判斷推理修改濕地植物提取物對致病性細菌的抑制作用

YangZhouM.S.MasterInhibitoryEffectsofWetland ntExtractonPathogenicBacteriaCandidate:JiaqiGeMajor:HydrobiologyCollegeofBioscienceandBiotechnology,Yangzhou：導師：教中抗生素是人類在領域取得的偉大成就之一，它對人類健康水平的提高和生命安全殘留等問題日益突出，而抗生素的直接使用及其產(chǎn)品中殘留的抗生素可在內進行富集 草（Vallisnerianatans）、芡實（Euryaleferox）、辣蓼（Polygonumhydropiper）、酸模葉蓼（P.lapathifoliumL.）、愉悅蓼（P.jucundumMeisn.）、菖蒲（AcoruscalamusL.)、菹草、（Potamogetoncrispus）、眼子菜（P.malaianus）、槐葉蘋（SalvinianatansL.）、金魚藻（CeratophyllumdemersumL.）、鴨舌草（Monochoriavaginalis）、黑藻（Hydrillaverticillatadubiajavanicastratiotes蒲公英（HerbaTaraxaci）、鴨跖草（CommelinacommunisLinn.）、（Solanumnigrum黃花酢漿草（Oxalispescaprae）、茭白（Zizanialatifolia）、馬齒莧（Portulacaoleraceaindica）、活血丹（Glechomalongituba）、節(jié)節(jié)草（Equisetumramosissimum）、綬草、（Spiranthessinensis）、看麥娘（AlopecurusaequalisSobol.）36種植物，采用水提取、7種細菌的抑菌活性，并從中篩選具有萃取物，將其添加至克氏原螯蝦（Procambarusclarkii）飼料中，觀察萃取物對克氏原螯蝦、、菱、芡實、辣蓼、、茜草、綬草、毛茛植物乙醇提取物對大腸桿菌有一定的抑制作用；菱、芡實、辣蓼、水芙蓉、、茜草、綬草、毛茛植物乙醇提取物對金黃色葡萄球菌有一定的抑制作用；菱、芡實、、茜草植物乙醇提取物對沙門氏菌有一定的抑制作用；空心蓮子草、菱、鴨舌草、、茜草、馬齒莧、綬草、毛茛、活血丹藻、水芙蓉的乙醇提取物對嗜水氣單胞菌有抑制作用；空心蓮子草、菱、茜草、綬草、金錢草、活血丹、馬齒莧、毛茛、辣蓼的乙醇提取物對溫和氣單胞菌有一定的抑菌作用；空心蓮子草、菱、、茜草、馬齒莧、毛茛、活血丹、金錢草的、、200mg/mL12.38mm；空心蓮子草、芡實、龍蓮子草、菱、綬草、、繁縷、活血丹6種植物的水提物對副溶血弧菌有抑菌作用。菱、茜草、芡實、4種植物的乙醇提取物均對7種細菌具有較好的抑菌性，將200mg/m26.38mm，對副溶血弧菌的抑菌直27mm1.00%25.73mm，對副溶血弧菌的25.25mm1.00%氯霉素、、InhibitoryEffectsofWetland ntExtractonPathogenicBacterM.S.Candidate:JiaqiAntibioticsareoneofthegreatachievementsofmankindinthefieldofmedicine.Itysanextremelyimportantroleintheimprovementofhumanhealthandtheguaranteeoflifesafety.However,inrecentyears,antibioticclinicalresearchprocess,thereistheamountofdrugs,thenumberofmedication,withdrawalperiodofneglectandanimalanddrugresiduesandotherissues,leadingtobacterial andtheuseofantibioticeffectchangePoor,sideeffectsandotherdefects,theseproblemsareonthepublichealthcausedapotentialharm.Inordertosolvethemanyproblemscausedbyantibiotics,tofindnew,natural,canreceantibioticstocontrolinfectiousdiseasesmethodsanddrugs eatoppriority.Nelumbonucifera、TrapabispinosaRoxb.、Vallisnerianatans、Euryaleferox、Polygonumverticillata、Hydrocharisdubia、Oenanthejavanica、Pisitiastratiotes、HerbaTaraxaci、CommelinacommunisLinn.、SolanumnigrumL.、DichondrarepensForst.、RubiacordifoliaLinn.SlariamediaOxalispes-capraeZizanialatifoliaPortulacaoleraceaL.Ranunculussieboldii、KyllingabrevifoliaRottb.、Eleusineindica、Glechomalongituba、Equisetumramosissimum.Thentsweredeterminedbymeansofntwaterextractionandextractiontodeterminethebacteriostaticeffectonbacterialdiseases.Thentextractswithstrongantibacterialactivitywerescreenedandextracted,andthentextractswiththestrongestantibacterialactivitywereselectedandaddedtothefeedofProcambarusclarkii.Shrimpsurvivalrate,forthedevelopmentofeffectivecontrolofbacterialdiseases,aswellasnaturalntfeedadditivestoprovideinformation.Belowarekeyresearchfindings:⑴cordifoliaLinn.