初始污染菌實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證

初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證方案產(chǎn)品名稱：一次性環(huán)切縫合器 日期： 日期： 日期：江西狼和醫(yī)療器械股份限名目初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證方案概述驗(yàn)證目的職責(zé)與驗(yàn)證申請驗(yàn)證依據(jù)驗(yàn)證打算驗(yàn)證內(nèi)容初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證方案概述：成品熱原及內(nèi)毒素有直接關(guān)系，故而要對其檢測方法進(jìn)展驗(yàn)證，確認(rèn)其有效性及檢測準(zhǔn)確性，從而優(yōu)化產(chǎn)品滅菌工藝及把握產(chǎn)品熱原及內(nèi)毒素，確保產(chǎn)品的安全性。目的：通過試驗(yàn)驗(yàn)證檢測方法的適用性及計(jì)數(shù)用培育基的適用性。職責(zé)與驗(yàn)證申請：質(zhì)量治理部供給檢測工程方案、接收標(biāo)準(zhǔn)、評價(jià)等級及相關(guān)試驗(yàn)。生產(chǎn)技術(shù)部負(fù)責(zé)按驗(yàn)證方案生產(chǎn)相關(guān)樣品初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證申請表驗(yàn)證組姓名職務(wù)單位黃燕組長質(zhì)量治理部經(jīng)理龍章宏組員化驗(yàn)員江西狼和醫(yī)療器械股份有限公蘇俊組員化驗(yàn)員司胡梓鵬組員化驗(yàn)員批準(zhǔn)經(jīng)爭論：同意以上成員組成驗(yàn)證小組，依據(jù)此方案對本公司的產(chǎn)品的初始污染菌試驗(yàn)方法進(jìn)展驗(yàn)證。經(jīng)爭論：同意以上成員組成驗(yàn)證小組，依據(jù)此方案對本公司的產(chǎn)品的初始污染菌試驗(yàn)方法進(jìn)展驗(yàn)證。批準(zhǔn)人：年月日《中國藥典》2023版5.驗(yàn)證打算：試驗(yàn)操作人員確認(rèn)；試驗(yàn)室試驗(yàn)設(shè)備及器材確實(shí)認(rèn)；6.驗(yàn)證內(nèi)容：菌種和菌液制備菌種試驗(yàn)用菌株的傳代次數(shù)不得超過5代〔從菌種保藏中心獲得的枯燥菌種為第0代菌液制備接種金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌的培育物至胰酪大豆胨液體培育基中或胰酪大豆胨瓊脂培育基上，30?35℃培育18?24小時(shí)；接種白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液體培育基中或沙氏葡萄糖瓊脂培育基上，20?25℃培育2-3天上述培育后的穎培育物用PH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成的菌懸液接種黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖瓊脂面培育基上，20?25℃培育 5?7天，加人3?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液將孢子洗脫然后承受適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成每lml孢子數(shù)量小于100cfu的孢子懸液。菌懸液假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在22?8℃在24h內(nèi)使2?8℃，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)用。計(jì)數(shù)培育基適用性檢查需氧菌的計(jì)數(shù)1ml黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培育基管或胰酪大豆胨瓊脂培育基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35℃，培育不超過3天；20-2552管2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)1ml20-25℃，培育不超過52管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。結(jié)果判定被檢固體培育基上的菌落平均數(shù)與比照培育基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2基管與比照培育基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。試驗(yàn)結(jié)果見表1計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢品液制備在10000級環(huán)境中進(jìn)展。接種和稀釋按以下要求進(jìn)展供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗(yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1首先應(yīng)選擇最低稀釋級的供試液進(jìn)展計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。試驗(yàn)組 取上述制備好的供試液，參與試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。供試品比照組 取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。菌液比照組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液,按試驗(yàn)組操作參與試驗(yàn)菌液并進(jìn)展微生物回收試驗(yàn)。假設(shè)因供試品抗菌活性或溶解性較差的緣由導(dǎo)致無法選擇最低稀釋級的供試液進(jìn)展方法適用性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)承受適宜的方法對供試液進(jìn)展進(jìn)一步的處理。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消退，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再參與試驗(yàn)菌懸液進(jìn)展方法適應(yīng)性試驗(yàn)?？咕钚缘娜コ驕缁罟┰囈航臃N后，按以下“微生物回收”規(guī)定的方法進(jìn)展微生物計(jì)數(shù)。假設(shè)試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品比照組菌落數(shù)的值小于菌液比照組菌數(shù)值的50%，可承受下述方法消退供試品的抑菌活性。微生物的回收6.2承受平皿法和薄膜過濾法。6個(gè)直徑90mm的無菌平皿。2個(gè)分別注入照上述“試驗(yàn)組”制備的供試1ml；2個(gè)分別注入照上述“供試品比照組”制備的供試液1ml；2個(gè)分別注入照1ml15～20ml溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。計(jì)算各試驗(yàn)組的平均菌落數(shù)。薄膜過濾法0.45μm50mm,假設(shè)承受其他直徑的濾膜,沖洗量應(yīng)進(jìn)展相應(yīng)的調(diào)整。選擇濾膜材質(zhì)時(shí)應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)承受適宜的方法滅菌。使用時(shí),應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過濾后,假設(shè)需要用沖洗100ml1000ml,以避開濾膜上的微生物受損傷。適量〔1g、1ml或10cm2的供試品,假設(shè)供試品中所含的菌數(shù)較多時(shí)，供試液可酌情減量洗濾膜。每株試驗(yàn)菌每種培育基至少制備一張濾膜。假設(shè)測定需氧菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平板上；假設(shè)測定霉菌和酵母總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培育基平板上。6.3.4.43初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證報(bào)告1、目的2、概述

