第九次實驗方法比較試驗

第九次實驗方法比較試驗第一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

方法比較試驗是將候選方法與準(zhǔn)確度已知的方法做對比，以評價候選方法的準(zhǔn)確度。它同時可檢測候選方法的恒定誤差和比例誤差的大小。第二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一教學(xué)目的與要求1.掌握方法比較試驗的原理和評價。2.掌握己糖激酶法測血糖和氧化酶法測血糖的測定原理。3.熟悉己糖激酶法和氧化酶法測定血清血糖的操作過程。

第三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一一、試劑與材料1.己糖激酶法測定血糖試劑盒（工作液：試劑A、試劑B按2：1混合）。2.氧化酶法測定血糖試劑盒（工作液：試劑A、試劑B按2：1混合）。3.半自動生化分析儀。4.實驗血清。第四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一三、血糖的測定（己糖激酶法已講）（一）實驗原理Trinder反應(yīng):GOD葡萄糖酸＋2H2O2氧化酶法葡萄糖＋2H2O＋O2

H2O2

＋4-AAP＋酚

POD苯醌亞胺＋2H2O＋HCl第五頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一2.混勻，37℃水浴7分鐘，波長

500nm比色。（二）操作方法

工作液1ml蒸餾水10ul葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)10ul血清10ul

1.空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測定管

工作液1ml混合混合第六頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一3.結(jié)果計算測定管吸光度GLU（mmol/L)＝

×5.56

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度GLU（mmol/L)＝

×5.56

GLU（mmol/L)＝

×5.56

GLU（mmol/L)＝

×5.56

第七頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一4.注意事項1.新配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液須放置2h以上(最好過夜)，待變旋平衡后方可應(yīng)用.2.尿酸會干擾過氧化物酶反應(yīng)，使結(jié)果偏低。3.還原性物質(zhì)可競爭H2O2,使結(jié)果偏低。4.嚴(yán)重黃疽、溶血及乳糜樣血清使結(jié)果偏高應(yīng)先制備無蛋白血濾液，然后再進行測定。

第八頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一四、方法比較

以葡萄糖已糖激酶法作為參比方法，葡萄糖氧化酶法為候選方法進行比較。

第九頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一1.收集標(biāo)本每天收集高、中、低不同濃度標(biāo)本8份，5天共40份。2.測定將標(biāo)本編號，分別用兩種方法先從1-8順序測定，再從8-1順序測定，記錄測定結(jié)果。重復(fù)5天。

第十頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一

以對比方法的結(jié)果為橫坐標(biāo)被評價方法的結(jié)果為縱坐標(biāo)繪制散點圖。3.繪制散點圖YX??????????第十一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一4.檢查散點圖有無明顯離群點（1）分別計算每對結(jié)果差值，如：

X1-Y1、X2-Y2.....（2）計算所有差值的平均差值。（3）離群判斷以4倍平均差值作判斷限。某對差值超出4倍平均差值則視為離群點，剔除，若有兩個離群點，則另做標(biāo)本補充8分結(jié)果。第十二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一5.回歸及相關(guān)分析

根據(jù)直線回歸分析，求出回歸方程y=a+bx及相關(guān)系數(shù)r。截距a反映恒定系統(tǒng)誤差的大小，斜率b反映比例系統(tǒng)誤差的大小，相關(guān)系數(shù)反映兩種方法相關(guān)性的密切程度，r≥0.975或r≥0.95，可接受。第十三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一6.計算系統(tǒng)誤差

根據(jù)回歸方程的a、b值，可以計算候選方法的系統(tǒng)誤差（SE）；并與不同醫(yī)學(xué)決定水平（Xc）的允許誤差（TEa）作比較。要求SE=（a+bXc）-Xc<1/2TEa第十四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期一7.配對t檢驗

通過統(tǒng)計軟件進行配對t檢驗，t值是方法比較實驗中系統(tǒng)誤差和隨機誤差的比值，若t<t0.05(v)，表明兩種方法間的系統(tǒng)誤差和隨機誤差量相比相差不大，