、Ranunculussieboldii、SpiranthessinensisntsethanolextracthasacertaininhibitoryeffectonE.Coli.TrapabispinosaRoxb.、Euryaleferox、Polygonumhydropiper、stratiotes.ntsethanolextracthasacertaininhibitoryeffectonStaphylococcusaureus.TrapahasacertaininhibitoryeffectonSalmonellapullorum.Alternantheraphiloxeroides、bispinosaRoxb.Monochoriavaginalis、SolanumnigrumL.、RubiacordifoliaLinn、nigrumL.、RubiacordifoliaLinn、Spiranthessinensis、PortulacaoleraceaL.、Ranunculussieboldii、Glechomalongituba、DichondrarepensForst.ntsethanolextracthasacertaininhibitoryeffectonA.sobria.Alternantheraphiloxeroides、TrapabispinosaRoxb.、SolanumnigrumL.、DichondrarepensForst.、RubiacordifoliaLinn、PortulacaoleraceaL.Ranunculussieboldii、Glechomalongituba.ntsethanolextracthasacertaininhibitoryeffectonVibrio⑵Theantibacterialeffectofntextractwaterextractionislessthanthatofntethanolextract.SpiranthessinensiswaterextractionofE.colihasantibacterialeffect,theconcentrationof200mg/ml,inhibitionzonediameterof12.38mm.Alternantheraphiloxeroides、Euryaleferox、HerbaTaraxaci、SolanumnigrumL.、S lariamedia、Spiranthessinensis ntswaterextracthasacertaininhibitoryeffectonAeromonashydrophila.Alternantheraphiloxeroides、ntswaterextracthasacertaininhibitoryeffectonA.sobria.Alternantheraphiloxeroides、L.ntswaterextracthasacertaininhibitoryeffectonVibrio⑶eachextractonthepathogenicbacteriaintheantibacterialactivity，Ethylacetateextracthasobviousinhibitoryeffect.Concentrationof200mg/ml,Staphylococcusaureusantibacterialdiameterof26.38mm,1.00%chloramphenicolinhibitionzonediameterof25.73mm.ThebacteriostaticdiameterofVibrioparahaemolyticuswas27mm,andthediameterofthezoneof1.00%chloramphenicolwas25.25⑷TrapabispinosaRoxb.ethylacetateextractcanimprovethesurvivalrateofProcambarusclarkii.After15daysoffeeding,thesurvivalrateoftheethylacetateextractgroupwassignificantlyhigherthanthatofotherfeedgroups.TheresultsshowedthattheethanolextractofTrapabispinosaRoxb.、Euryaleferox、PolygonumhydropiperL.PisitiastratiotesSolanumnigrumL.RubiacordifoliaLinn.Spiranthessinensis、Alternantheraphiloxeroides、Monochoriavaginalis、PortulacaoleraceaL.、Glechomalongituba、Ceratophyllumdemersum、HerbaTaraxaci、Slariamedia、DichondrarepensForst..16kindsofntextractshaveacertainantibacterialeffect.Buttheethanolextractantibacterialperformanceishigherthanthewaterextract.ethanolextractofethylacetateextracthadthebestantibacterialactivity,andtheadditionofethylacetateextractofethanolextractcouldincreasethesurvivalrateofProcambarusclarkii.中要 細菌性疾病的危 植物提取物應用于疾病的防治及對水生動物免疫機制的研 植物提取物對細菌性、真菌性疾病的防治作 植物提取物對水生動物免疫機制的研 實驗材 供試植 供試菌 實驗動 實驗儀 實驗試劑及其配 實驗方 植物提取物及萃取物的................................................................................