植物生理學(xué)實驗課件

植物生理學(xué)實驗課件第一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織滲透勢的測定實驗原理當(dāng)植物組織細胞內(nèi)的汁液其周圍的某種溶液處于滲透平衡狀態(tài)，植物細胞內(nèi)的壓力勢為零時，細胞汁液的滲透勢就等于該溶液的滲透勢。這種滲透勢相等的溶液為等滲溶液。該溶液的濃度稱為等滲濃度。當(dāng)用一系列梯度濃度溶液觀察細胞質(zhì)壁分離現(xiàn)象時，細胞的等滲濃度將介于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和尚不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間的溶液濃度。代入公式即可計算其滲透勢。第二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織滲透勢的測定實驗器材與試劑實驗儀器顯微鏡，載玻片及蓋玻片，試管，移液管，培養(yǎng)皿，鑷子，刀片實驗試劑1.00mol/L蔗糖溶液，甲烯藍實驗材料洋蔥鱗莖或紫鴨跖草第三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織滲透勢的測定實驗步驟用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L）各30mL，分別注入編好號的各培養(yǎng)皿中。取帶有色素的洋蔥鱗莖或紫鴨跖草下表皮，迅速分別投入各蔗糖溶液中，使其完全浸入，約5～10min。從0.6mol/L開始依次取出表皮薄片放在滴有同樣溶液的載玻片上，蓋上蓋玻片，于低倍顯微鏡下觀察，并記錄質(zhì)壁分離的相對程度。第四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織滲透勢的測定實驗步驟確定引起半數(shù)以上細胞原生質(zhì)剛剛從細胞壁的角隅上分離的濃度，和不引起質(zhì)壁分離的最高濃度，細胞的滲透勢與兩個極限溶液濃度之平均值的滲透勢相等。根據(jù)公式計算細胞的滲透勢ψs=

-icRTi為解離系數(shù)，蔗糖為1；c為小液滴在其中基本不動的溶液的濃度，單位為mol/L；R為摩爾氣體常數(shù)，R=0.0083L·MPa/mol·K；T為熱力學(xué)溫度，單位K第五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織滲透勢的測定實驗結(jié)果

外液濃度mol/L質(zhì)壁分離的相對程度組織滲透勢計算0.10.20.30.40.50.6第六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織水勢的測定實驗原理植物組織的水分狀況可用水勢來表示。植物體細胞之間、組織之間以及植物體與環(huán)境之間的水分移動方向都由水勢差決定。將植物組織放在已知水勢的一系列溶液中，如果植物組織的水勢小于某一溶液的水勢，則組織吸水，反之組織失水。若兩者相等，水分交換保持動態(tài)平衡。組織的吸水或失水會使溶液的濃度、密度、電導(dǎo)率以及組織本身的體積與質(zhì)量發(fā)生變化。根據(jù)這些參數(shù)的變化情況可確定與植物組織等水勢的溶液。第七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織水勢的測定實驗器材與試劑實驗儀器試管，移液管，毛細滴管，青霉素小瓶，打孔器，鑷子實驗試劑1.00mol/L蔗糖溶液，甲烯藍實驗材料青菜或菠菜葉片第八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織水勢的測定實驗步驟用1.00mol/L蔗糖母液配制一系列不同濃度的蔗糖溶液（0.05、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L）各10mL，分別注入編好號的7支對照組試管中。另取7個青霉素小瓶對應(yīng)試管編號，從對照管中分別吸2mL溶液入相同編號的試驗組小瓶中。用打孔器在葉片中部靠近主脈附近打取葉圓片，隨機取樣，每試驗組小瓶中放入30片葉圓片，加塞，放置30min，其間搖動數(shù)次。第九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織水勢的測定實驗步驟到時間后，用解剖針沾取少許甲烯藍粉末加入小瓶中，并震蕩，此時溶液呈藍色。用7支毛細滴管從試驗組小瓶中依次吸取著色的液體少許，伸入同號對照組溶液的中部，緩慢放出藍色溶液，輕輕取出滴管，觀察藍色液滴的移動方向。根據(jù)公式計算葉片細胞的水勢ψw=

