腫瘤的生物治療惡性腫瘤的免疫和基因治療

EdwardJenner現代免疫學奠基人牛痘的發(fā)明者(1796)當前第1頁\共有33頁\編于星期四\11點細胞免疫的基本概念Tumorcell當前第2頁\共有33頁\編于星期四\11點為什么腫瘤細胞能夠逃避

機體的免疫監(jiān)控？腫瘤細胞合成免疫抑制因子癌細胞表面缺乏MHCII分子腫瘤細胞低表達MHCI分子由于缺乏第二信號導致免疫耐受機體的免疫監(jiān)視功能低下(抗原遞呈效率下降）當前第3頁\共有33頁\編于星期四\11點腫瘤免疫反應免疫系統能夠識別腫瘤抗原并產生免疫反應。體液免疫在腫瘤病人普遍存在，但不起主要作用。細胞免疫:殺傷性T細胞(CD8+)輔助性T細胞(CD4+)。當前第4頁\共有33頁\編于星期四\11點免疫治療的主要分類非特異性主動免疫治療

細胞因子（白介素2，干擾素，腫瘤壞死因子）胞壁佳短小棒狀桿菌卡介苗高聚金葡素單克隆抗體(美羅華、赫賽叮、西妥昔、貝伐）過繼免疫治療(TIL細胞、CIK細胞、LAK細胞)當前第5頁\共有33頁\編于星期四\11點特異性主動免疫治療

核酸疫苗(DNA,RNA)腫瘤細胞疫苗抗原蛋白疫苗或多肽疫苗（包括基因重組蛋白）樹突狀細胞疫苗免疫治療的主要分類當前第6頁\共有33頁\編于星期四\11點干擾素用法：300-900萬單位，每周2-3次，連續(xù)使用8周①抑制腫瘤細胞的增殖；②誘導NK細胞、CTL，并協同IL-2增強LAK的活性；③誘導腫瘤細胞表達MHC-Ⅰ類抗原，增加對殺傷細胞的敏感性。適應癥：聯合化療治療毛細胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤、腎癌、惡性黑色素瘤和淋巴瘤的治療有效。當前第7頁\共有33頁\編于星期四\11點白介素-2用法：40-80萬單位，每周2-3次,皮下或局部注射特點：對惡性黑色素瘤、腎癌有效有效率大約在20%左右對其它惡性腫瘤的治療效果不明顯。

局部應用比全身應用效果好。當前第8頁\共有33頁\編于星期四\11點腹腔灌注IL-2治療卵巢癌（II期臨床）方法：IL-260萬單位/m21/周共十六周病人：泰素、順鉑抗拒的卵巢癌病人31例副作用：可耐受，無IL-2相關的3/4級毒性結果：24可評價病人中4CR,2PR,7SD,11PD總有效率25.0%R.P.Edwards,etalASCO2003當前第9頁\共有33頁\編于星期四\11點腫瘤壞死因子用法：100-400萬單位，每周2-3次,肌肉或局部注射特點：野生型有嚴重的毒副作用國內改構型已上市聯合化療對肺癌和淋巴瘤可提高療效真正的臨床應用價值還有待進一步評價。當前第10頁\共有33頁\編于星期四\11點單克隆抗體又稱之為生物導彈技術，通過補體系統和自然殺傷細胞起抗腫瘤作用。