植物提取物抑菌活性的測 萃取物對克氏原螯蝦攻毒實驗的測 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分 植物粗提物對動物致病菌的抑菌活 植物粗提物對金黃色葡萄球菌的抑菌活 植物粗提物對大腸桿菌的抑菌活 植物粗提物對沙門氏菌的抑菌活 植物粗提物對銅綠假單胞菌的抑菌活 植物粗提物對嗜水氣單胞菌的抑菌活 植物粗提物對溫和氣單胞菌的抑菌活 植物粗提物對副溶血弧菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對動物致病菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對金黃色葡萄球菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對大腸桿菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對銅綠假單胞菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對副溶血弧菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對溫和氣單胞菌的抑菌活 植物乙醇提取物萃取物及抗生素對嗜水氣單胞菌的抑菌活 乙醇提取物乙酸乙酯萃取物對克氏原螯蝦存活率的影 五討 不同植物提取物對動物致病菌的抑菌作 菱乙醇提取物乙酸乙酯萃取物能提高克氏原螯蝦的存活 揚州大學性 使用 、。和空腸彎曲菌（Campylobacterjejuni）可使動物表現(xiàn)出急性炎和淺表性潰瘍等癥狀。在肉鴨病原微生物，機體抵抗力下降時細菌的致病性使的雞發(fā)病，并成為某些傳染病的并發(fā)病或繼發(fā)（杜永慶等,2015）水產(chǎn)養(yǎng)殖中水產(chǎn)動物易細菌性疾病性疾病部疾病所造成的經(jīng)濟損失的一半以上（等,2013）世界第一水產(chǎn)養(yǎng)殖國家，每年的養(yǎng)殖產(chǎn)量為世界養(yǎng)殖總產(chǎn)量的70%左右,細菌性疾病在密集型的養(yǎng)殖體系中的發(fā)病其弧菌(Vibrio)、氣單胞菌（Aeromonas）(Staphylococcusaureus)和大腸桿菌等共患的細菌及其的危害進行綜述。、。近幾年來，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，但養(yǎng)殖過程中出現(xiàn)的細菌性疾病已經(jīng)成為制約該行業(yè)發(fā)展的主要問題之一?；【╥brio）革蘭氏菌，廣泛分布于河口、海灣、近岸海域的海水和海洋動物體內，是一種導致多種淡水蝦及魚類的致病菌?；【椢r的是全身性的，尤以肝胰腺最為嚴重（Eavesand,199）。凡對蝦（Litopenaeusvannamei）是我國養(yǎng)殖面積最大、產(chǎn)量最高的蝦種，但因其餌料、殘骸和排泄物的積累，使育苗水質，導致細菌大量滋生，極易誘導弧菌病害暴發(fā)，造成幼體大面積（恕等,1999）。2001年大連地區(qū)凡對蝦弧菌暴發(fā)紅體病，造成80%的損失（Fanetal.,2006）；2007年地區(qū)南美白對蝦（Penaeusvanname)紅體病達到95%，率達100%，造成巨大經(jīng)濟損失（,2009）。Himmel等（2010）對蝦類的菌落進行分離，發(fā)現(xiàn)溶血性弧菌是致病的主要因素。Thune等（1991）的研究，擬態(tài)弧菌(Vibriomimicus)可引起淡水龍蝦的直接大面積。等（1993）研究證實，河流弧菌(V.fluvialis)是鰱（Silurusspp）、鳙（Aristichthysnobilis）等魚類細菌性敗血癥的一種主要致病菌。等（1999）的研究表明，引起鱸魚（Lateolabraxjaponicus）爛鰓、爛尾病的病原菌為鰻弧菌（V.anguillarum)。副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)主要存在水中,附著于海洋生物的體表生長繁殖；進食未煮透的了副溶血弧菌的食物后,可引起胃腸黏膜的急性炎癥反應（等,2008），表現(xiàn)出腹絞痛、腹瀉、、發(fā)燒、寒顫、等臨床癥狀（HondaandIida,1993）。溶藻弧菌（Valginolyticus）是牙鲆（Paralichthysolivaceus）和鰻鱺（Anguillajaponica）等許多名貴魚類發(fā)生細菌性疾病的主要病菌（Chenetal.,2006），它也是引起人腸道炎、傷口等疾病的病原菌（熊盼等,2014）。河口弧菌是牡蠣大量的主要病原菌（TisonandSeidler，1983；Labreucheetal.,2006）。氣單胞菌（Aeromonas）屬革蘭氏菌（JandaandAbbott,2010），廣泛分布于水體養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要因素（,2007）。維氏氣單胞菌（Aeromonasveronii）存在于水體和淤泥等環(huán)境中，它可斑點叉尾鮰（Ictaluruspunctatus）（Huangetal.,2010），使斑點叉尾鮰的達30%以上，率達50%，嚴重影響了斑點叉尾鮰養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展（Li,2002）。吳雅麗等（2013）認為，中華鱉（Trionyxsinensis）（Ctenopharyngodonidellus）的細菌性腸炎均與氣單胞菌的密不可分。嗜水氣單胞多數(shù)為嗜水氣單胞菌所致；Jiravanichpaisal等（2009）從信號小龍蝦（Pasifastacusleniusculus）中分離出嗜水氣單胞菌，通過收集有較強致病能力的胞外產(chǎn)物；、、組織結構觀察表明，被的小龍蝦中許多組織內具有壞死斑，肝胰腺細胞完全裂解。鱉腐皮病、溶血性腹水病等均由溫和氣單胞菌（祥和,2002），其和芳（2002）的研究表明，溫和氣單胞菌能夠引起羅非魚(Oreochromisniloticus)性敗血癥（2009）認為溫和氣單胞菌引起異育銀（CarassiusauratusGibelio.）患病，表現(xiàn)為皮膚潰爛、鰭條及鰓蓋等身體表面，并使其大量；該菌亦可以使人患病，引起食物和胃腸，出現(xiàn)腹瀉、中耳炎、膽管炎、腦膜炎等病癥，造成血管內因產(chǎn)生大量氣體而使動物（Yukioetal.,2003）。豚鼠氣單胞菌會引起白鰱；、、（Hypophthalmichthysmolitrix）的打印病、鯉魚（Cyprinuscarpio）的豎鱗?。ò怖麌?內有淡黃色積液、肝臟嚴重充血的發(fā)病鱸魚（Lateolabraxjaponicus）中分離到豚鼠氣單胞鼠氣單胞菌對南方鲇的半致死劑量（LD50）0.29mg，溶血素具有較強的毒力。