-icRTi為解離系數(shù)，蔗糖為1；c為小液滴在其中基本不動的溶液的濃度，單位為mol/L；R為摩爾氣體常數(shù)，R=0.0083L·MPa/mol·K；T為熱力學(xué)溫度，單位K第十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織水勢的測定實驗結(jié)果

外液濃度mol/L小液滴移動方向組織水勢與外液水勢比較組織水勢計算0.050.10.20.30.40.50.6第十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物組織水勢的測定實驗結(jié)果在0.05、0.1mol/L溶液中液滴下降，說明葉片細胞水勢小于外液水勢，細胞吸水，外液密度變大；在0.3、0.4、0.5、0.6mol/L溶液中液滴上升，說明葉片細胞水勢大于外液水勢，細胞失水，外液密度變小在0.2mol/L溶液中液滴基本不動，說明細胞水勢與此外液的滲透勢相等實驗所測葉片細胞水勢

=-1×0.2×0.0083×（273+20）=-0.48638MPa實驗溫度為20℃

第十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥實驗原理植物的生長發(fā)育，除需要充足的陽光和水分外，還需要礦質(zhì)元素，否則植物就不能很好地生長發(fā)育甚至死亡。應(yīng)用溶液培養(yǎng)技術(shù)，可以觀察礦質(zhì)元素對植物生活的必需性；用溶液培養(yǎng)做植物的營養(yǎng)實驗，可以避免土壤里的各種復(fù)雜因素。第十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥實驗器材與試劑實驗儀器分析天平，培養(yǎng)缸，燒杯，移液管實驗材料玉米（或番茄、蓖麻、小麥）種子第十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥實驗器材與試劑實驗試劑按下表配制貯備液藥品名稱用量/（g?L－1）藥品名稱用量/（g?L－1）Ca(NO3)282.07CaCl255.50KNO350.56KCl37.28MgSO4·7H2O61.62Fe-EDTANa-EDTA7.45g，F(xiàn)eSO4·7H2O5.57gKH2PO427.22NaH2PO424.00微量元素H3BO32.860g，MnSO41.015g，CuSO4·5H2O0.079g，ZnSO4·7H2O0.220g，H2MoO40.090gNaNO342.45MgCl223.81Na2SO435.51第十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥實驗步驟材料準(zhǔn)備種子用漂白粉溶液滅菌30min，用無菌水沖洗數(shù)次，然后放在洗凈的石英砂中發(fā)芽，加蒸餾水，等幼苗長出第一真葉時待用。第十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥配制缺元素培養(yǎng)液貯備液貯備液/mL完全－N－P－K－Ca－Mg－S－FeCa(NO3)25－55－555KNO35－5－5555MgSO4·7H2O55555－－5KH2PO455－－5555NaH2PO4－－－5－－－－Fe-EDTA0.50.50.50.50.50.50.5－微量元素0.50.50.50.50.50.50.50.5NaNO3－－－55－－－MgCl2－－－－－－5－Na2SO4－－－－－5－－CaCl2－5－－－－－－KCl－52－－－－－第十七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥配制時先于棕色瓶中加入300mL蒸餾水，然后加貯備液，最后配成500mL，用稀酸、堿調(diào)節(jié)至pH5～6。選取大小一致的植株，小心剝?nèi)ナＳ嗯呷?，用棉花包裹莖部，穿過瓶蓋小孔，使根部浸入培養(yǎng)液，將培養(yǎng)瓶移到溫室中，注意管理并觀察記錄植株的生長情況，各種元素缺乏癥的癥狀及出現(xiàn)的部位。第十八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物的元素缺乏癥實驗結(jié)果第十九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗原理硝酸還原酶是植物氮素代謝作用中的關(guān)鍵性酶，與作物吸收和利用氮肥有關(guān)。它作用于NO3－使之還原為NO2－：NO3－＋NADH＋H+→NO2－＋NAD+