名目初始污染菌試驗(yàn)方法驗(yàn)證報(bào)告3、測試方法與試驗(yàn)結(jié)果4、結(jié)論5、重驗(yàn)證條件目的：參照《中國藥典》2023版，通過試驗(yàn)驗(yàn)證檢測方法的適用性及計(jì)數(shù)用培育基的適用性，從而驗(yàn)證現(xiàn)在使用初始污染菌試驗(yàn)方法是否準(zhǔn)確合格。概述：產(chǎn)品型號(hào)為26型：批號(hào)為：3.測試方法及檢驗(yàn)結(jié)果：試驗(yàn)設(shè)備及器材：設(shè)備名稱是否校量是否在有效期結(jié)論設(shè)備名稱是否校量是否在有效期結(jié)論已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求已校量在有效期內(nèi)符合要求內(nèi)滅菌鍋臺(tái)柜電子天平內(nèi)滅菌鍋臺(tái)柜電子天平電熱恒溫培育箱箱確認(rèn)人/日期：審核/日期：菌液制備：接種金色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的培育物至胰酪大豆胨液體培育基中或胰酪大豆胨瓊脂培育基上，30?35℃培育18?24小時(shí)；接種白色念珠菌的培育物至沙氏葡萄糖液體培育基中或沙氏葡萄糖瓊脂培育基上，20?25℃培育2-3天，上述培育后的穎培育物用PH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌化鈉溶液制成每lml菌數(shù)小于100cfu(菌落形成〕的菌懸液。接種黑曲霉的培育物至沙氏葡萄糖瓊脂面培育基上，20?25℃培育5?73?5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，承受適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內(nèi)，用0.05%(ml/ml)聚山梨醋80的pH7.0無菌化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯lml100cfu菌懸液假設(shè)在室溫下放置，應(yīng)在22?8℃在24h內(nèi)使2?8℃，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)用。培育基適用性檢查需氧菌的計(jì)數(shù)1ml黑曲霉各菌懸液，接種至胰酪大豆胨液體培育基管或胰酪大豆胨瓊脂培育基平板。金色葡萄球菌、銅綠假胞菌、枯草芽孢桿菌在30-35℃，培育不超過3天；20-2552管2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)1ml20-25℃，培育不超過52管或2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。結(jié)果判定被檢固體培育基上的菌落平均數(shù)與比照培育基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5-2基管與比照培育基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。試驗(yàn)結(jié)果見表1培育基菌落數(shù)cfu結(jié)論培育基菌落數(shù)cfu結(jié)論培胰酪大豆胨瓊養(yǎng)參與菌種胰酪大豆胨瓊脂胰酪大豆胨瓊脂對脂培育基/胰條培育基照培育基酪大豆胨瓊脂件比照培育基銅綠假單胞菌平均值形態(tài)大小33℃,4金黃色葡萄球菌于比照培8平均值養(yǎng)基上的枯草芽孢桿菌菌落全都平均值

