細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)

普通復(fù)式光學(xué)顯微鏡（lightmicroscope）雙目顯微鏡當(dāng)前第1頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)正置顯微鏡倒置顯微鏡當(dāng)前第2頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)相差顯微鏡（phase-contrastmicroscope）（光程差或相位差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹睿嗖畎澹┪⒎指缮骘@微鏡（differential-interferencemicroscope）（厚度差轉(zhuǎn)變?yōu)槊靼挡?；增加樣品反差，立體感強(qiáng)）當(dāng)前第3頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)熒光顯微鏡（fluorescencemicroscope）當(dāng)前第4頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)熒光顯微鏡及其照片當(dāng)前第5頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)黏著斑蛋白細(xì)胞骨架當(dāng)前第6頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)激光共聚焦原理激光共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope）當(dāng)前第7頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)激光共聚焦顯微鏡及其顯微圖像當(dāng)前第8頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)黏著斑蛋白細(xì)胞骨架（應(yīng)力纖維）共定位分析當(dāng)前第9頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)暗視野成像原理顯微鏡的暗視野功能當(dāng)前第10頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)(A)明視野顯微術(shù)；(B)相差顯微術(shù)；(C)微分干涉顯微術(shù)；(D)暗視野顯微術(shù)當(dāng)前第11頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)熒光漂白恢復(fù)技術(shù)（fluorescencerecoveryafterphotobleaching,FRAP）當(dāng)前第12頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)（fluorescenceresonanceenergytransfer,FRET）當(dāng)前第13頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)1）電鏡基本知識(shí)和結(jié)構(gòu)（波長(zhǎng)小于0.1nm）2）樣品制備（超薄切片，負(fù)染色，冰凍蝕刻，三維重構(gòu)，掃描）3）電鏡種類掃描電子顯微鏡透射電子顯微鏡掃描隧道顯微鏡和原子力顯微鏡2.1.2電子顯微鏡技術(shù)當(dāng)前第14頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)透射電鏡及其圖像當(dāng)前第15頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)透射電鏡照片當(dāng)前第16頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)免疫電鏡照片當(dāng)前第17頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)掃描電鏡及其圖像當(dāng)前第18頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)掃描電鏡照片當(dāng)前第19頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)冰凍蝕刻技術(shù)當(dāng)前第20頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)冰凍蝕刻電鏡技術(shù)照片當(dāng)前第21頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)負(fù)染色電鏡技術(shù)照片當(dāng)前第22頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.2.1高速、超速和梯度密度離心分離各種細(xì)胞器、生物大分子及其復(fù)合物2.2細(xì)胞組分的分析方法當(dāng)前第23頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)差速離心密度梯度離心當(dāng)前第24頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)差速離心過程當(dāng)前第25頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.2.2細(xì)胞內(nèi)核酸、蛋白質(zhì)、酶、糖類、脂類的顯色DNA：福爾根（Feulgen）反應(yīng)－－紫紅色多糖類：PAS反應(yīng)－－黃色脂肪：蘇丹III－－紅色蛋白質(zhì)：米倫（Millon）－－紅色2.2.3特異抗原的定性與定位免疫熒光免疫電鏡免疫沉淀Westernblotting當(dāng)前第26頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.2.5特異核酸標(biāo)記技術(shù)InsituhybridizationNorthernblot(RNA);Southernblot(DNA)2.2.4放射性標(biāo)記生物大分子的合成和動(dòng)態(tài)3H（DNA合成）35S（蛋白質(zhì)合成）14C（碳水化合物合成）32P（核酸合成）定性、定位、半定量研究（標(biāo)記，自顯影）32P（14天）,14C（5760年）,3H（12年）,35S（87天）,131I（8）當(dāng)前第27頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)原位雜交技術(shù)當(dāng)前第28頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.2.6定量細(xì)胞化學(xué)技術(shù)2.2.7細(xì)胞內(nèi)大分子的分離與分析柱層析、分子篩、免疫吸附、免疫沉淀等方法分離蛋白質(zhì)組分及復(fù)合物（交聯(lián)和變性）顯微分光光度術(shù)（紫外顯微分光光度儀、可見光顯微分光光度染色）流式細(xì)胞儀當(dāng)前第29頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)蛋白質(zhì)電泳分析當(dāng)前第30頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)流式細(xì)胞術(shù)當(dāng)前第31頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.3細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞工程與顯微操作技術(shù)2.3.1細(xì)胞培養(yǎng)

1）植物細(xì)胞（單倍體細(xì)胞培養(yǎng)，原生質(zhì)體培養(yǎng)，體細(xì)胞培養(yǎng)）

2）動(dòng)物細(xì)胞（原代細(xì)胞培養(yǎng)，永生細(xì)胞系）

3）非細(xì)胞體系（DNA復(fù)制，RNA轉(zhuǎn)錄，蛋白質(zhì)合成，高爾基體的膜泡運(yùn)輸，細(xì)胞核裝配等）細(xì)胞提取物，細(xì)胞核提取物當(dāng)前第32頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞的克隆當(dāng)前第33頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.3.2細(xì)胞工程1）細(xì)胞融合與雜交植物細(xì)胞先去壁；融合方式：仙臺(tái)病毒或聚乙二醇介導(dǎo)，電融合等同核融合細(xì)胞，異核融合細(xì)胞，染色體丟失

2）單克隆抗體技術(shù)2.3.3顯微操作技術(shù)1975年英國科學(xué)家MilsteinandKohler,1984年獲諾貝爾獎(jiǎng)B淋巴細(xì)胞+小鼠骨髓瘤轉(zhuǎn)移細(xì)胞核、細(xì)胞器、基因等2.3.4轉(zhuǎn)基因、基因沉默、基因敲除、模式生物等當(dāng)前第34頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)轉(zhuǎn)基因技術(shù)當(dāng)前第35頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)顯微操作儀當(dāng)前第36頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)顯微操作示意圖當(dāng)前第37頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)當(dāng)前第38頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)MarioCapecchi(Late1980s)(UniversityofUtah)embryonicstemcellsininnercellmassastargetcells1/104cellsundergoaprocessofhomologousrecombination.基因敲除技術(shù)當(dāng)前第39頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)2.4細(xì)胞生物學(xué)研究的模式生物病毒（轉(zhuǎn)基因載體）細(xì)菌（大腸桿菌作為基因工程菌株）酵母（真核表達(dá)載體，基因功能分析）線蟲（1000個(gè)左右細(xì)胞構(gòu)成）黏菌（同步化材料）蛙（卵細(xì)胞大，易操作）果蠅（遺傳背景清楚，表型易掌握）斑馬魚（胚胎發(fā)育研究的好材料）小鼠（與人更接近）當(dāng)前第40頁\共有42頁\編于星期四\21點(diǎn)學(xué)生報(bào)告題目：

1，轉(zhuǎn)基因技術(shù)及其應(yīng)用；2，細(xì)胞工程技術(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中的應(yīng)用；3，基因敲除技術(shù)及其應(yīng)用；4，模式生物線蟲及其在細(xì)胞生物學(xué)研究中的應(yīng)用；5，模式生物斑馬魚及其在細(xì)胞生物學(xué)研究中的應(yīng)用；

按學(xué)號(hào)分組，按組確定題目，每個(gè)組確定一名組長(zhǎng)并委派一個(gè)