＋H2O產(chǎn)生的NO2－可以從組織內(nèi)滲透到外界溶液中，并積累在溶液中，測定反應(yīng)液中NO2－含量的增加，即表現(xiàn)該酶活性的大小。第二十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗原理NO2－含量的測定用磺胺（對氨基苯磺酸胺）比色法。在酸性溶液中磺胺與NO2－形成重氮鹽，再與α-萘胺偶聯(lián)形成紫紅色的偶氮染料。反應(yīng)液的酸度大，則增加重氮化作用的速度，但降低偶聯(lián)作用的速度，顏色比較穩(wěn)定。增加溫度可以增加反應(yīng)速度，但降低重氮鹽的穩(wěn)定度。所以反應(yīng)需要在相同條件下進行。這種方法非常靈敏，能測定每毫升含0.5μg的NaNO2。第二十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗器材與試劑實驗儀器分光光度計，注射器，溫箱，天平，鉆孔器，三角燒瓶，移液管，燒杯，試管實驗試劑0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.5），0.2mol/LKNO3，磺胺試劑，α-萘胺試劑，NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液實驗材料蓖麻、向日葵、油菜、小麥或棉花的葉子第二十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗步驟將新鮮取回的葉片水洗，用吸水紙吸干，然后用鉆孔器打葉圓片，用蒸餾水洗滌2～3次，吸干水分，于分析天平上稱取等重的葉圓片兩份。每份約0.3～0.4g（或每份取50個圓片），分別置于含下列溶液的燒瓶中：①0.1mol/L磷酸緩沖液5mL+蒸餾水5mL；②0.1mol/L磷酸緩沖液5mL+0.2mol/LKNO35mL。用注射器抽氣，至葉圓片沉于溶液中。將燒瓶放入30℃溫箱中，避光保溫30min。第二十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗步驟分別吸取反應(yīng)液1mL于試管中，加入磺胺試劑2mL及α-萘胺試劑2mL，混合搖勻，靜置30min，用分光光度計（520nm）進行測定，記下OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出NO2－含量，再計算酶的活性。第二十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗步驟用5μg/mLNaNO2母液稀釋成0.5、1、2、3、4μg/mL的梯度濃度的NaNO2溶液

。分別吸取0.5、1、2、3、4、5μg/mL的NaNO21mL于試管中，加入磺胺試劑2mL及α-萘胺試劑2mL，混合搖勻，靜置30min，用分光光度計（520nm）進行測定，記下OD值，以O(shè)D值為縱坐標(biāo)，NaNO2濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。第二十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)曲線NaNO2

