初始污染菌實驗方法驗證

初始污染菌試驗方法驗證方案產(chǎn)品名稱：一次性環(huán)切縫合器 日期： 日期： 日期：江西狼和醫(yī)療器械股份限名目初始污染菌試驗方法驗證方案概述驗證目的職責與驗證申請驗證依據(jù)驗證打算驗證內(nèi)容初始污染菌試驗方法驗證方案概述：成品熱原及內(nèi)毒素有直接關(guān)系，故而要對其檢測方法進展驗證，確認其有效性及檢測準確性，從而優(yōu)化產(chǎn)品滅菌工藝及把握產(chǎn)品熱原及內(nèi)毒素，確保產(chǎn)品的安全性。目的：通過試驗驗證檢測方法的適用性及計數(shù)用培育基的適用性。職責與驗證申請：質(zhì)量治理部供給檢測工程方案、接收標準、評價等級及相關(guān)試驗。生產(chǎn)技術(shù)部負責按驗證方案生產(chǎn)相關(guān)樣品初始污染菌試驗方法驗證申請表驗證組姓名職務(wù)單位黃燕組長質(zhì)量治理部經(jīng)理龍章宏組員化驗員江西狼和醫(yī)療器械股份有限公蘇俊組員化驗員司胡梓鵬組員化驗員批準經(jīng)爭論：同意以上成員組成驗證小組，依據(jù)此方案對本公司的產(chǎn)品的初始污染菌試驗方法進展驗證。經(jīng)爭論：同意以上成員組成驗證小組，依據(jù)此方案對本公司的產(chǎn)品的初始污染菌試驗方法進展驗證。批準人：年月日《中國藥典》2023版5.驗證打算：試驗操作人員確認；試驗室試驗設(shè)備及器材確實認；6.驗證內(nèi)容：菌種和菌液制備菌種試驗用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代〔從菌種保藏中心獲得的枯燥菌種為第0代菌液制備接種金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌的培育物至胰酪大豆胨液體培育基中或胰酪大豆胨瓊脂培育基上，30?35℃培育18?24小時；接種白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液體培育基中或沙氏葡萄糖瓊脂培育基上，20?25℃培育2-3天上述培育后的穎培育物用PH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成的菌懸液接種黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖瓊脂面培育基上，20?25℃培育 5?7天，加人3?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫然后承受適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml孢子數(shù)量小于100cfu的孢子懸液。菌懸液假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在22?8℃在24h內(nèi)使2?8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)用。計數(shù)培育基適用性檢查需氧菌的計數(shù)1ml黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培育基管或胰酪大豆胨瓊脂培育基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35℃，培育不超過3天；20-2552管2個平皿。同時，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進展上述試驗。霉菌和酵母菌的計數(shù)1ml20-25℃，培育不超過52管或2個平皿。同時，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進展上述試驗。結(jié)果判定被檢固體培育基上的菌落平均數(shù)與比照培育基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2基管與比照培育基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。試驗結(jié)果見表1計數(shù)方法驗證供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢品液制備在10000級環(huán)境中進展。接種和稀釋按以下要求進展供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1首先應(yīng)選擇最低稀釋級的供試液進展計數(shù)方法適用性試驗。試驗組 取上述制備好的供試液，參與試驗菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。供試品比照組 取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗組操作。菌液比照組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液,按試驗組操作參與試驗菌液并進展微生物回收試驗。假設(shè)因供試品抗菌活性或溶解性較差的緣由導(dǎo)致無法選擇最低稀釋級的供試液進展方法適用性試驗時，應(yīng)承受適宜的方法對供試液進展進一步的處理。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消退，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再參與試驗菌懸液進展方法適應(yīng)性試驗。抗菌活性的去除或滅活供試液接種后，按以下“微生物回收”規(guī)定的方法進展微生物計數(shù)。假設(shè)試驗組菌落數(shù)減去供試品比照組菌落數(shù)的值小于菌液比照組菌數(shù)值的50%，可承受下述方法消退供試品的抑菌活性。微生物的回收6.2承受平皿法和薄膜過濾法。6個直徑90mm的無菌平皿。2個分別注入照上述“試驗組”制備的供試1ml；2個分別注入照上述“供試品比照組”制備的供試液1ml；2個分別注入照1ml15～20ml溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。計算各試驗組的平均菌落數(shù)。薄膜過濾法0.45μm50mm,假設(shè)承受其他直徑的濾膜,沖洗量應(yīng)進展相應(yīng)的調(diào)整。選擇濾膜材質(zhì)時應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)承受適宜的方法滅菌。使用時,應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過濾后,假設(shè)需要用沖洗100ml1000ml,以避開濾膜上的微生物受損傷。適量〔1g、1ml或10cm2的供試品,假設(shè)供試品中所含的菌數(shù)較多時，供試液可酌情減量洗濾膜。每株試驗菌每種培育基至少制備一張濾膜。假設(shè)測定需氧菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平板上；假設(shè)測定霉菌和酵母總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培育基平板上。6.3.4.43初始污染菌試驗方法驗證報告1、目的2、概述

