜中無此斑點。分離結(jié)果較理想。

原標(biāo)準(zhǔn)中含量測定以何首烏中的2，3，5，4’四羥基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷作為定量指標(biāo)控制制劑的質(zhì)量，但2，3，4，5，4’四羥基二苯乙烯2OβD葡萄苷在水溶液中的穩(wěn)定性不好，故改測淫羊藿中的淫羊藿苷含量為制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)，以淫羊藿苷為定量指標(biāo)較原標(biāo)準(zhǔn)方法準(zhǔn)確性、穩(wěn)定性及重現(xiàn)性均更好，可更有效控制康欣口服液的質(zhì)量。

目前，中成藥中淫羊藿含量測定多以數(shù)是采用HPLC法測定淫羊藿苷。在流動相的選擇方面，曾采用甲醇mol/L磷酸二氫鈉、乙腈水、乙腈水［4］，最終確定乙腈水為本品含量測定的流動相。