金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）是自然界常見的致病菌，常引起人和動物皮膚軟組織、敗血癥、膿毒血癥、心內膜炎、腦膜炎及導管相關染等多種疾（等,2014；等,2015）。金黃色葡萄球菌是一種需氧或兼性厭氧革蘭氏陽抵抗力強。和張振國（2009）研究，金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的毒素和酶，會引毒素引起的致使14000多人（,2004)，河北的為21.2%（108/510）(Suoetal.,2008)，的為21.2%（44/04）；金黃色葡萄球菌在生奶、生肉與水產(chǎn)品中的檢出率高達30%，在44株金黃色葡萄球菌中能夠產(chǎn)生腸毒的菌株達27株（Zhangetal.,200）。和（2007）將分離的葡萄球菌注射到健康雞的肌肉中，20小時后注射部位見到炎性腫脹，破潰后流出大量滲出液，24小時后開始。首次從金黃色葡萄球菌中分離出耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（R）以來，其臨床檢出率逐年上升，現(xiàn)已成為病原的主要細菌，它致病力強， 速度快，常出現(xiàn)多重耐藥性和交叉，治療難度大，病死率高（,2014；文細毛等，大腸桿菌（Escherichiacoli）在自然界廣泛存在，是人和動物腸道中最主要、且數(shù)量炎、膽囊炎、炎及腹瀉等。致病性大腸桿菌攜帶特定的毒力，編碼相應的毒性蛋白。201年，由性大腸桿菌引起的“毒黃瓜”席卷整個歐洲，造成12個國近2900人，30多人（,2012）。大腸桿菌型多，且多具耐藥性，丹等（2013）采用瓊脂稀釋法測定了不同動物來源的大腸桿菌對15種抗菌藥物的敏感性，發(fā)現(xiàn)大腸桿菌對大部分藥物的耐藥率超過70%素的耐藥率均達到了80%防治，大腸桿菌四季致病，對雞的致病率高，可使雞的率達到72%，對養(yǎng)禽業(yè)造成大經(jīng)濟損失（,2007）。等（2009）研究表明，動物源大腸桿菌的耐藥性更為廣泛，其耐藥強度明顯高出人源大腸桿菌。對從雞場工作人員和村民分離的大腸桿菌與雞體中分離的大腸桿菌進行耐藥性比較，發(fā)現(xiàn)人和禽類大腸桿菌的耐藥性可以相互傳播，家禽、家畜中的耐藥性腸道菌可通過動物肉類及其制品到。大腸桿菌對環(huán)50%，對恩諾沙星的耐藥率已達100%（Phillipsetal.,2004）。世紀初人類發(fā)明青霉素以來，許多性疾病得到了有效的控制，青霉素對人類健康水平漸增加，對公眾的健康造成了潛在危害（等,2004）。 2005、、真菌、立克次體和衣原體，其中以細菌和誘發(fā)病源的的比例最高（林立峰等2007）。在水產(chǎn)行業(yè)中，真菌疾病有水霉病、鰓霉病、鏈壺菌等，細菌性疾病有白皮病、腹水病、爛鰓病等。植物源的活性物質可被用來防治細菌、真菌等病源，一年蓬、（Erigeronannuus）為菊（As 提取物對棉花枯萎病菌具有較強的抑菌作用，而且對孢子萌發(fā)的抑制作用可達98%以竊衣（Torilisscabra）（胡林峰等,2012）；紫蘇（Perillafrutescens）為傳統(tǒng)常用中藥，是唇形科紫蘇屬一年生草本植物（韋保耀等,2005），紫蘇葉具有解表散寒，行氣和養(yǎng)胃功效，紫蘇梗具有理氣、止痛作用（鄭萬均等,1983），紫蘇子具有降氣消、平喘、潤腸等功效（王玉萍等,2003）；鴨跖草（CommelinacommunisL.）具有清熱解毒、利尿消腫的功效；紫蘇、鴨跖草石油醚和乙酸乙酯葉提取物對志賀氏菌（ShigellaCas lani）、枯草桿菌（Bacillussubtilis）有較有溶血和凝血成分（彭學蘇,1982）；謝春香等（2011）利用索氏抽提乙醇回流法獲得；最強（2016通過薄層層析法以及生物自顯影法檢測白屈（Chelidoniummajus）（2014）種抑菌活性不同，對大腸桿菌的抑菌最強，其次為黑曲霉（Aspergillusniger）。有關水生致病菌的藥用植物篩選實驗較多，吳德峰和林樹根（2001）將楓香；（Liquidambarformosana）葉進行水煎煮投灑或混合餌料飼喂魚類，赤霉菌的明顯（2008baicalensisorientalis大黃（Rheumpalmatum）可以防治蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)動物的爛鰓病、爛尾病、腐皮等細菌存活率(Abutbuletal.,2005)；中馬齒莧對鱔魚(Monopterusalbus)水霉病有預防和治療作用水生動物的免疫系統(tǒng)主要由細胞免疫和體液免疫組成。(2010)研究表明，甲殼生動物的血細胞是細胞免疫的重要組成部分（Johanssonetal.,2000）。魚類的細胞免疫涉及非特異免疫，它包括吞唆細胞的呼吸暴發(fā)、吞唾率和殺菌能力等（孫德文等2002）。于愛清（2014）研究表明，病原菌蝦類等甲殼動物的巴后，它們會通過細胞免疫作用被清除，等病原物到巴后需要依靠多個血細胞的結節(jié)和包裹作用來清除。狀態(tài)，提高機體自身的抗病能力（金立志2010）。植物中的有效成分眾多，包括黃酮類、鞣質、苷類、蒽醌類、生物堿、揮發(fā)油、有機酸、微量元素等（和涂瑤生,2009），使白介素含量顯著提高，提高抗體和補體水平，增強巨噬細胞的吞噬功能，激活T、B淋巴細胞，誘導產(chǎn)生多種細胞因子等途徑來提高機體的免疫力，增強動物的抗病能力（Tanetal.,2015）。要的植物次生代謝物（Morimotoetal.,2003）。延璽等（2008）研究表明，黃酮類種類繁黃芩苷（baicalin）是黃芩根的主要成分，在抗菌、抗氧化、抗、降壓方面具有療效；在飼料中添加黃芩苷有利于提高羅非魚總抗氧化能力、堿性磷酸酶及溶菌酶的活性，從而增強動物的免疫力（Yinetal.,2006）。赤楠葉的黃酮提取物對金黃色葡萄球菌等革蘭氏陽性菌具有較強的抑菌效果（黃曉昆等2008）。作為自由基的抗氧化劑之一，黃酮類化合物可以有效細胞的損傷從而通過不同的途徑達到防癌抗癌的功（張氽等,2003科、百合科等植物中（盼等,2016）。Asma等（2010）研究表明，從蘆薈中提取的蒽醌類化合物對由細菌引起的皮膚具有明顯的抑制作用，其抑菌效果比抗生素更為顯著?？滴乃嚨龋?009）首次利用DPPH法從茜草中分離得到蒽醌及其苷類化合物化，抗氧化活氧化作用。從大黃中提取的蒽醌類化合物能提高羅氏沼蝦的總抗氧化活性、堿性磷酸酶、溶菌霉活性，對其免疫能力有顯著的提高（Linetal.,2010）。揮發(fā)油類物質在方面應用比較廣泛，愈來愈受到人們的重視（等,2009）。