mol/L磺胺比色法OD520值0.512345對照反應(yīng)液反應(yīng)液注意：比色空白用1mL水加同樣顯色劑同樣反應(yīng)條件標(biāo)出根據(jù)對照反應(yīng)液和反應(yīng)液的比色OD值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的NaNO2含量第二十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六硝酸還原酶活性的測定實驗結(jié)果酶的活性第二十七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六單鹽毒害及離子拮抗實驗原理離子間的拮抗現(xiàn)象的本質(zhì)是復(fù)雜的，它可能反映不同離子對原生質(zhì)親水膠粒的穩(wěn)定性、原生質(zhì)膜的透性，以及對各類酶活性調(diào)節(jié)等方面的相互制約作用，從而維持機體的正常生理狀態(tài)。第二十八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六單鹽毒害及離子拮抗實驗器材與試劑實驗儀器燒杯，紗布，石蠟實驗試劑0.12mol/LKCl，0.06mol/LCaCl2，0.12mol/LNaCl（所用藥品均需用分析純）實驗材料小麥種子第二十九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六單鹽毒害及離子拮抗實驗步驟實驗前3～4天選擇飽滿的小麥種子100粒浸種，在室溫下萌發(fā)，待根長1cm時可用作材料。取4個小燒杯，分別加入下列溶液0.12mol/LKCl0.06mol/LCaCl20.12mol/LNaCl0.12mol/LNaCl100mL+0.06mol/LCaCl21mL+0.12mol/LKCl2.2mL第三十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六單鹽毒害及離子拮抗實驗步驟小燒杯用涂石蠟的紗布蓋上。挑選大小相等及根系發(fā)育一致的小麥幼苗16株，小心種植在紗布蓋的孔眼里，使根系接觸到溶液，在室溫下培養(yǎng)2～3周后，觀察幼苗根的生長情況。培養(yǎng)期間注意補充水分，可更換一次培養(yǎng)液。第三十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六單鹽毒害及離子拮抗實驗結(jié)果在單鹽溶液中小麥幼苗生長受阻，特別是根部出現(xiàn)畸形。第三十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗原理葉綠體色素是植物吸收太陽光能進行光合作用的重要物質(zhì)，主要由葉綠素a、葉綠素b、胡蘿卜素和葉黃素組成。根據(jù)它們在有機溶劑中的溶解特性，可用丙酮將它們從葉片中提取出來。并可根據(jù)它們在不同有機溶劑中的溶解度不同以及在吸附劑上的吸附能力不同，將它們彼此分離開。第三十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗原理葉綠素是一種雙羧酸的酯，可與堿發(fā)生皂化反應(yīng)，產(chǎn)生的鹽能溶于水，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開。葉綠素在光照下可產(chǎn)生暗紅色的熒光。葉綠素中的鎂可被H+取代而生成褐色的去鎂葉綠素；加入銅鹽作用，后者則成為綠色的銅代葉綠素。銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作綠色植物的浸漬標(biāo)本。第三十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗器材與試劑實驗儀器大試管，臺天平，研缽，量筒，漏斗，橡皮塞，新華濾紙，毛細管，剪刀，分液漏斗，燒杯實驗試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂，無水硫酸鈉，四氯化碳，乙醚，甲醇，氫氧化鉀，鹽酸，醋酸銅實驗材料新鮮菠菜葉片第三十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗步驟葉綠體色素的提取分離稱取新鮮葉片2g，放入研缽中加丙酮5mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加丙酮10mL，以漏斗過濾之，即為色素提取液。把展層用的濾紙剪成2cm×20cm的紙條，將其一端剪去兩側(cè)，中間留一長約1.5cm，寬約0.5cm的窄條。用毛細管吸取葉綠素溶液點于窄條的上方，注意一次所點溶液不可過多，風(fēng)干后再點，重復(fù)多次。第三十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗步驟葉綠體色素的提取分離在大試管中加入四氯化碳3～5mL及少許無水硫酸鈉。然后將濾紙條固定于軟木塞上，插入試管內(nèi)，使窄條浸入溶劑中（色素點要略高于液面），蓋緊軟木塞，直立于陰暗處進行層析。待四種色素帶清晰展開后，取出濾紙條，稍干后用鉛筆勾出色素帶邊緣。第三十七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象取上述色素提取液少許于試管中，分別在反射光和透射光一側(cè)觀察提取液的顏色。銅代反應(yīng)取上述色素提取液少許于試管中，1滴1滴加濃鹽酸，直至溶液出現(xiàn)褐綠色。然后加醋酸銅晶體少許，慢慢加熱溶液，則又產(chǎn)生鮮亮的綠色。第三十八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗步驟葉綠體色素的理化性質(zhì)黃色素與綠色素的分離取上述色素提取液10mL，加到盛有20mL乙醚的分液漏斗中，搖動分液漏斗，并沿漏斗邊緣加入30mL蒸餾水，輕輕搖動分液漏斗，靜止片刻，溶液即分為兩層。色素已轉(zhuǎn)入上層乙醚中，棄去下層丙酮和水，再用蒸餾水沖洗乙醚溶液1～2次。然后加入5mL30%KOH甲醇溶液，用力搖動分液漏斗，靜置約10min，再加蒸餾水約10mL，搖動后靜置，則得到黃色素層和綠色素層。第三十九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗結(jié)果葉綠體色素的提取分離濾紙條自上而下的色素帶分別是橙色的胡蘿卜素黃色的葉黃素藍綠色的葉綠素a

黃綠色的葉綠素b第四十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的提取分離及理化性質(zhì)的鑒定實驗結(jié)果葉綠體色素的理化性質(zhì)葉綠素的熒光現(xiàn)象銅代反應(yīng)黃色素與綠色素的分離第四十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測定實驗原理葉綠素和類胡蘿卜素都有光學(xué)特性，表現(xiàn)出一定的吸收光譜，可用分光光度計精確測定。如果混合液中的兩個組分，它們的光譜吸收雖然有明顯的差異，但吸收曲線彼此有些重疊，可根據(jù)Lambert-Beer定律，通過代數(shù)方法，計算一種組分由于另一種組分存在時對光密度的影響。最后分別得到兩種組分的含量。第四十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測定實驗原理根據(jù)Lambert-Beer定律，最大吸收光譜峰不同的兩個組分的混合液，它們的濃度C與光密度OD之間有如下關(guān)系：