嵌合型單抗達到95％以上人源化,減少了免疫原性美羅華－治療惡性淋巴瘤赫賽汀－治療乳癌，聯合化療增強療效當前第11頁\共有33頁\編于星期四\11點單克隆抗體貝伐是針對VEGF的單克隆抗體,除了對腫瘤細胞的殺傷作用外,還可以封閉血管內皮生長因子。西妥昔是針對EGFR的單克隆抗體，抑制細胞信號傳導通路，通過補體和細胞依賴的免疫反應殺傷腫瘤單抗也可以與同位素或毒素耦聯，通過靶向作用將放射性同位素或細菌毒素聚集腫瘤組織內，達到抗腫瘤目的。當前第12頁\共有33頁\編于星期四\11點MAbNameTradeNameUsedtoTreat:Approvedin:RituximabRituxanNon-Hodgkinlymphoma1997TrastuzumabHerceptinBreastcancer1998Gemtuzumabozogamicin*MylotargAcutemyelogenousleukemia(AML)2000AlemtuzumabCampathChroniclymphocyticleukemia(CLL)2001Ibritumomabtiuxetan*ZevalinNon-Hodgkinlymphoma2002Tositumomab*BexxarNon-Hodgkinlymphoma2003CetuximabErbituxColorectalcancer2004BevacizumabAvastinColorectalcancer2004*conjugatedmonoclonalantibodies

美國FDA批準的單克隆抗體當前第13頁\共有33頁\編于星期四\11點過繼免疫治療Rosenberg八十年代首創(chuàng)了LAK細胞，TIL取自浸潤淋巴細胞在LAK細胞的基礎上得到進一步提高迄今為止在臨床上應用最為廣泛的過繼免疫治療特點：繁瑣的制備過程和嚴重的副作用限制了臨床上推廣治療療效有限CD3AK和CIK的問世沒有產生新的局面對惡性黑色素瘤、腎癌、癌性胸腹水的治療效果比較好當前第14頁\共有33頁\編于星期四\11點特異性主動免疫治療－腫瘤疫苗細胞瘤苗：最常采用轉基因腫瘤制備；分子疫苗：單獨的分子抗原性弱，需要佐劑；多肽疫苗：8-10個氨基酸的多肽是T細胞識別的基礎；重組蛋白疫苗：與細胞因子、毒素等重組形成融合蛋；病毒疫苗：用病毒作為載體進行蛋白的表達；樹突狀細胞疫苗：抗原需要被提呈并致敏原始T-淋巴細胞，需要樹突狀細胞，是獲得有效免疫反應的關鍵。當前第15頁\共有33頁\編于星期四\11點體內最強大抗原遞呈細胞樹突狀細胞當前第16頁\共有33頁\編于星期四\11點樹突狀細胞的分離培養(yǎng)激活血細胞分離細胞培養(yǎng)抗原沖擊細胞回輸當前第17頁\共有33頁\編于星期四\11點樹突狀細胞對抗原的遞呈MHCI途徑激活CD8＋T細胞MHCII途徑激活CD4＋T細胞外源性蛋白內源性蛋白當前第18頁\共有33頁\編于星期四\11點抗原沖擊DC治療乳腺癌（I/II期臨床）病人：高表達HER2的轉移性乳腺癌病人16例方法：

HER500沖擊的自體APC2108to5109，二周一次，共三次。

副作用：主要為寒戰(zhàn)和發(fā)熱，沒有?級的毒副反應結果：

12個可評價的病人1例PR結論：

HER500沖擊的自體DC使用安全，有一定療效，但效率仍不夠高。J.W.Kylstra,etal.ASCO2003當前第19頁\共有33頁\編于星期四\11點CEA病毒感染的DC（I期臨床）方法：表達CEA禽痘病毒感染的DC（5106），

每周二次，一個月一個療程，1－3療程病例數：6個病人副作用：沒有明顯的毒副作用結果：一個病人CEA水平從46降低到6.8，并有鎖骨上淋巴結的部分退縮。5/6個病人外周血淋巴細胞對CEA表達的載體有增殖反應。

M.A.Morse,ASCO2003當前第20頁\共有33頁\編于星期四\11點細胞溶解物沖擊的DC（I/II期臨床）病人：轉移性腎癌15例方法：腫瘤細胞溶解物沖擊的DC3.95106

淋巴結內注射副作用：無明顯的毒副作用結果：7例進展，7例穩(wěn)定，1例部分退縮(14.4106)結論：腫瘤細胞溶解物沖擊的DC，即使在有大負荷腫瘤時也有效，在大劑量使用時更有效，無毒副作用。