和（2006）發(fā)現(xiàn)，丁香（Syringaoblat）揮發(fā)油對腸炎沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有抑制作用，也具有抗、清除氧自由基的功能。張薇等（2008）利用水蒸氣蒸餾法提取魚腥草中的揮發(fā)油，它對金黃色葡萄球菌和流感具有明顯的抑制作用，濃度在31.25mg/mL時即能達到抑制的增殖，濃度在250mg/mL時對雞胚內流感有4倍的抑制作用。公衍玲等（2009）利用水蒸氣蒸餾法提取郁金揮發(fā)油，以減測量菌球菌大腸埃希菌產(chǎn)氣桿菌枯草桿菌均有明顯抑制作用和2007）發(fā)現(xiàn)丁陳皮（CitrusreticulataBlanco.）揮發(fā)油在治療大鼠結腸炎方面作用明顯。長期使用抗生素不僅著環(huán)境的安全，還對人類的健康帶來潛在危害（Cabello,2006）(Defoirdtetal.,2007)，哈氏弧菌對磺胺甲基異惡唑、氯霉素、紅霉素和鏈霉素產(chǎn)生了多重耐藥性，導致斑節(jié)對蝦因哈氏弧菌的引起大量的（Karunasagaretal.,1994）?？股氐拈L期使用也嚴重著環(huán)境安全和人類的?。ˋldermanandHastings,1998;Cabello,2006），水產(chǎn)養(yǎng)殖中殘留的抗生素可以改變內正常的腸道菌群，從而對產(chǎn)生過敏病治療轉變?yōu)轭A防、、治療、康復相結合的模式（，2001），由于植物提取物 副作用小、殘留物少、對環(huán)境污染程度優(yōu)點，所以從植物中提取和篩選具有明顯其生活環(huán)境的特殊性，在抵抗病原微生物等方面可能具有獨特的作用。因此，本選擇本在揚州市區(qū)選擇36（1）136Table136ntsspeciesusedinthe1.Phragmites21.Potamogeton2.Alternanthera3.EichhorniaSolanumnigrum4.Nelumbo24.Dichondrarepens5.Trapabispinosa25.Rubiacordifolia6.Vallisneria26.Slaria7.EuryaleOxalispes-8.Polygonumhydropiper28.Zizania9.P.lapathifolium29.Alopecurusaequalis10.P.jucundum30.Spiranthes11.Acoruscalamus31.Portulacaoleracea12.Salvinianatans Ranunculus藻Ceratophyllum33.Kyllingabrevifolia14.Monochoria34.Eleusine15.Hydrilla35.Glechoma16.Hydrocharis36.Equisetum17.Oenanthe18.Pisitia19.Herbamelinacommunis溶血弧菌（V.Parahemolyticus）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、（Escherichiacoli）、銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）、沙門氏菌（Salmonellapullorum）。嗜水氣單胞菌、溫和氣單胞菌由江蘇省淡水水產(chǎn)提供，其它菌株均由植物 泰儀R系列旋轉蒸發(fā) 科SHB-3循環(huán)水真空 科SHELLAB水浴 SW-CJ-2HD超凈工作 蘇州市安泰空氣技 QYC2102恒溫搖 實驗儀超低溫冰 ThermoScientific公司FA2004電子天 精密科學儀5417R型高速冷凍離心機 Eppendoff公司普通PCR儀 ABI公司7500實時熒光定量PCR儀ABI公GHX9160B-1培養(yǎng) pH7.4100mL。10g，pH7.4500mL。Luria-Bertani1g0.5g0.5g，pH7.2100mL。Luria-Bertani5g2.5g2.5g，瓊脂10g，pH7.2500mL。3-4次，合并濾液；利用旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮至粘稠狀，即得兩種不同的植30g1:10的比例用蒸餾水溶解，然后按照極性由小到大分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三種分步進行萃取，每種溶劑萃取3-4次后合并同種萃取液，用旋轉蒸發(fā)儀減壓濃縮至粘稠狀，即得各種萃取物。106cfu/mL。1g/mL200mg/mL、100mg/mL、50mg/mL、25mg/mL12.5mg/mL的藥液。同7種菌的抑菌圈直徑。選用定性濾紙，用6mm的圓形紙片，121℃20min，60℃烘干，用無菌鑷子分別夾取到不同提取物、不同濃度的藥液中浸泡24h；用移液槍吸取15μL菌懸液涂布29℃培養(yǎng)18-22h后，410mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL0.625mg/mL的藥液；各1mL90mm的培養(yǎng)皿內做好標記；再取融50°C19mL，倒入培養(yǎng)皿內（樣品液:5%以內）。接種：將0.51:100進行稀釋，在各含藥瓊脂表面接15μL（106cfu/mL）。魚油等。實驗選擇抑菌效果最佳的提取物及其萃取物，確定它們對克氏原螯蝦率的影響，將提取物和萃取物分別按基礎飼料質量的0.50%添加至預先的上述配合飼料中，氯霉素按基礎飼料的1.00%添加至預先的上述配合飼料中，然后重新制成含有氯霉素選擇健康、體重大?。?5~20g）140415天。每組實驗在投喂飼料15d后，對每個從第2-3腹節(jié)間肌肉注射濃度為物的率。SPSS16.0＜0.05表示具有顯著性差異。所有統(tǒng)計數(shù)據(jù)均以平均值±標準差（X±SD）36種醇提物中，只有菱、芡實、辣蓼、水芙蓉、、茜草、綬草和毛茛8種植物的乙醇提取物對金黃色葡萄球菌有抑制作用（2）；200mg/mL時，菱、、茜草、毛茛的抑菌活性較強，其抑菌圈直徑均顯著大于其它植物提取物的圖（P<0.05)2植物乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑Table2InhibitionzonediameteroftheethanolextractsagainstStaphylococcus

