臨床微生物質(zhì)譜鑒定技術(shù)及其應(yīng)用初探

檢驗(yàn)科微生物室質(zhì)譜技術(shù)及其應(yīng)用初探當(dāng)前第1頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)現(xiàn)代感染性疾病和臨床微生物檢測(cè)現(xiàn)狀耐藥菌株增多疑難菌株增多現(xiàn)代感染性疾病新特點(diǎn)條件致病菌增多人員少、鑒定速度較慢感染菌種類增多當(dāng)前第2頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)當(dāng)前第3頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)臨床微生物當(dāng)前現(xiàn)狀病原生長(zhǎng)時(shí)間報(bào)告時(shí)間需氧菌24h3-4個(gè)工作日厭氧菌48h酵母菌2-5天5-7個(gè)工作日絲狀真菌2-5天

第一天第二天第三-四天分純培養(yǎng)當(dāng)前第4頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)當(dāng)前第5頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)當(dāng)前第6頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)常規(guī)微生物檢驗(yàn)遇到的困惑：★呼吸道、腸道標(biāo)本的細(xì)菌種類繁多，常規(guī)的鑒定成本高或者操作麻煩，容易漏掉或者忽視某些細(xì)菌?！飬捬蹙澢?、分枝桿菌和真菌：培養(yǎng)的難點(diǎn)，鑒定的死角，技術(shù)上不好掌握或者成本高、時(shí)間長(zhǎng)，難以實(shí)施?！镅囵B(yǎng)的分級(jí)報(bào)告制度：存在很多變數(shù)，使得初次報(bào)告的結(jié)果可靠性得不到臨床的認(rèn)可。（比如：直接革蘭染色涂片，初步能估計(jì)細(xì)菌大類，但是無(wú)法確切到種。比如：L型菌無(wú)法確定其革蘭染色性。）操作方便的，成本便宜的。不僅是實(shí)驗(yàn)室要求的，更是臨床迫切需要的。當(dāng)前第7頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)將實(shí)驗(yàn)室人員從一些技術(shù)要求較低的、能由儀器完成的工作中解脫出來(lái)，提高標(biāo)本處理效率，縮短報(bào)告時(shí)間。

臨床微生物實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化MALDI-TOF革命性當(dāng)前第8頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)基質(zhì)輔助激光解吸電離-飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF

MS)當(dāng)前第9頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)當(dāng)前第10頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)當(dāng)前第11頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)MALDI-TOF

MS蛋白質(zhì)指紋特征當(dāng)前第12頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)梅里埃VITEKMS的數(shù)據(jù)庫(kù)包含IVD1046種菌和RUO1500種菌的圖譜。當(dāng)前第13頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)挑取部分菌落點(diǎn)樣至靶板生成圖譜搜庫(kù)鑒定質(zhì)譜檢測(cè)流程MALDITOF檢測(cè)加基質(zhì)液當(dāng)前第14頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)

質(zhì)譜作為一項(xiàng)細(xì)菌鑒定領(lǐng)域的革新技術(shù)，與現(xiàn)有傳統(tǒng)的鑒定診斷技術(shù)相比，具有操作簡(jiǎn)單、快速、通量高、靈敏度高、準(zhǔn)確度好、試劑耗品非常經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢(shì)。準(zhǔn)確度時(shí)間（包括操作）成本MALDI-TOF技術(shù)>90%20min20元常規(guī)方法>80%24~48

h50元當(dāng)前第15頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)