OD1=

Ca·ka1+C

b·kb1OD2=

Ca·ka2+C

b·kb2Ca為組分a的濃度（g·L－1），Cb為組分b的濃度（g·L－1）；

OD1為在波長λ1（即組分a的最大吸收峰波長）時，混合液的光密度值，

OD2為在波長λ2（即組分b的最大吸收峰波長）時，混合液的光密度值；

ka1和ka2分別為組分a的比吸收系數(shù)，kb1和kb2分別為組分b的比吸收系數(shù)第四十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測定實驗原理葉綠素a和b的80%丙酮溶液的比吸收系數(shù)將數(shù)據(jù)代入上式經(jīng)整理后，并把濃度單位改為mg/LCa=12.7OD663

－2.69OD645Cb=22.9OD663

－4.68OD645CT=Ca+Cb=8.02OD663

＋20.21OD645波長/nm葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60第四十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測定實驗器材與試劑實驗儀器分光光度計，離心機，臺天平，研缽，量筒，剪刀，移液管實驗試劑丙酮，碳酸鈣，石英砂實驗材料新鮮菠菜葉片第四十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測定實驗步驟稱取新鮮葉片1g，放入研缽中加丙酮5mL，少許碳酸鈣和石英砂，研磨成均漿，再加80%丙酮5mL，將勻漿轉(zhuǎn)入離心管，并用80%丙酮洗滌研缽，一并轉(zhuǎn)入離心管，離心后去沉淀，上清液用80%丙酮定容至20mL。取上述色素提取液1mL，加80%丙酮6mL稀釋，轉(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為對照，在400～500nm波長區(qū)每隔10nm，在500～600nm波長區(qū)每隔20nm，在600～700nm波長區(qū)每隔10nm，測定光密度，以繪制吸收光譜。另外測定645nm和663nm處的光密度，以計算葉綠素a和b的含量。第四十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六葉綠體色素的吸收光譜及葉綠素a、b含量的測定實驗結(jié)果吸收光譜葉綠素a和b含量計算波長/nm400410420430440450460470480490500520540光密度波長/nm560580600610620630640650660670680690700光密度波長/nm645663光密度第四十七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實驗原理在低溫下以等滲溶液制備完整的葉綠體，將其懸浮于適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)介質(zhì)中，并有氧化劑如2，6-二氯酚靛酚（簡稱DCIP）存在時，在光照下會放出O2，同時將染料還原，這就是葉綠體中進行的光還原反應(yīng)。染料被還原后，顏色從藍色變?yōu)闊o色，因此可根據(jù)溶液OD值的變化進行測定，該變化在4-5min內(nèi)呈線性關(guān)系。第四十八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實驗器材與試劑實驗儀器離心機，研缽，天平，紗布，試管，100W燈泡，722型分光光度計實驗試劑提取介質(zhì)50mmol/L（pH7.5）Tris-HCl緩沖液（內(nèi)含0.4mmol/L蔗糖、10mmol/LNaCl），1mmol/L2，6-DCIP（2，6-二氯酚靛酚）溶液（用上述提取介質(zhì)配制）實驗材料新鮮菠菜葉片第四十九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實驗步驟離體葉綠體的提取稱取10g新鮮菠菜葉片（去除粗葉脈），剪碎，加10mL預(yù)冷的提取介質(zhì)（分兩次加入）和少許石英砂，冰浴中迅速研磨成勻漿，再加10mL提取介質(zhì)，用4層紗布將勻漿過濾于一離心管中，2500r/min離心3min，棄沉淀，上清液4000r/min離心10min，棄上清。所得沉淀即為完整葉綠體。用15mL提取介質(zhì)使葉綠體懸浮，置冰浴中備用。第五十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實驗步驟葉綠體光還原反應(yīng)的測定取3支潔凈試管，分別編號，按下表加入試劑：注：2號管加熱煮沸，然后加染料，3號管為比色時的空白對照將試管置于離100W燈光60cm處照光，3min后于620nm處測光密度。管號提取介質(zhì)/mL葉綠體懸液/mL煮沸時間/min染料/mL14.50.5－124.50.515135.50.5－－第五十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六離體葉綠體光還原反應(yīng)

