酸奶中乳酸菌菌落總數(shù)測定

存檔日期：存檔編號連云港師范高等?？茖W(xué)校畢業(yè)論文（設(shè)計）論文題目酸奶中乳酸菌菌落總數(shù)的測定名： 系 科：生命科學(xué)系專業(yè)、班級： 08生物技術(shù)及應(yīng)用師： 連云港師范高等?？茖W(xué)校教務(wù)處目錄TOC\o"1-5"\h\z中文摘要 3ABSTRACT 3\o"CurrentDocument"引言 4材料與方法 42.1實驗樣品 4\o"CurrentDocument"2.2主要的試劑與儀器 4\o"CurrentDocument"2.3培養(yǎng)基 5\o"CurrentDocument"2.4準(zhǔn)備工作 53.實驗過程 53.1編號 5\o"CurrentDocument"3.2樣品稀釋 5\o"CurrentDocument"3.3制作平板 63.4菌落培養(yǎng) 6\o"CurrentDocument"3.5菌落計數(shù) 6結(jié)果 64.1菌落觀察結(jié)果 6\o"CurrentDocument"4.2菌落計數(shù)結(jié)果 6\o"CurrentDocument"4.3計算樣液中的乳酸菌菌落數(shù) .7\o"CurrentDocument"分析與討論 8\o"CurrentDocument"參考文獻 8中文摘要摘要：本試驗采用平板記數(shù)法，對完達山優(yōu)鈣酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶3個品牌市售酸奶中乳酸菌菌落總數(shù)進行了測定。測定結(jié)果顯示，完達山優(yōu)鈣酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶3種市售酸奶均符合國家標(biāo)準(zhǔn)(GB2746-1999)規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。其中，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落總數(shù)最多，平均達到298cfu/mL，最少是君樂寶原味發(fā)酵型酸奶平均達到110cfu/mLo關(guān)鍵詞：酸奶；乳酸菌；菌落總數(shù)的測定；平板記數(shù)法ABSTRACTAbstract：Thistestmethodtocounttheflatpanel,WanDaShanoptimalcalciumyogurt,YiLiflavortotheyogurt,JunLeBaoplainyogurtfermentationtypethreethesoldyogurtactivelactobacillustotalcoloniesweredetermined.ThedeterminationresultsshowedthatWanDaShanoptimalcalciumyogurt,Yiliflavortotheyogurt,junLeBaoplainyogurtfermentationtypethreethesoldyogurtwhichconformtothenationalstandard(GB2746-1999)stipulatedqualitystandards.Amongthem,WanDaShanoptimalcalciuminthemostlacticacidbacteriacoloniesyogurt,averagewasexceed298cfu/mL,AtleastaroyalLeBaoplainyogurtfermentationtypeaveragewasexceed110cfu/mL.Keywords:yogurt,lacticacidbacteria,determinationoftotalcolonies,platecountingmethod酸奶中乳酸菌菌落總數(shù)的測定引言隨著人們經(jīng)濟水平的提高及自我保健意識的增強，乳制品日益受到廣大消費者的喜愛。酸奶是以滅菌乳接種乳酸菌發(fā)酵而成，比普通牛乳的營養(yǎng)更豐富，其蛋白質(zhì)和鈣更易于被人體消化吸收。酸奶還有增強消化、促進腸蠕動、增進機體的物質(zhì)代謝、產(chǎn)生有益抗生素、抗衰老、抗腫瘤等作用⑶，這是因為酸奶中含有大量的乳酸菌。乳酸菌都對人體有益，但乳酸菌需達到一定數(shù)量，才有可能到達并定植在人體腸道內(nèi)，抑制有害菌的增殖和活動，維持腸道的微生態(tài)平衡，增進人體的健康。因此，乳酸菌數(shù)量是評價乳酸菌制品質(zhì)量的重要指標(biāo)。乳酸菌多數(shù)屬于厭氧菌或微好氧菌，在普通培養(yǎng)條件下，乳酸菌菌體生長十分緩慢，甚至不能生長，這給乳酸菌的研究帶來了許多不便⑹。本試驗擬采用中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)（GB4789.2—2010）中⑵規(guī)定的食品中菌落總數(shù)測定方法---平板記數(shù)法，對完達山優(yōu)鈣酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶3個品牌的袋裝酸牛奶中乳酸菌菌落總數(shù)進行測定，以考查市場酸奶產(chǎn)品的質(zhì)量。材料與方法2.1實驗樣品本實驗以市售完達山優(yōu)鈣酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶3個品牌的袋裝酸奶為實驗材料。材料均選自于連云港市新浦區(qū)蒼梧路樂天瑪特大型超市。在產(chǎn)品保質(zhì)期內(nèi)完成測定，詳情情況見表1。