質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值縮短了常規(guī)微生物培養(yǎng)鑒定時(shí)間。運(yùn)用質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)則可縮短至少1天的鑒定時(shí)間，為臨床救治危急重癥患者贏得更多時(shí)間。而有研究證實(shí)，在重癥監(jiān)護(hù)室（ICU）臨床治療中，抗生素如果晚一小時(shí)準(zhǔn)確治療，病人存活率下降8%。當(dāng)前第16頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)ImpactofRapidOrganismIdentificationviaMatrix-AssistedLaserDesorption/IonizationTime-of-FlightCombinedWithAntimicrobialStewardshipTeamInterventioninAdultPatientsWithBacteremiaandCandidemia屆由質(zhì)譜快速分析及快速藥敏介入臨床抗生素管理小組執(zhí)行成人病患菌血癥及霉菌血癥的影響ClinicalInfectiousDiseases2013;57(9):1237–45快速鑒定質(zhì)譜結(jié)合藥敏報(bào)告減少鑒定時(shí)間并幫助臨床執(zhí)行最合適抗生素用藥30天內(nèi)死亡率減少6.6%;ICU住院天數(shù)減少6.6天;對(duì)癥用藥時(shí)間縮短10個(gè)小時(shí)

鑒定/藥敏最終報(bào)告時(shí)間提早29小時(shí);84hrvs55.9hr有效用藥時(shí)間提早十個(gè)小時(shí):

30.1hrvs20.4hr正確使用廣效抗生素選擇提早43小時(shí);90.3hrvs47.3hr501位臨床病患中,快速報(bào)告族群30天內(nèi)死亡率減少6.6%膿毒癥復(fù)發(fā)率減少3.9%;5.9%vs2.0%當(dāng)前第17頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)對(duì)少見菌、厭氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常難鑒定菌的檢測(cè)準(zhǔn)確度和速度將大大提高。少見菌往往有其獨(dú)特的藥物選擇，比如布魯菌屬首選四環(huán)素類、奴卡菌首選復(fù)方新諾明等等?？巳峒俳z酵母菌對(duì)氟康唑天然耐藥，熱帶假絲酵母菌對(duì)唑類藥物的耐藥性也有上升。

質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值當(dāng)前第18頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)產(chǎn)單核李斯特菌4度可生長(zhǎng)，易污染食物和乳制品，對(duì)人類可引起原發(fā)性腦膜炎、腦炎、敗血癥。對(duì)兒科常用藥物頭孢菌素天然耐藥，對(duì)氨芐西林敏感。因此，實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)現(xiàn)疑似產(chǎn)單核李斯特菌可能，就要快速給予臨床相關(guān)信息。

梅里埃細(xì)菌鑒定藥敏分析儀給出兩個(gè)鑒定選項(xiàng)（產(chǎn)單核、無(wú)害李斯特菌），VITEK2COMPACT需要補(bǔ)充CAMP試驗(yàn)結(jié)果（24小時(shí)孵育）質(zhì)譜鑒定直接給出99.9%的鑒定結(jié)果

——產(chǎn)單核李斯特菌當(dāng)前第19頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)微小單胞菌當(dāng)前第20頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)對(duì)少見菌、厭氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常難鑒定菌的檢測(cè)準(zhǔn)確度和速度將大大提高。少見菌往往有其獨(dú)特的藥物選擇，比如布魯菌屬首選四環(huán)素類、奴卡菌首選復(fù)方新諾明等等。克柔假絲酵母菌對(duì)氟康唑天然耐藥，熱帶假絲酵母菌對(duì)唑類藥物的耐藥性也有上升。

質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值當(dāng)前第21頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)

質(zhì)譜鑒定技術(shù)的臨床價(jià)值

使血培養(yǎng)的分級(jí)報(bào)告更準(zhǔn)確

臨床醫(yī)師可根據(jù)以往的耐藥監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行用藥選擇當(dāng)前第22頁(yè)\共有27頁(yè)\編于星期五\1點(diǎn)MALDI-TOFMS對(duì)血培養(yǎng)陽(yáng)性樣本的直接檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：快速。缺點(diǎn)：操作麻煩，且抽濾容易產(chǎn)生氣溶膠，污染環(huán)境。不易于在臨床推廣。鑒定的缺陷：多種菌感染不能鑒定，或者鑒定有誤，鏈球菌等難于區(qū)分的