濃度 nt nt 芡 Euryale辣 辣 水芙 Solanumnigrum 茜 綬 毛 RubiacordifoliaLinn.SpiranthessinensiRanunculus注:6mm的瓊脂孔;Note:Inhibitionzonediametercovers6mmofagarhole.Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05菱菱

Rubia

Pistia

Ranunculus圖1菱、、茜草、毛茛乙醇提取物的抑菌圈直Fig.1InhibitionzoneofethanolextractsfromTrapabispinosa,Pisitiastratiotes,Rubiacordifolia,RanunculussieboldiiagainstStaphylococcusaureus辣 水芙Polygonum Pisitia2Fig.2InhibitionzonediameterofPolygonumhydropiper、Pisitia芡實、辣蓼、、茜草、綬草、毛茛7種植物的乙醇提取物對大腸桿菌有抑制作種植物的水提物在濃度為200mg/mL時對大腸桿菌具有抑制作用，其抑菌圈直徑為3植物乙醇提取物對大腸桿菌的抑菌圈直徑濃度nt 濃度nt 芡 Euryale 辣 Solanumnigrum TrapabispinosaPolygonumRubiacordifoliaSpiranthesRanunculus

dd 注:6mm的瓊脂孔;Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level. hessinensirextract

Fig.3Inhibitionzone

揚Trapabispinosa揚Ethanol

dii、TrapabispinosaRoxb.Ethanolextractaterextract、36種不同植物提取物對沙門氏菌的抑菌圈的直徑抑制作用（表4）。菱、芡實、、茜草4種植物乙醇提取物和綬草水提物對沙門氏菌有抑制32200mg/mL時，對沙門氏菌均未檢測出抑菌活性。35種植物水提取物對沙門氏菌也未檢測出抑菌活性。在乙醇提取實驗中，當濃度為200mg/mL時菱芡實茜草乙醇提取物的抑菌圈直徑分別別11.75mm11.81mm、13.25mm、13.78mm200mg/mL11.50mm（4）4植物乙醇提取物對沙門氏菌的抑菌圈直徑Table4InhibitionzonediameterofalcoholextractsagainstSalmonellant

濃度 菱TrapabispinosaEuryaleSolanumnigrumRubiacordifolia注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的數(shù)Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level. PisitiastratiotesEthanolextract

TrapabispinosaEthanol

TrapabispinosaEthanol SpiranthessinensisWaterextract

RubiacordifoliaLinn.Ethanolextract圖4菱 、茜草、芡實乙醇提取物、綬草水提物的抑菌圈直Fig.4InhibitionzonediameterofTrapabispinosaRoxb.、Pisitiastratiotes、RubiacordifoliaLinn.、EuryaleferoxEthanolextract，SpiranthessinensisWaterextract、、。36種不同植物提取物對銅綠假單胞菌的抑菌圈的直徑（表29200mg/mL時，對銅綠假單胞菌均未檢測出抑菌活性。36種植物水提取物對銅綠假單胞菌未檢測出抑菌活性。在乙醇提取實驗中，菱和毛茛乙顯著大于其他提取物組(P<0.05)的乙醇提取物抑菌活性較強濃度為200mg/mL時，7.88mm，顯著低于其他實驗組（P<0.05)。、、。5植物乙醇提取物對銅綠假單胞菌的抑菌圈直徑Table5InhibitionzonediameterofthealcoholextractsagainstPseudomonasnt

濃度 芡 辣 Solanumnigrum 茜 毛 EuryaleferoxPolygonumRubiacordifoliaRanunculus注6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的數(shù)據(jù)Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level. RanunculussieboldiiPisitiaTrapaRanunculussieboldiiPisitia

圖5菱、、毛茛、辣蓼乙醇提取物的抑菌圈直Fig.5InhibitionzonediameterofTrapabispinosaRoxb.、Pisitiastratiotes、Ranunculussieboldii、PolygonumhydropiperEthanolextract、、、36種不同植物提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌圈的直徑（表他提取物組(P<0.05)菱茜草馬齒莧活血丹的抑菌活性較強濃度為200mg/mL其他29種植物水提取未檢測出抑菌活性。綬草和芡實水提物的抑菌活性最強，濃度為200mg/mL時，抑菌圈直徑為20mm和17.75mm。的抑菌活性較強，抑菌圈直徑、、、14.75mm200mg/mL

6植物乙醇提取物對嗜水氣單胞菌的抑菌圈直徑Table6Inhibitionzonediameteroftheextractsagainstnt nt 空心蓮子 鴨舌 Solanumnigrum 茜 馬齒 綬 金錢 毛 活血 水芙 AlternantheraphiloxeroidesTrapabispinosaRoxb.MonochoriaRubiacordifoliaLinn.PortulacaoleraceaL.SpiranthessinensisDichondrarepensForst.RanunculussieboldiiGlechomalongitubaCeratophyllumdemersumL.Pisitia注:6mm的瓊脂孔;Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level. 丹

RanunculusEthanol菱菱TrapabispinosaEthanol

PisitiaEthanol

RubiacordifoliaEthanol圖6菱、、毛茛、馬齒莧、茜草、活血丹乙醇提取物的抑菌圈直Fig6InhibitionzonediameterofTrapabispinosaRoxb.、Pisitiastratiotes、Ranunculussieboldii、PortulacaoleraceaL.、RubiacordifoliaLinn.、GlechomalongitubaEthanolextract7植物水取物對嗜水氣單胞菌的抑菌圈直徑Table7InhibitionzonediameterofthewaterextractsagainstAeromonasntnt Alternanthera 芡 Solanumnigrum 綬 繁 蒲公

濃度EuryaleSpiranthessinensisSlariamediaHerba注:6mm的瓊脂孔;Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablesignificantdifferenceat0.05or0.01 lariawater

