我的細(xì)胞融合與單克隆抗體

學(xué)習(xí)目標(biāo)1、掌握動(dòng)物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜

交的區(qū)別與聯(lián)系。2、簡(jiǎn)述動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體制

備的過程。3、了解單克隆抗體在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中的應(yīng)

用，并能說出應(yīng)用實(shí)例。當(dāng)前第1頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)自學(xué)指導(dǎo)怎樣才能順利達(dá)到上述目標(biāo)？要靠大家緊張有效的自學(xué)。請(qǐng)同學(xué)們認(rèn)真閱讀教材P52-54，思考下列問題，8分鐘后進(jìn)行檢測(cè)。比一比，看誰知識(shí)掌握得最牢固.當(dāng)前第2頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)1、動(dòng)物細(xì)胞融合的概念是什么？2、動(dòng)物細(xì)胞融合的原理是什么？誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合的方法有哪些？3、抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？4、一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗

體嗎？5、融合后培養(yǎng)液中有幾種細(xì)胞？6、怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有

何優(yōu)點(diǎn)？當(dāng)前第3頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)先學(xué)（一）學(xué)生認(rèn)真閱讀教材P52—54，獨(dú)立完成上述思考題（教師巡視，保證每位學(xué)生都集中精力)(時(shí)間8分鐘）（二）提問：隨機(jī)點(diǎn)名學(xué)生回答，如有錯(cuò)誤，

教師引導(dǎo)其他學(xué)生更正、討論。（三）檢測(cè)、板演1.出示檢測(cè)題2.讓三名學(xué)生板演，其他學(xué)生做到筆記本上，教師巡視，搜集檢測(cè)中出現(xiàn)的錯(cuò)誤。當(dāng)前第4頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)1.動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（）A．動(dòng)物細(xì)胞融合 B．胚胎移植C．動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)D．核移植２．在動(dòng)物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的比較中，正確的是（）A．結(jié)果是相同的B．雜種細(xì)胞的形成過程基本相同C．操作過程中酶的作用相同D．誘導(dǎo)融合的手段相同CB當(dāng)前第5頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)3、用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的組織和細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動(dòng)物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細(xì)胞（）

A.容易產(chǎn)生各種變異B．具有更強(qiáng)的全能性

C.取材十分方便D．分裂增殖的能力強(qiáng)4、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與某種細(xì)胞融合，得到雜交細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細(xì)胞融合的是（）

A.經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞

B.沒經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

C.經(jīng)過免疫的T淋巴細(xì)胞

D.沒經(jīng)過免疫的Ｂ淋巴細(xì)胞DA當(dāng)前第6頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)5、單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（）①淋巴細(xì)胞②小鼠骨髓瘤細(xì)胞③B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞④小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞⑤雜交瘤細(xì)胞

A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C當(dāng)前第7頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)后教（一）更正：

1.教師公布答案、學(xué)生自改。2.自己尋找錯(cuò)誤原因或同桌之間小聲討論（二）點(diǎn)評(píng)：

1.對(duì)于學(xué)生討論后不能解決的問題，教師進(jìn)行有針對(duì)性的分析和講解2.評(píng)檢測(cè)題，點(diǎn)撥知識(shí)點(diǎn)當(dāng)前第8頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)融合的原生質(zhì)體AB再生細(xì)胞壁雜種細(xì)胞AB雜種植株脫分化愈傷組織再分化原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A去壁人工誘導(dǎo)植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B回顧植物體細(xì)胞雜交過程去壁當(dāng)前第9頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)一、動(dòng)物細(xì)胞融合是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過程。也稱細(xì)胞雜交⑴自然發(fā)生：受精卵⑵人工誘導(dǎo)：利用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞：融合后形成的具有兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞。概念：當(dāng)前第10頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)細(xì)胞膜的流動(dòng)性原理：誘導(dǎo)融合方法：物理法:化學(xué)法:生物法：滅活的病毒離心、振動(dòng)、電激等聚乙二醇（PEG）當(dāng)前第11頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)仙臺(tái)病毒紫外線滅活喪失感染活性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）①什么是病毒的滅活？滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結(jié)構(gòu)。②滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。當(dāng)前第12頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)滅活的病毒顆粒黏附于細(xì)胞表面細(xì)胞膜被病毒顆粒穿通細(xì)胞膜連接細(xì)胞融合，形成雜種細(xì)胞（細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性）當(dāng)前第13頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)正在融合的淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞正在融合的雞血細(xì)胞當(dāng)前第14頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)融合過程：把兩個(gè)不同的動(dòng)物細(xì)胞放在一起，用滅活的病毒處理細(xì)胞，它們先發(fā)生質(zhì)融合，再出現(xiàn)核融合，進(jìn)而形成雜交細(xì)胞。融合后的雜交細(xì)胞經(jīng)過有絲分裂后仍能形成兩個(gè)完整的雜交細(xì)胞當(dāng)前第15頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義打破生殖隔離，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能廣泛應(yīng)用多個(gè)學(xué)科領(lǐng)域（細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種的培育）重要用途：制備單克隆抗體。當(dāng)前第16頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)二、單克隆抗體傳統(tǒng)血清抗體的制備：方法：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原，然后從動(dòng)物血清中分離所需要的抗體。純度低；產(chǎn)量低、特異性差傳統(tǒng)血清抗體的制備的缺陷：當(dāng)前第17頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)使用相應(yīng)的抗體檢測(cè)乙肝病毒——抗原抗體生成的原理