（希爾反應(yīng)）實驗結(jié)果1號管的OD620值2號管的OD620值說明：第五十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六環(huán)境因素對光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實驗原理植物光合強度的大小受光強、光質(zhì)、CO2濃度、溫度等環(huán)境條件的影響。利用真空滲入法排除細胞間隙的空氣，使葉片沉于水中。由于光合作用放出的O2在水中溶解度很小，而在細胞間積累，結(jié)果使原來下沉的葉片上浮，根據(jù)上浮所需時間長短，即能比較光合作用的強弱。第五十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六環(huán)境因素對光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實驗器材與試劑實驗儀器打孔器，注射器，100W燈泡，小燒杯實驗材料新鮮青菜葉片第五十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六環(huán)境因素對光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實驗步驟選取健壯、葉齡相似的成熟葉片，用打孔器避開主脈打取葉圓片共60片，置于注射器中，注入水，抽氣至葉片沉入水中。取6只小燒杯，各倒入20mL冷開水，用吸管向其中5只小燒杯的水中吹氣，使CO2達到飽和。然后于6只小燒杯中各放入10片葉圓片，分別置于不同的條件下。杯號光強光質(zhì)CO21強白光飽和2強紅光飽和3強藍光飽和4強綠光飽和5強白光微量6弱白光飽和第五十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六環(huán)境因素對光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實驗步驟記錄各燒杯中每一葉圓片上浮所需的時間，計算各處理中葉圓片上浮所需的平均時間或一定時間內(nèi)上浮的葉圓片數(shù)。比較不同條件下光合作用的強弱。第五十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六環(huán)境因素對光合作用的影響

（葉圓片上浮法）實驗結(jié)果分析：杯號葉圓片上浮所需的平均時間123456第五十七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物呼吸強度的測定

（小籃子法）實驗原理利用Ba(OH)2

溶液吸收呼吸過程中釋放的CO2，實驗結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留的Ba(OH)2，從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差，即可計算出呼吸過程中釋放CO2的量。第五十八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物呼吸強度的測定

（小籃子法）實驗器材與試劑實驗儀器廣口瓶，酸式滴定管，紗布實驗試劑0.05mol/LBa(OH)2，1/44mol/L草酸溶液（每mL相當(dāng)于1mgCO2），指示劑實驗材料萌發(fā)的小麥種子第五十九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物呼吸強度的測定

（小籃子法）實驗步驟稱取萌發(fā)的小麥種子15g，包入紗布袋內(nèi)，將紗布袋掛在廣口瓶的橡皮瓶塞上，注意不要掛得太低。在廣口瓶中加0.05mol/LBa(OH)225mL，塞上瓶塞，用熔化的石蠟密封瓶口，防止漏氣。每10min左右輕輕搖動廣口瓶，破壞溶液表面的BaCO3薄膜，以利對CO2的吸收。1h后，打開瓶塞，迅速加2滴指示劑，用1/44mol/L草酸滴定，直到綠色變成紫色為止。記錄所耗用的草酸溶液的體積（mL）數(shù)。第六十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物呼吸強度的測定

（小籃子法）實驗步驟另取同樣重量的煮沸殺死的小麥種子，作同樣測定，以次作為對照。計算呼吸強度。第六十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物呼吸強度的測定

（小籃子法）實驗結(jié)果死種子裝置滴定所耗草酸量（V0）：活種子裝置滴定所耗草酸量（V1）：呼吸強度（CO2，mg/g·h）=（V0

－V1）/種子鮮重（g）×?xí)r間（h）第六十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六過氧化物酶活性的測定實驗原理過氧化物酶廣泛存在于植物的各個組織器官中。在有過氧化氫存在下，過氧化物酶能使愈創(chuàng)木酚氧化，生成茶褐色物質(zhì)，可用分光光度計測量生成物的含量。第六十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六過氧化物酶活性的測定實驗器材與試劑實驗儀器分光光度計，離心機，天平，研缽實驗試劑愈創(chuàng)木酚，30%

過氧化氫，20mmol/LKH2PO4，100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0），反應(yīng)混合液[100mmol/L磷酸緩沖液（pH6.0）50mL，加入愈創(chuàng)木酚28μL，加熱攪拌至愈創(chuàng)木酚溶解，冷卻后加入30%