表1樣品編號及量取體積樣品名稱樣品編號量取體積（ml）完達山優(yōu)鈣酸牛奶WDS1伊利原味酸牛奶YL1君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶JLB12.2主要的試劑與儀器2.2.1試劑生理鹽水配制稱取9克氯化鈉，用蒸餾水溶解定容至1000ml，備用。2.2.2主要設(shè)備與儀器超凈工作臺（SW-CJ-1B）、手提式高壓蒸氣滅菌鍋（上海三申醫(yī)療器械YX280A）、恒溫培養(yǎng)箱（PYX-120）、顯微鏡（OLYMPUSCH20）等。2.3培養(yǎng)基在對完達山優(yōu)鈣酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶3個品牌的袋裝的酸牛奶進行的預(yù)實驗中發(fā)現(xiàn)，乳酸菌不適合在普通牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長；然后在老師的指導(dǎo)與建議下，同時根據(jù)學(xué)校實驗室現(xiàn)有條件，最終確定本次實驗采用LAB培養(yǎng)基（乳酸菌菌落計數(shù)用）。2.3.1培養(yǎng)基的主要成份LAB培養(yǎng)基的主要成份是，牛肉膏、酵母膏、乳糖、吐溫80、無水碳酸鈣、無水磷酸二氫鉀、瓊脂、蒸餾水。2.3.2培養(yǎng)基（1000ml）的配制及其滅菌取一個白瓷缸洗干凈后盛500毫升蒸餾水放于電爐上加熱，水沸后加入已稱量好的牛肉膏10g、酵母膏10g、乳糖20g、吐溫801.0ml、無水碳酸鈣10g、無水磷酸二氫鉀2g，用玻璃棒不停攪拌，再加入瓊脂10g，同時調(diào)低電爐溫度，不停攪拌，待瓊脂全部溶解均勻時調(diào)pH值至6.6,定容至1000ml，關(guān)掉電源，分裝培養(yǎng)基。高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度121°C，滅菌時間20分鐘［1］，取出備用。2.4準(zhǔn)備工作將洗干凈的培養(yǎng)皿，移液管，試管放置至徹底干燥，取適宜尺寸的干凈牛皮紙分別將培養(yǎng)皿、移液管、試管包扎緊4］。然后高壓蒸汽滅菌，滅菌溫度121C，滅菌時間15分鐘，取出備用。實驗過程3.1編號取無菌平皿3套，用記號筆標(biāo)明10-7兩套，剩余一個標(biāo)明CK,為空白對照。另取7支滅菌空試管，分別加入9ml滅菌生理鹽水，排列于試管架上，用記號筆依次標(biāo)明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。3.2樣品稀釋用1ml無菌吸管精確地吸取1ml完達山優(yōu)鈣酸牛奶樣液加入10-1的試管中，然后仍用此吸管將管內(nèi)稀釋液來回吸吹三次，吸時伸入管底，吹時離開液面，使

其混合均勻。另取一支無菌吸管自10-1試管中吸血1放入10-2中，吸吹三次，其余依次類推，如此稀釋到第7管，稀釋度分別為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶分別按照以上敘述進行稀釋。通過預(yù)試驗，本實驗所采用的完達山優(yōu)鈣酸牛奶的稀釋度為10-7，伊利原味酸牛奶的稀釋度為10-7，君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶的稀釋度為10-7。3.3制作平板取1ml滅菌吸管，吸取1ml空白稀釋液生理鹽水加入CK中，做空白對照。用1支1ml無菌吸管吸取10-7的完達山優(yōu)鈣酸牛奶稀釋菌液1ml，放入編好號的無菌平皿中，做兩個平板，加上空白對照，共3個平板。分別在以上3個培養(yǎng)皿中注入15毫升已融化并冷卻至45°C左右的LAB培養(yǎng)基，并且迅速輕輕地、小幅度地旋轉(zhuǎn)幾圈，使培養(yǎng)基均勻地平鋪于培養(yǎng)皿底部，并且迅速在超凈工作臺面上作平面旋搖，使稀釋液與培養(yǎng)基充分混合。伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶分別按照以上敘述進行平板制作。3.4落培養(yǎng)3.4落培養(yǎng)待培養(yǎng)基凝固后，移至37C恒溫培養(yǎng)箱中，倒置，培養(yǎng)48小時。3.5菌落計數(shù)計數(shù)時，采用肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查⑸，以防遺漏。先記下各培養(yǎng)皿內(nèi)菌落數(shù)后，再求出每個樣品同一稀釋度的各平皿的平均菌落數(shù)。結(jié)果4.1菌落觀察結(jié)果菌落呈圓形，白色；大小不一，分布不均勻;4.2菌落計數(shù)結(jié)果用直接計數(shù)法，記錄每個平板的菌落數(shù)，然后計算每個樣液同一稀釋度的兩個平板的平均菌落數(shù)［7］。樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為3天時，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為297、299,伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為251、265，君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為174、180；樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為6天時，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為271、277，伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為196、200，君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為127、135；樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為9天時，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為212、214,伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為119、125,君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為108、112。