醫(yī)院一般檢測(cè)人體內(nèi)是否存在乙肝病毒的方法乙肝病毒模式圖

凡能夠引起機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)叫做抗原。⑴什么是抗原？例如花粉、病菌、病毒等。有時(shí)自身的組織或細(xì)胞也會(huì)成為抗原，如癌細(xì)胞等。當(dāng)前第18頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)抗原決定簇：抗原表面具有的某些特定的化學(xué)基團(tuán)，能決定抗原特異性，是免疫細(xì)胞識(shí)別抗原的重要依據(jù)。各種抗原的決定簇?cái)?shù)目不同，同一抗原的決定簇可能有多種。當(dāng)前第19頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)

⑵什么是抗體？由何種細(xì)胞產(chǎn)生？主要分布在哪里?起何作用？

當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激劑后由效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）產(chǎn)生的，并且能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白——抗體。

抗體分布于血清中，也分布于組織液及外分泌液中。當(dāng)前第20頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)抗體與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合當(dāng)前第21頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)

一種抗原有多種不同的決定簇,刺激的是多種B細(xì)胞,作用于不同的B細(xì)胞后,會(huì)產(chǎn)生多種抗體當(dāng)前第22頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)血清抗體（也稱多克隆抗體）由血清中提取的抗體是由不同淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的多種抗體的混合物，可達(dá)百萬種以上，稱為多克隆抗體。特點(diǎn)：產(chǎn)量低、純度低、特異性差、反應(yīng)不夠靈敏?？乖患兛贵w不純

抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激效應(yīng)B抗體當(dāng)前第23頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)

抗體

抗原應(yīng)答抗體的不純性

動(dòng)物細(xì)胞受到抗原刺激,引起免疫反應(yīng)產(chǎn)生的球蛋白.不是自己的而又能引起免疫應(yīng)答反應(yīng)的物質(zhì)就是抗原.一種抗原有多種不同的決定簇,刺激的是多種B細(xì)胞,作用于不同的B細(xì)胞后,會(huì)產(chǎn)生多種抗體,這是多克隆的,故不純!制備單克隆抗體的思路抗原

B細(xì)胞漿細(xì)胞抗體

刺激當(dāng)前第24頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)怎么才能得到純的抗體?光純還不行,還要大量.怎么辦?但，有問題:找，什么細(xì)胞能無限繁殖呢?思路就出來了:要想獲單一的純抗體,就必須從一個(gè)B細(xì)胞出發(fā).每一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體。讓B細(xì)胞大量繁殖(克隆)就可以產(chǎn)生大量抗體了.B細(xì)胞是不能無限繁殖的.怎么辦?癌!只有癌細(xì)胞.但它不能產(chǎn)生抗體.癌細(xì)胞能無限繁殖,但不能產(chǎn)生抗體.B細(xì)胞能產(chǎn)生抗體,但不能大量繁殖.融合呀!只要將兩個(gè)細(xì)胞融合即可互補(bǔ).當(dāng)前第25頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)⑵如何誘導(dǎo)融合？