MartenA,etal.CancerImmunolImmunother.2002;51:637-44當前第21頁\共有33頁\編于星期四\11點蛋白分子靶向疫苗的優(yōu)勢特異性與DC結合與病毒體外激活具同樣效率。費用低廉，可大規(guī)模生產，制作比病毒更簡單。為重組蛋白，不存在安全性問題。皮下給藥，使用方便。可重復使用。當前第22頁\共有33頁\編于星期四\11點熱休克蛋白疫苗臨床試驗III期：１．腎癌２．惡性黑色素瘤全球有150醫(yī)學中心在收集病例進行腫瘤抗原－熱休克蛋白復合物疫苗臨床實驗I、II期：１．慢性髓性白血?。玻馨土觯常认侔矗赴?、大腸癌當前第23頁\共有33頁\編于星期四\11點當前第24頁\共有33頁\編于星期四\11點DCs疫苗對惡性黑色素瘤和腎癌，總有效率大約在30-40％；其它腫瘤方面有效率在10-30％左右；是所有方案中比較理想的疫苗；需要很高的技術要求，離推廣應用還有一段距離；目標是預防術后復發(fā)，使40%的病人得到根治。當前第25頁\共有33頁\編于星期四\11點免疫治療的臨床地位免疫治療是最有前途的抗腫瘤手段之一目前尚未起主導作用定位于手術、放化療后清除殘留病灶目標是預防復發(fā)關鍵是抗原在體內有效地被遞呈并激活T淋巴細胞當前第26頁\共有33頁\編于星期四\11點基因治療(Genetherapy)用正?；蛐Ｕ蛑脫Q致病基因過程是將目的基因導入到靶細胞內并使之表達目標是直接或間接消滅腫瘤細胞概念的擴展：采用分子生物學的方法和原理，在核酸水平上開展的疾病治療方法都可稱為基因治療。當前第27頁\共有33頁\編于星期四\11點基因治療策略基因增補（Geneaugmentation）又稱基因修飾，目的基因的表達產物能修飾或加強缺陷細胞的功能基因滅活（Geneinactivation）：利用反義核酸技術或核酶特異地封閉基因表達或降解轉錄產物前體藥轉換（Prodrugacitvation）：采用給予前體藥物的方法減少化療藥物對正常細胞的損傷。當前第28頁\共有33頁\編于星期四\11點基因治療的途徑體外途徑：安全，但操作煩瑣，設備要求比較高體內途徑：基因導入所使用的載體的安全性需要進行復雜的論證。當前第29頁\共有33頁\編于星期四\11點自殺基因治療HSV-TK/GCV系統

tk基因多為單純皰疹病毒（HSV）和水痘皰疹病毒（VZV）中的胸苷激酶基因。毒性效應來自于GCV磷酸化其通過抑制DNA聚合酶的活性，阻斷DNA的合成VZV-TK激酶能將6－甲氧嘌呤阿拉伯糖苷（ara-M）轉化為6－甲氧嘌呤阿糖苷腺苷三磷酸（ara-MTP）CD-5-FC系統

人及其他哺乳動物中不表達CD酶可將胞嘧啶脫氨基轉變?yōu)槟蜞奏じ邉┝康?-FC在體內轉變?yōu)?-FU從而將細胞殺傷作用。當前第30頁\共有33頁\編于星期四\11點自殺基因治療的缺點①只對處于分裂期的腫瘤細胞有殺傷作用,而瘤體內有相當數量的細胞群體處于非增殖分裂狀態(tài)。②腫瘤細胞的異質性使得有些細胞克隆對自殺基因系統的敏感性不同。③基因轉移的效率還很低，無法使所有的腫瘤細胞均能被導入相應的目的基因。④某些腫瘤特異的表達元件的活性較低，不足以表達足夠的自殺基因產物。