Spirantheswater

Euryalewater

HerbawaterFig.7InhibitionzonediameterofSpiranthessinensis、Euryaleferox、 lariamedia、Herbawater采用打孔法和紙片法測定36種不同植物提取物對溫和氣單胞菌的抑菌圈的直徑（表26200mg/mL時，對溫和氣單胞菌均未檢測出抑菌活性。、茜草、綬草、活血丹、毛茛的抑菌200mg/mL17.75mm19.26mm17.63mm18.25mm、7種水提物對溫和氣單胞菌有抑菌作用（9）30種植物水200mg/mL時，17.75mm15.38mm（8）。8植物乙醇提取物對溫和氣單胞菌的抑菌圈直徑濃度nt 空心蓮子 濃度nt 空心蓮子 Solanumnigrum 茜 綬 Spiranthesd金錢 AlternantheraphiloxeroidesTrapabispinosaRoxb.RubiacordifoliaDichondrarepens活血 馬齒 活血 馬齒 毛 Ranunculusd辣 Polygonum注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的數(shù)據(jù)表Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level.RubiacordifoliaEthanol

RanunculusEthanol

SolanumnigrumLEthanolextractGlechomaEthanol

RanunculusEthanol圖8、毛茛、綬草、茜草、活血丹乙醇提取物的抑菌圈直Fig.8InhibitionzonediameterofSolanumnigrumL.Ranunculussieboldii、Pisitiastratiotes、RubiacordifoliaLinn.、GlechomalongitubaEthanolextract9植物水提取物對溫和氣單胞菌的抑菌圈直徑Table9Inhibitionzonediameterofthewaterextractsagainstnt

濃度 綬 Solanumnigrum 蒲公 繁 活血 Spiranthes lariaGlechoma注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的數(shù)Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level. HerbaTaraxaciEthanolextract

SolanumnigrumEthanolSpirantheswater

GlechomaEthanolSpiranthesEthanol圖9綬草、空心蓮子草、蒲公英、活血丹、水提取物的抑菌圈直Fig.9InhibitionzonediameterofSpiranthessinensis、Alternantheraphiloxeroides、HerbaTaraxaci、Glechomalongituba、SolanumnigrumL.waterextract36種不同植物提取物對溫和氣單胞菌的抑菌圈的直徑（表弧菌均未檢測出抑菌活性。和毛茛的乙醇提取物抑菌活性強，濃度為200mg/mL200mg/mL10mm。10植物乙醇提取物對副溶血弧菌的抑菌圈直徑Table10InhibitionzonediameterofthealcoholextractsagainstVibrio

濃度ntntAlternanthera菱TrapabispinosaSolanumnigrumRubiacordifoliaPortulacaoleraceaRanunculusGlechomaDichondrarepens注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的數(shù)據(jù)表Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level.GlechomaEthanol菱TrapabispinosaEthanol

SolanumnigrumEthanolRanunculusEthanol

RubiacordifoliaEthanolAlternantheraEthanol圖10毛茛、空心蓮子草、茜草、活血丹、、菱乙醇提取物的抑菌圈直Fig.10InhibitionzonediameterofRanunculussieboldii、Alternantheraphiloxeroides、RubiaLinn.、Glechomalongituba、SolanumnigrumL.、TrapabispinosaRoxb.Ethanol11植物水提取物對副溶血弧菌的抑菌圈直徑Table11InhibitionzonediameterofthewaterextractsagainstVibrio

濃度 nt nt 空心蓮子 綬 Solanumnigrum 繁 活血 SpiranthesSlariamediaGlechomalongituba注:6mm的瓊脂孔;Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level.菱菱11Fig.11InhibitionzonediameterofSpiranthessinensis、S lariamedia、Glechomalongituba、TrapabispinosaRoxb.waterextract植物提取物對動物致病菌的抑菌活性實驗表明，芡實、菱、茜草和的乙醇提取物4312種萃取物和抗生素氯霉素對金黃色葡萄球菌的抑菌圈的直徑、最小抑菌濃度和最小殺菌濃度(表12，表2.5mg/mL。12植物乙醇提取物的萃取物對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑（Mean±SD)Table12InhibitionzonediameteroftheextractantsfromethanolextractagainstStaphylococcusExtractantandPetroleumetherextractantofethanolextractfromEuryaleferoxEuryaleferoxEthanolExtractEthylAcetateExtract

濃度 b b EuryaleferoxEthanolextractN-butanolextractTrapabispinosaethanolextractofpetroleumetherextractTrapabispinosaEthanolExtractEthylAcetateExtractbTrapabispinosaEthanolextractN-butanolextractRubiacordifoliaethanolextractofpetroleumetherextracRubiacordifoliaEthanolExtractEthylAcetateExtract

db bRubiacordifoliaEthanolRubiacordifoliaEthanolextract butanolSolanumnigrumethanolextract petroleumetherSolanumnigrumEthanol EthylAcetateSolanumnigrumEthanolextract butanol1.00%氯霉 注:6mm的瓊脂孔;標有相同字母的數(shù)據(jù)表示沒有顯著差異，標有不同字母的數(shù)Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level.13植物乙醇提取物萃取物及抗生素對金黃色葡萄球菌最小抑菌濃度 ntethanolextractextractandantibioticsonStaphylococcusaureusminimuminhibitory