加入聚乙二醇（PEG）⑴如何得到B淋巴細(xì)胞？制備單克隆抗體的過程當(dāng)前第26頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)⑶細(xì)胞兩兩融合后，有哪些類型？B-BB-瘤(雜交瘤細(xì)胞)瘤-瘤⑷如何篩選出雜交瘤細(xì)胞？

單克隆抗體制備過程中，總共有兩次篩選，第一次篩選出雜交瘤細(xì)胞，第二次篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，兩次篩選的原理和方法是不相同的。

①首先用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞當(dāng)前第27頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)①細(xì)胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。②人淋巴細(xì)胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

③鼠骨髓瘤細(xì)胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。你想到篩選雜交瘤細(xì)胞的方案了么？

小資料：當(dāng)前第28頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)在培養(yǎng)液中加入氨基蝶呤，收集增殖細(xì)胞！加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細(xì)胞及其彼此融合的細(xì)胞就不能增殖，但人淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后的雜種細(xì)胞因?yàn)榭梢岳昧馨图?xì)胞中的S途徑合成DNA而增殖。當(dāng)前第29頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)通常采用有限稀釋克隆細(xì)胞的方法，將雜交瘤細(xì)胞多倍稀釋，接種在多孔細(xì)胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)，使每孔細(xì)胞不超過一個(gè)，再由這些單細(xì)胞克隆生長(zhǎng)，然后檢測(cè)各孔上清液中細(xì)胞分泌的抗體，那些上清液可與特定抗原結(jié)合的培養(yǎng)孔為陽性孔。最終選出分泌預(yù)定特異抗體的雜交細(xì)胞株進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。②再篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞

在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。當(dāng)前第30頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)(5)如何得到大量的單克隆抗體？

體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體——化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)當(dāng)前第31頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)單克隆抗體篩選雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞體外或體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)篩選骨髓瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞融合特異性雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系提取經(jīng)過免疫的B淋巴細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備過程：特點(diǎn)：既能產(chǎn)生抗體又能大量繁殖特點(diǎn)：特異性強(qiáng)靈敏度高可大量制備注射抗原免疫當(dāng)前第32頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（一選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細(xì)胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細(xì)胞（二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細(xì)胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞特點(diǎn)：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。當(dāng)前第33頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)單克隆抗體制備過程當(dāng)前第34頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)4、單抗隆抗體的應(yīng)用①作為診斷試劑②定位診斷腫瘤、心血管畸形等疾病

用于體外診斷人類和動(dòng)植物疾病及病原鑒定，純度高、特異性強(qiáng)，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。③用于治療疾病和運(yùn)載藥物

利用同位素標(biāo)記單抗，在特定組織成像

制成生物導(dǎo)彈，將藥物定向帶到癌細(xì)胞所在的位置，在原位殺死癌細(xì)胞，療效高、副作用小。單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可以大量制備。當(dāng)前第35頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)當(dāng)前第36頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)

當(dāng)前第37頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)⑵用于治療疾病和運(yùn)載藥物①特異性強(qiáng)、靈敏度高

生物導(dǎo)彈——單克隆抗體＋抗癌藥物

②療效高、毒副作用小結(jié)合同位素的單抗-----生物導(dǎo)彈當(dāng)前第38頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)結(jié)合同位素的單抗-----生物導(dǎo)彈單抗放射性同位素當(dāng)前第39頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)制備單克隆抗體1、常規(guī)抗體獲得的方法及其特點(diǎn)2、單克隆抗體制備的原理◆利用

產(chǎn)生特異性抗體的功能?！衾?/p>

無限增殖的特性?！衾?/p>

技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得雜交瘤細(xì)胞?！衾?/p>

技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)3、單克隆抗體的制備4、單克隆抗體的應(yīng)用當(dāng)前第40頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)項(xiàng)目動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交原理細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性和植物細(xì)胞的全能性融合前提分散成單個(gè)細(xì)胞去除細(xì)胞壁誘導(dǎo)方法聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、滅活病毒聚乙二醇、離心、振動(dòng)、電激、結(jié)果獲得雜種細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物獲得雜種植株用途制備單克隆抗體培育作物新品種意義使遠(yuǎn)緣雜交成為可能克服遠(yuǎn)緣雜交障礙當(dāng)前第41頁\共有44頁\編于星期四\17點(diǎn)⑶圖中B為________過程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________

。B體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到小鼠腹腔AC

1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案⑴該實(shí)驗(yàn)方案的