詳細結(jié)果見表2。表2各樣品的菌落計數(shù)的結(jié)果樣品編號空白對照-樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為3天樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為6天樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為9天平行1平行2平行1平行2平行1平行2WDS0299297271277212214YL0251265196200119125JLB01741801271351081124.3計算樣液中的乳酸菌菌落數(shù)同一稀釋度做了兩個平行樣，稀釋度均為10-7，按下列公式進行計算：計算公式為：N=EC/2Xd公式中：N——樣品中菌落數(shù)EC——平板中菌落數(shù)之和d——稀釋度4.3.1計算結(jié)果樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為3天時，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為297cfu/ml、299cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(297+299)/2X107=298X107cfu/ml，伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落總數(shù)分別為251cfu/ml、265cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(251+265)/2X107=258X107cfu/ml，君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為174cfu/ml、180cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(174+180)/2X107=177X107cfu/ml；樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為6天時，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為271cfu/ml、277cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(271+277)/2X107=274X107cfu/ml，伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為196cfu/ml、200cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(196+200)/2X107=198X107cfu/ml，君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為127cfu/ml、135cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(127+135)/2X107=131X107cfu/ml；樣品的測定與出廠間隔天數(shù)為9天時，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為212cfu/ml、214cfu/ml，代入公式N=EC/2Xd=(212+214)/2X107=213X107cfu/ml，伊利原味酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為119cfu/ml、125cfu/ml,代入公式N=EC/2Xd=(119+125)/2X107=122X107cfu/ml,君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶中乳酸菌菌落數(shù)分別為108cfu/ml、112cfu/ml,代入公式N=EC/2Xd=(108+112)/2X107=110X107cfu/mlo分析與討論在對選用的完達山優(yōu)鈣酸牛奶、伊利原味酸牛奶、君樂寶原味發(fā)酵型酸牛奶3個品牌的袋裝的酸牛奶進行的預(yù)實驗中發(fā)現(xiàn)，樣品稀釋到10-5,10-6,菌落數(shù)太多，根本無法用肉眼計數(shù)。直至將樣液稀釋到10，時，菌落生長數(shù)量才可以用肉眼計數(shù)，所以，本實驗實驗材料的稀釋梯度為10-7。倒平板時，應(yīng)注意控制培養(yǎng)基的溫度。溫度過高會抑制菌的生長，而溫度太低培養(yǎng)基易凝固，無法平鋪均勻。所以本實驗選擇在培養(yǎng)基溫度降至45°C時倒平板，效果良好。平板倒置培養(yǎng)48小時后，應(yīng)立即計數(shù)。在有特殊原因不能立即計數(shù)時，我們將平板暫時放置于4C冰箱保存，保存時間不超過24小時。表3的實驗結(jié)果表明，酸奶中所含的乳酸菌菌落數(shù)，隨著出廠天數(shù)的延長呈明顯下降的趨勢，因此建議消費者購買時要看清生產(chǎn)日期，且還應(yīng)盡早食用。表3的結(jié)果還表明，完達山優(yōu)鈣酸牛奶中所含的乳酸菌