23℃,72培育基菌落數(shù)cfu 沙氏葡萄糖瓊參與菌種

件

脂培育基/沙氏葡萄糖瓊脂沙氏葡萄糖瓊脂對 氏葡萄糖瓊脂培育基 照培育基比照培育基白色念珠菌 菌落黑曲霉平均值

23℃,72

計(jì)數(shù)。驗(yàn)證人/日期： 審核/日期：計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證供試液的制備：洗脫液用0.9%的滅菌生理鹽水，檢品液制備在10000級環(huán)境中進(jìn)展。接種和稀釋按以下要求進(jìn)展供試液的接種和稀釋,制備微生物回收試驗(yàn)用供試液。所加菌液的體積應(yīng)不超過供試液體積的1首先應(yīng)選擇最低稀釋級的供試液進(jìn)展計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)。試驗(yàn)組 取上述制備好的供試液，參與試驗(yàn)菌液，混勻，使每1ml供試液或每張濾膜所濾過的供試液中含菌量不大于100cfu。供試品比照組 取制備好的供試液,以稀釋液代替菌液同試驗(yàn)組操作。菌液比照組 取不含中和劑及滅活劑的相應(yīng)稀釋液替代供試液,按試驗(yàn)組操作參與試驗(yàn)菌液并進(jìn)展微生物回收試驗(yàn)。假設(shè)因供試品抗菌活性或溶解性較差的緣由導(dǎo)致無法選擇最低稀釋級的供試液進(jìn)展方法適用性試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)承受適宜的方法對供試液進(jìn)展進(jìn)一步的處理。如果供試品對微生物生長的抑制作用無法以其他方法消退，供試液可經(jīng)過中和、稀釋或薄膜過濾處理后再參與試驗(yàn)菌懸液進(jìn)展方法適應(yīng)性試驗(yàn)?？咕钚缘娜コ驕缁罟┰囈航臃N后，按以下“微生物回收”規(guī)定的方法進(jìn)展微生物計(jì)數(shù)。假設(shè)試驗(yàn)組菌落數(shù)減去供試品比照組菌落數(shù)的值小于菌液比照組菌數(shù)值的50%，可承受下述方法消退供試品的抑菌活性。微生物的回收6.2承受平皿法和薄膜過濾法。6個(gè)直徑90mm的無菌平皿。2個(gè)分別注入照上述“試驗(yàn)組”制備的供試1ml；2個(gè)分別注入照上述“供試品比照組”制備的供試液1ml；2個(gè)分別注入照1ml15～20ml溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂或沙氏葡萄糖瓊脂培育基，混勻，凝固，倒置培育。一次性環(huán)切縫合器一次性環(huán)切縫合一次性環(huán)切縫合器一次性環(huán)切縫合器一次性環(huán)切縫合器1回收率100%88.3%92.6%11沖洗一次263025沖洗二次042沖洗三次000沖洗四次000平均回收率平均回收率修正系數(shù)93.7%1.07結(jié)論：以上產(chǎn)品各做三套平均回收率達(dá)80%以上，一次回收率到達(dá)要求。正常試驗(yàn)中可承受沖洗一次后*回收系數(shù)進(jìn)展估算。試驗(yàn)人/日期：審核/日期薄膜過濾法0.45μm50mm,假設(shè)承受其他直徑的濾膜,沖洗量應(yīng)進(jìn)展相應(yīng)的調(diào)整。選擇濾膜材質(zhì)時(shí)應(yīng)保證供試品及其溶劑不影響微生物的充分被截留。濾器及濾膜使用前應(yīng)承受適宜的方法滅菌。使用時(shí),應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。供試液經(jīng)薄膜過濾后,假設(shè)需要用沖洗100ml1000ml,以避開濾膜上的微生物受損傷。適量〔1g、1ml或10cm2的供試品,假設(shè)供試品中所含的菌數(shù)較多時(shí)，供試液可酌情減量洗濾膜。每株試驗(yàn)菌每種培育基至少制備一張濾膜。假設(shè)測定需氧菌總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培育基平板上；假設(shè)測定霉菌和酵母總數(shù)，轉(zhuǎn)移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂培育基平板上。3.5.4.4薄膜過濾法計(jì)數(shù)方法驗(yàn)證明驗(yàn)結(jié)果見表34.驗(yàn)證結(jié)論從以上檢測結(jié)果可知，上述培育基適用性檢測符合規(guī)定，承受的薄膜過濾法計(jì)數(shù)方法符合規(guī)定，產(chǎn)品初始污染菌一次沖洗回收率符合規(guī)定，上述方法適用于產(chǎn)品的日常檢測。再驗(yàn)證周期當(dāng)培育基批號(hào)轉(zhuǎn)變時(shí)須對計(jì)數(shù)培育基進(jìn)展適用性檢查產(chǎn)品生產(chǎn)環(huán)境或原料發(fā)生轉(zhuǎn)變時(shí)須進(jìn)展計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證當(dāng)檢測環(huán)境發(fā)生轉(zhuǎn)變時(shí)須重驗(yàn)證試驗(yàn)組

產(chǎn)品名稱

369

菌菌液組數(shù)85658381.85/7290658381.85/7290761ml8973球菌