過氧化氫19μL，混合均勻，保存于冰箱中]實驗材料馬鈴薯塊莖第六十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六過氧化物酶活性的測定實驗步驟粗酶液的提取稱取去皮馬鈴薯塊莖1g，加20mmol/LKH2PO4

5mL，于研缽中研磨成均漿，以4000r/min離心15min，收集上清液保存于冷處，所得殘渣在用5mLKH2PO4

溶液提取一次，合并兩次上清液。酶活性的測定取比色杯2

只，于一只中加入反應(yīng)混合液3mL，KH2PO4

1mL，作為校零對照，另一只中加入反應(yīng)混合液3mL，上述酶液1mL，立即于分光光度計470nm

測量OD

值，每隔1min

讀數(shù)一次。以每分鐘OD變化值表示酶活性大小。第六十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六過氧化物酶活性的測定實驗結(jié)果ΔOD470/min·鮮重g=次數(shù)12345678910OD470第六十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實驗原理凡有生命力的種子胚部，在呼吸作用過程中都有氧化還原反應(yīng)，而無生命活力的種胚則無此反應(yīng)。當(dāng)TTC滲入種胚的活細胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶（NADH或NADPH）上的氫還原時，便由無色TTC變?yōu)榧t色的TTF。第六十七頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實驗器材與試劑實驗儀器恒溫箱，燒杯，培養(yǎng)皿，鑷子，刀片實驗試劑0.5%TTC溶液實驗材料大麥、小麥、秈谷或粳谷的種子第六十八頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實驗步驟浸種將待測種子在30～35℃溫水中浸種，以增強種胚的呼吸強度。顯色取吸脹種子100粒，，用刀片沿種子胚的中心線縱切為兩半，將其中的一半置于培養(yǎng)皿中，加入適量的0.5%TTC溶液覆蓋種子。然后置于30℃恒溫箱中1h。觀察結(jié)果。將另一半在沸水中煮5min殺死胚，作同樣染色處理，作為對照觀察。第六十九頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（氯化三苯基四氮唑法，TTC法）實驗步驟計算活種子的百分?jǐn)?shù)。實驗結(jié)果煮沸殺死的種子胚部均為白色。未煮沸殺死的種子胚部大部分為紅色，少數(shù)為白色?；罘N子的百分率為：第七十頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（紅墨水法）實驗原理凡活細胞的原生質(zhì)膜具有選擇性吸收物質(zhì)的能力，而死的種子胚細胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便能進入死細胞而染色。第七十一頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（紅墨水法）實驗器材與試劑實驗儀器恒溫箱，燒杯，培養(yǎng)皿，鑷子，刀片實驗試劑5%紅墨水實驗材料大麥、小麥、秈谷或粳谷的種子第七十二頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（紅墨水法）實驗步驟浸種將待測種子在30～35℃溫水中浸種，以增強種胚的呼吸強度。顯色取吸脹種子100粒，用刀片沿種子胚的中心線縱切為兩半，將其中的一半置于培養(yǎng)皿中，加入5%紅墨水淹沒種子。染色10～15min。倒去紅墨水，用水沖洗種子，至沖洗液無色，觀察結(jié)果。第七十三頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六種子活力的快速測定

（紅墨水法）實驗步驟將另一半在沸水中煮5min殺死胚，作同樣染色處理，作為對照觀察。計算活種子的百分?jǐn)?shù)。實驗結(jié)果煮沸殺死的種子胚與胚乳均染上紅色。未煮沸殺死的種子胚部大部分為白色或淺紅色，少數(shù)為紅色?；罘N子的百分率為：第七十四頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物生長調(diào)節(jié)劑對植物插條不定根發(fā)生的影響實驗原理用植物生長調(diào)節(jié)劑（生長素類）處理插條，可以促進細胞恢復(fù)分裂能力，誘導(dǎo)根原基發(fā)生，促進不定根的生長。第七十五頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物生長調(diào)節(jié)劑對植物插條不定根發(fā)生的影響實驗器材與試劑實驗儀器電子天平，燒杯，移液管，量筒等實驗試劑1000mg/L吲哚乙酸溶液實驗材料各種植物材料第七十六頁，共八十五頁，編輯于2023年，星期六植物