名目初始污染菌試驗方法驗證報告3、測試方法與試驗結(jié)果4、結(jié)論5、重驗證條件目的：參照《中國藥典》2023版，通過試驗驗證檢測方法的適用性及計數(shù)用培育基的適用性，從而驗證現(xiàn)在使用初始污染菌試驗方法是否準確合格。概述：產(chǎn)品型號為26型：批號為：3.測試方法及檢驗結(jié)果：試驗設(shè)備及器材：設(shè)備名稱是否校量是否在有效期結(jié)論設(shè)備名稱是否校量是否在有效期結(jié)論已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求內(nèi)滅菌鍋臺柜電子天平內(nèi)滅菌鍋臺柜電子天平電熱恒溫培育箱箱確認人/日期：審核/日期：菌液制備：接種金色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的培育物至胰酪大豆胨液體培育基中或胰酪大豆胨瓊脂培育基上，30?35℃培育18?24小時；接種白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液體培育基中或沙氏葡萄糖瓊脂培育基上，20?25℃培育2-3天，上述培育后的穎培育物用PH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成〕的菌懸液。接種黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖瓊脂面培育基上，20?25℃培育5?73?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，承受適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯lml100cfu菌懸液假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在22?8℃在24h內(nèi)使2?8℃，在驗證過的貯存期內(nèi)用。培育基適用性檢查需氧菌的計數(shù)1ml黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培育基管或胰酪大豆胨瓊脂培育基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35℃，培育不超過3天；20-2552管2個平皿。同時，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進展上述試驗。霉菌和酵母菌的計數(shù)1ml20-25℃，培育不超過52管或2個平皿。同時，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進展上述試驗。結(jié)果判定被檢固體培育基上的菌落平均數(shù)與比照培育基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2基管與比照培育基管比較，試驗菌應(yīng)生長良好。試驗結(jié)果見表1培育基菌落數(shù)cfu結(jié)論培育基菌落數(shù)cfu結(jié)論培胰酪大豆胨瓊養(yǎng)參與菌種胰酪大豆胨瓊脂胰酪大豆胨瓊脂對脂培育基/胰條培育基照培育基酪大豆胨瓊脂件比照培育基銅綠假單胞菌平均值形態(tài)大小33℃,4金黃色葡萄球菌于比照培8平均值養(yǎng)基上的枯草芽孢桿菌菌落全都平均值

23℃,72培育基菌落數(shù)cfu 沙氏葡萄糖瓊參與菌種

件

脂培育基/沙氏葡萄糖瓊脂沙氏葡萄糖瓊脂對 氏葡萄糖瓊脂培育基 照培育基比照培育基白色念珠菌 菌落黑曲霉平均值

23℃,72

計數(shù)。驗證人/日期： 審核/日期：計數(shù)方法驗證供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢品液制備在10000級環(huán)境中進展。接種和稀釋按以下要求進展供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1首先應(yīng)選擇最低稀釋級的供試液進展計數(shù)方法適用性試驗。試驗組 取上述制備好的供試液，參與試驗菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。供試品比照組 取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗組操作。菌液比照組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液,按試驗組操作參與試驗菌液并進展微生物回收試驗。假設(shè)因供試品抗菌活性或溶解性較差的緣由導(dǎo)致無法選擇最低稀釋級的供試液進展方法適用性試驗時，應(yīng)承受適宜的方法對供試液進展進一步的處理。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消退，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再參與試驗菌懸液進展方法適應(yīng)性試驗。抗菌活性的去除或滅活供試液接種后，按以下“微生物回收”規(guī)定的方法進展微生物計數(shù)。假設(shè)試驗組菌落數(shù)減去供試品比照組菌落數(shù)的值小于菌液比照組菌數(shù)值的50%，可承受下述方法消退供試品的抑菌活性。微生物的回收6.2承受平皿法和薄膜過濾法。6個直徑90mm的無菌平皿。2個分別注入照上述“試驗組”制備的供試1ml；2個分別注入照上述“供試品比照組”制備的供試液1ml；2個分別注入照1ml15～20ml溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。一次性環(huán)切縫合器一次性環(huán)切縫合一次性環(huán)切縫合器一次性環(huán)切縫合器一次性環(huán)切縫合器1回收率100%88.3%92.6%11沖洗一次263025沖洗二次042沖洗三次000沖洗四次000平均回收率平均回收率修正系數(shù)93.7%1.07結(jié)論：以上產(chǎn)品各做三套平均回收率達80%以上，一次回收率到達要求。正常試驗中可承受沖洗一次后*回收系數(shù)進展估算。試驗人/日期：審核/日期薄膜過濾法0.45μm50mm,假設(shè)承受其他直徑的濾膜,沖洗量應(yīng)進展相應(yīng)的調(diào)整。選擇濾膜材質(zhì)時應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)承受適宜的方法滅菌。使用時,應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過濾后,假設(shè)需要用沖洗100ml1000ml,以避開濾膜上的微生物受損傷。適量〔1g、1ml或10cm2的供試品,假設(shè)供試品中所含的菌數(shù)較多時，供試液可酌情減量洗濾膜。每株試驗菌每種培育基至少制備一張濾膜。假設(shè)測定需氧菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平板上；假設(shè)測定霉菌和酵母總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培育基平板上。3.5.4.4薄膜過濾法計數(shù)方法驗證明驗結(jié)果見表34.驗證結(jié)論從以上檢測結(jié)果可知，上述培育基適用性檢測符合規(guī)定，承受的薄膜過濾法計數(shù)方法符合規(guī)定，產(chǎn)品初始污染菌一次沖洗回收率符合規(guī)定，上述方法適用于產(chǎn)品的日常檢測。再驗證周期當培育基批號轉(zhuǎn)變時須對計數(shù)培育基進展適用性檢查產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)境或原料發(fā)生轉(zhuǎn)變時須進展計數(shù)方法的驗證當檢測環(huán)境發(fā)生轉(zhuǎn)變時須重驗證試驗組

產(chǎn)品名稱

369

菌菌液組數(shù)85658381.85/7290658381.85/7290761ml8973球菌