濃度 Extractantand 5EuryaleExtractantand 5Euryaleferox.ethanolextractofpetroleum -﹢﹢﹢Euryaleferox.EthanolExtractEthyl ﹢﹢﹢﹢芡實乙醇提取物正丁醇萃取 ﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.ethanolextract ﹢﹢﹢﹢TrapaTrapabispinosaRoxb.EthanolExtract -﹢﹢﹢AcetateTrapabispinosaRoxb.EthanolextractN- ﹢﹢﹢﹢RubiacordifoliaLinn.ethanolextract ﹢﹢﹢﹢petroleumetherRubiacordifoliaLinn.EthanolExtract ﹢﹢﹢﹢AcetateRubiacordifoliaLinn.EthanolextractN- ﹢﹢﹢﹢SolanumnigrumL.ethanolextractof ﹢﹢﹢﹢etherSolanumnigrumL.EthanolExtractEthyl ﹢﹢﹢﹢SolanumnigrumL.EthanolextractN- ﹢﹢﹢﹢1.00%氯霉 --﹢﹢1.00%注：“-”“+”表示平板上有細菌生長。Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthof14植物乙醇提取物萃取物及抗生素對金黃色葡萄球菌最小殺菌濃度 ntethanolextractextractandantibiotictoStaphylococcusaureusminimumbactericidal

濃度 Extractantand5Euryaleferox.ethanolextractofpetroleumetherextract--﹢﹢﹢Euryaleferox.EthanolExtractEthylAcetate-﹢﹢﹢﹢Euryaleferox.EthanolextractN-butanol﹢﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.ethanolextractofpetroleumetherextract﹢﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.EthanolExtractEthylAcetateExtract--﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.EthanolextractN-butanolextract﹢﹢﹢﹢﹢RubiacordifoliaLinn.ethanolextractofpetroleumetherextract-﹢﹢﹢﹢RubiacordifoliaLinn.EthanolExtractEthylAcetateExtract﹢﹢﹢﹢﹢RubiaRubiacordifoliaLinn.Ethanolextract ﹢﹢﹢﹢butanolSolanumnigrumL.ethanolextract ﹢﹢﹢﹢petroleumetherSolanumnigrumL.EthanolExtract ﹢﹢﹢﹢AcetateSolanumnigrumL.EthanolextractN- ﹢﹢﹢﹢1.00%氯霉 --﹢﹢1.00%注：“-”表示細菌生長受到完全抑制；“+”表示平板上有細菌生長.Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthofbacteria.對芡實、菱、茜草和4種植物的乙醇提取物分別采用石油醚、乙酸乙酯和正丁200mg/mL1.00%氯霉素的均為5mg/mL，茜草乙醇提取物乙酸乙酯萃取物最低抑菌濃度和最小殺菌濃度均為10mg/mL，1.00%5mg/mL。15植物乙醇提取物萃取物及抗生素對大腸桿菌的抑菌圈直徑（Mean±SE)Table15InhibitionzonediameteroftheextractsagainstEscherichiacoliExtractantExtractantandEuryaleferox.ethanolextractofpetroleumetherextractEuryaleferox.EthanolExtractEthylAcetateExtractEuryaleferox.EthanolextractN-butanolextractTrapabispinosaRoxb.ethanolextractofpetroleumetherextractTrapabispinosaRoxb.EthanolExtractEthylAcetateExtract

濃度 TrapabispinosaRoxb.EthanolextractN-butanolextractRubiacordifolia extractofpetroleumetherRubiacordifolia ExtractEthylAcetateRubiacordifolia extractN-butanolSolanumnigrumL.ethanol ofpetroleumetherSolanumnigrumL.Ethanol EthylAcetateSolanumnigrumL.Ethanol N-butanol1.00%氯霉 1.00%注:6mm的瓊脂孔;Note:Theresultsincludethediameteroftheagarwell(6mm);Thesamesuperscriptlettermarkedinthetablemeansnosignificantdifferenceamongthemandthedifferentsuperscriptlettermarkedinthetablemeanssignificantdifferenceat0.05or0.01level.16 ntethanolextractextractandantibioticsonEscherichiaminimuminhibitory

濃度 Extractantand5Euryaleferox.ethanolextractofpetroleumetherextract﹢﹢﹢﹢﹢Euryaleferox.EthanolExtractEthylAcetateExtract﹢﹢﹢﹢﹢Euryaleferox.EthanolextractN-butanol﹢﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.ethanolextractofpetroleumetherextract﹢﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.EthanolExtractEthylAcetateExtract-﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.EthanolextractN-butanolextract﹢﹢﹢﹢﹢RubiacordifoliaLinn.ethanolextractofpetroleumetherextrac﹢﹢﹢﹢﹢RubiacordifoliaLinn.EthanolExtractEthylAcetateExtract﹢﹢﹢﹢﹢RubiaRubiacordifoliaLinn.Ethanolextract ﹢﹢﹢﹢butanolSolanumnigrumL.ethanolextract ﹢﹢﹢﹢petroleumetherSolanumnigrumL.EthanolExtract ﹢﹢﹢﹢AcetateSolanumnigrumL.Ethanolextract ﹢﹢﹢﹢butanol1.00%氯霉 -﹢﹢﹢1.00%注：“-”表示細菌生長受到完全抑制；“+”表示平板上有細菌生長.Note：meansnoantibacterialactivity;meansgrowthofbacteria.17植物乙醇提取物萃取物及抗生素對大腸桿菌最小殺菌濃度 ntethanolextractextractandantibiotictoEscherichiacoliMinimumbactericidal

濃度 Extractantand 5Euryaleferox.ethanolextractof ﹢﹢﹢﹢etherEuryaleferox.EthanolExtractEthyl ﹢﹢﹢﹢Euryaleferox.EthanolextractN- ﹢﹢﹢﹢TrapabispinosaRoxb.ethanolextract ﹢﹢﹢﹢petroleumetherTrapabispinosaRoxb.Ethanol ﹢﹢﹢﹢EthylAcetateTrapabispinosaRoxb.Ethanolextract ﹢﹢﹢﹢butanolRubiacordifoliaLinn.ethanolextract ﹢﹢﹢﹢petroleumetherRubiacordifoliaLinn.EthanolExtract ﹢﹢﹢﹢AcetateRubiacordif